Как сдать анализы на ВИЧ ПЦР? Анализы на ВИЧ-инфекцию: особенности процедуры и расшифровка результатов Анализ пцр на вич достоверность.

ПЦР (полимеразная цепная реакция) представляет собой метод молекулярной генетики, который позволяет анализировать любую короткую последовательность ДНК (или РНК) даже в образцах, содержащих только мельчайшие количества ДНК или РНК, тем самым определив наличие/отсутствие патогенного возбудителя (определить, например есть ли в человеке вирус ВИЧ или гепатита Б или микобактерии туберкулёза). ПЦР используется для воспроизведения/умножения/клонирования (амплификации) выбранных участков ДНК или РНК для анализа.

Метод ПЦР настолько прост, что его может поставить даже школьник)

Раньше амплификация ДНК включала клонирование сегментов, представляющих интерес, в векторы для экспрессии в бактериях и занимала недели. Но теперь, когда ПЦР делается в пробирках, требуется всего несколько часов . ПЦР является высокоэффективной , так что из ДНК может быть сделано огромное количество копий.

Последовательность ДНК и соответствие нуклеотидов.

Да не оскудеет рука дающего

Проект «СПИД.ВИЧ.ЗППП.» — некоммерческий, созданный добровольцами-экспертами в области ВИЧ/СПИДа за счет своих собственных средств, чтобы донести правду людям и быть чистыми перед своей профессиональной совестью. Будем благодарны за любую помощь проекту. Да воздастся Вам в тысячи крат: ПОЖЕРТВОВАТЬ .

Более того, ПЦР использует те же молекулы, которые природа использует для копирования ДНК:

• Два «праймера», коротких одноцепочечных последовательностей ДНК, которые синтезируются так, чтобы соответствовать началу и концу растяжения ДНК, подлежащей копированию.
• Фермент, называемый полимеразой, который перемещается вдоль сегмента ДНК, считывает его код и собирает копию.
• Куча блоков ДНК, которые необходимо сделать этой полимеразе.

То есть ПЦР — это такая техника при которой частицы ДНК (иногда РНК) умножаются в определенном растворе или на специальной поверхности, где они могут быть депонированы.

ПЦР — это метод, с помощью которого учёные могут находить иглу в стоге сена и затем строить стог из этих игл.

задача ПЦР как метода — умножить (амплифицировать), сделать как можно больше их копий, чтобы можно было идентифицировать кому они могут принадлежать (определенному человеку, животному или патогенному организму), даже если есть только следы наличия ДНК/РНК.

Однако ПЦР-амплификация является лишь частью диагностического теста. После проведения амплификации амплифицированные сегменты необходимо сравнить с другими нуклеотидными сегментами , но уже из известного источника (например, конкретного человека, животного или патогенного организма). Это сравнение уникальных сегментов часто выполняется путем размещения нуклеотидных последовательностей, сгенерированных ПЦР, рядом с известными нуклеотидными последовательностями от людей, патогенов или других источников в специальном геле.

Когда электрический ток проходит через гель, то различные нуклеотидные последовательности образуют полосы, которые напоминают «лестницу» в соответствии с их электрическим зарядом и молекулярным размером. Это называется гель-электрофорез. Они мигрируют на одни и те же уровни в геле, показывая идентичность нуклеотидных последовательностей. Этот метод является одним из самых популярных последних этапов ПЦР-тестов.

Как ПЦР работает?

В 1983 году Кари Муллис разработал основные этапы по амплификации ДНК-последовательностей. Он и Майкл Смит были удостоены Нобелевской премии за создание ПЦР в 1993 году.

ПЦР проводится в одной пробирке с соответствующими химическими веществами и при определенной температуре нагревания.

Необходимы следующие реагенты или химикаты:

• Образец, содержащий нуклеотидную последовательность (из крови, волос, гноя, кожи и т. д.).
• ДНК-праймеры: короткая одноцепочечная ДНК, которая присоединена к нуклеотидным последовательностям, которая способствует синтезу комплементарной цепи нуклеотидов.
• ДНК-полимераза: фермент, который, когда ДНК связывается с праймером, спускается по фрагменту ДНК с добавлением структурных блоков ДНК для образования комплементарных пар оснований и, таким образом, синтезирует комплементарную нуклеотидную цепь ДНК (введение термостойкой ДНК-полимеразы, Taq-полимеразы, полученной из термостойких бактерий, заметно улучшает способность к ПЦР).
• Большой избыток структурных блоков ДНК, называемых нуклеотидами (аденин, тимидин, цитозин и гуанин, сокращенные как: A, T, C и G соответственно) в растворе. Когда эти блоки соединены вместе, они образуют нуклеотидную последовательность или одну нить ДНК. Когда эти строительные блоки связывают свой комплементарный строительный блок слабыми водородными связями (например, A будет связываться только с T и G только с C) образуется комплементарная нуклеотидная последовательность ДНК, которая связана с исходной одноцепочечной ДНК. Когда связывание завершается, комплементарная ДНК с двойной цепью образуется в определенной последовательности.

Кари Муллис очень интересный, прикольный дядечка, посмотрите как он интересно рассказывает, как он придумал ПЦР:

Он верит в астрологию, но не верит, что ВИЧ вызывает СПИД.)

Затем полимеразно-цепная реакция начинается с сегмента ДНК из образца, который помещается в пробирку с указанными выше реагентами. Раствор нагревают до 94°С. Нагревание разрушает водородные связи, которые позволяют образовывать комплементарные цепи ДНК, поэтому в смеси существуют только одиночные нити (это называется денатурацией двухцепочечной ДНК).

Смеси дают остыть до 54°C. При этой температуре ДНК-праймеры и ДНК-полимераза связываются с отдельной одноцепочечной ДНК (это называется отжигом ДНК). Поскольку строительных блоки в избытке (высокая концентрация) в смеси, полимераза использует их для создания новых комплементарных нитей ДНК (называемых расширением ДНК), и этот процесс происходит быстрее при 72°C. Этот процесс создает новую двухцепочечную молекулу ДНК из каждой из одиночных нитей исходной молекулы.

Этот цикл повторяется примерно 40 раз в машине, называемой термическим циклером (термосайклером), который автоматически повторяет циклы нагрева-охлаждения, при этом количество каждой последовательности ДНК удваивается каждый раз, когда цикл нагрева-охлаждения завершается. То, что изначально было одним коротким сегментом ДНК, можно было увеличить до примерно 100 миллиардов копий после 40 циклов удвоения.

Когда необходим тест на ПЦР?

Тест на ПЦР является основой для ряда тестов, которые могут отвечать на многие различные медицинские вопросы, которые помогают врачам диагностировать и лечить пациентов. Например, тесты ПЦР могут обнаруживать и идентифицировать патогенные организмы у пациентов, особенно тех, которые трудно культивировать (например, ВИЧ и другие вирусы и некоторые грибы ).

Одни врачи назначают ПЦР-тесты, чтобы помочь диагностировать генетические заболевания , в то время как другие врачи используют ПЦР для обнаружения биологических родственных отношений, таких как идентификация родителей детей . ПЦР-тесты также используются для идентификации и характеристики генетических мутаций и перегруппировок, обнаруженных при определенных раковых заболеваниях .

Тем не менее, ПЦР-тесты были модифицированы и внедрены во многие аспекты научных исследований, включая эволюционную биологию, генетическую отпечатку пальцев, судебно-медицинские исследования и многие другие.

Что такое ОТ-ПЦР?

Обратно-транскриптазный ПЦР (RT-PCR) — это тест на ПЦР, который предназначен для обнаружения и измерения количества РНК. Хотя первоначальные тесты ПЦР амплифицировали ДНК, многие вирусы и другие биологические компоненты (например, митохондрии) используют РНК в качестве своего генетического материала. RT-PCR отличается от обычной ПЦР сначала взятием РНК и превращением нити РНК в нить ДНК. Это делается по существу тем же самым методом для ПЦР, описанным выше, за исключением использования фермента, называемого обратной транскриптазой, вместо ДНК-полимеразы.

Обратная транскриптаза позволяет перевести одну нить РНК в комплементарную цепь ДНК. Как только эта реакция происходит, рутинный метод ПЦР можно затем использовать для амплификации ДНК. RT-PCR используется для обнаружения и изучения многих РНК-вирусов. RT-PCR не следует путать с другим вариантом ПЦР, называемым ПЦР в реальном времени (реал-тайм).

ПЦР в реальном времени представляет собой вариацию ПЦР, которая позволяет анализировать амплифицированную ДНК в течение обычных 40 циклов процедуры. Хотя процедура аналогична обычной ПЦР с циклированием, ПЦР реального времени использует флуоресцентные красители, прикрепленные к некоторым из строительных блоков или небольших нуклеотидных нитей. В зависимости от используемого метода флуоресценция возникает, когда образуются амплифицированные нити ДНК. Количество флуоресценции можно измерить на протяжении 40 циклов и позволяет исследователям измерять определенные продукты и их количества во время циклов амплификации.

Это часто позволяет исследователям или техническим специалистам пропускать гель-электрофорез или другие вторичные процедуры, необходимые для анализа продуктов ПЦР, тем самым обеспечивая более быстрые результаты. ПЦР в реальном времени и RT-PCR являются вариациями или модификациями исходного теста ПЦР. Тем не менее, существует еще много вариантов (не менее 25), которые существуют и используются для решения конкретных проблем. Все они имеют разные названия, такие как сборка ПЦР, ПЦР с горячим началом, мультиплексная ПЦР, твердотельная ПЦР и многие другие.

Что такое ПЦР анализ на ВИЧ?

ПЦР (полимеразная цепная реакция) — метод умножения генетического материала вируса, анализ, который определяет генетический материал вируса — РНК или ДНК ВИЧ.

Если вирус содержится в минимальном значении, то в результате реакции это количество многократно увеличивается. Поэтому ПЦР имеет высокое диагностическое значение.

Обычно этот тест используется для определения ВИЧ в донорской крови или для раннего определения наличия ВИЧ в организме до выработки специфических антител к ВИЧ. Специфические антитела определяют обычные тесты на ВИЧ (ИФА), но только через 1-3, редко 12 месяцев после заражения. А с помощью ПЦР можно дать достаточно точный ответ через 14 дней с достоверностью 98% и даже через 5 дней, но тогда достоверность будет 80%. ПЦР на ВИЧ — это дорогой и более трудоемкий анализ, чем ИФА, поэтому его используют не всем подряд , а только по особым показаниям (доноры, пострадавшие от медицинской аварии с ВИЧ-инфицированным) или платно.

Качественный ПЦР анализ на ВИЧ — определяет есть вирус ВИЧ-1/ВИЧ-2 или его нет, но он не определяет количество копий вируса (для определения количества используется количественный ПЦР). Качественный ПЦР НЕ делают тем у кого известен диагноз «ВИЧ-инфекция». Его делают только тем, у кого пока неизвестно — инфицирован он ВИЧ или нет.

Это метод определения комплиментарного участка ДНК в геноме клетки лимфоцита пораженного ВИЧ. Т.е. определяется не сам вирус, а материал, который вирус встраивает в клетку. В ядре клетки уже будет храниться его ДНК из которой он потом будет считываться и размножаться (копировать самого себя).

Количественный ПЦР анализ на ВИЧ

Количественный ПЦР анализ на РНК ВИЧ — определяет количество копий РНК вируса в крови (для определения вируса в клетках используют ПЦР ДНК, например у детей). Делается только у ВИЧ-инфицированных , для контроля лечения, определения выраженности процесса развития болезни, эффективности лечения.

Через сколько времени после заражения можно обнаружить ВИЧ с помощью метода ПЦР?

Через сколько дней можно сдавать ПЦР на ВИЧ после контакта с ВИЧ положительным партнёром?

ВИЧ с помощью ПЦР можно обнаружить через 4-14 дней после заражения. Отрицательный результат ПЦР на ВИЧ достоверен после 14 дней после рискованного контакта, но по действующим нормативам всё равно требуется обследование с помощью .

Чем отличается ПЦР ДНК от ПЦР РНК ВИЧ?

РНК обычно используется в количественных тестах для оценки вирусной нагрузки у диагностированных лиц, например, для оценки эффективности терапии.

ДНК - в мононуклеарных клетках, например, для диагностики у детей, там, где антитела к ВИЧ матерей мешает использовать метод ИФА.

И тот и другой тест могут быть и количественными, и качественными.

И тот, и другой можно в особых случаях применить диагностики, но с учетом конкретных ограничений, которые накладывают технические параметры системы, т.е. по назначению врача.

Может ли ПЦР на ВИЧ быть ложноположительным, причины?

Если всё сделано правильно : медсестра не перепутала пробирки, посмотрела паспорт, прежде, чем делать забор крови, правильно промаркировала пробирку, правильно выписала направление и т.д., а специалист лаборатории (обычно это врач-лаборант) сделал всё согласно инструкции, им были соблюдены все требования лабораторного регламента (например, правильно «расскапал» биоматериал, без перекрестной контаминации (загрязнения) и т.д.) и была использована качественная тест-система, ТО ПЦР ложноположительным быть МОЖЕТ только в 2% случаях (это связано с чувствительностью используемых тест-систем) .

Но если были допущены ошибки со стороны персонала медицинского учреждения, ТО ПЦР может быть ложноположительным, более чем в 2% случаев.

Как сдается ПЦР на ВИЧ?

Для исследования на ВИЧ методом ПЦР сдаётся кровь из вены, желательно (но необязательно) утром натощак.

Где можно сдать анализы на ПЦР ВИЧ?

Для этого нужно ввести в поиск Вашего браузера «сдать пцр вич» и добавить в запрос Ваш населенный пункт и Вы увидите организации, которые занимаются у Вас исследованиями на ПЦР.

Например,

Сколько стоит анализ на ВИЧ методом ПЦР?

Около 1,5-3 тыс. руб. в зависимости от региона.

Какова достоверность результатов ПЦР анализа на ВИЧ?

Через 14 дней после заражения достоверность ПЦР на ВИЧ составляет 100%, с 4-5 дня — достоверность 80%.

Сколько времени делается анализ ПЦР на ВИЧ?

Технически 4-6 часов , но в реальности зависит от организации работы лаборатории и обычно результат выдается через 2-3 дня.

ПЦР на ВИЧ у новорожденного ребенка

Так как у ребёнка до 1,5 лет рожденного от ВИЧ+ матери сохраняются её антитела против ВИЧ, то определить заражен ВИЧ ребенок или нет с помощью ИФА невозможно. В такой ситуации используется ПЦР:

• Если у ребенка возрастом 1 мес с помощью ПЦР обнаружили вирус, значит он заразился.
• Если у ребенка в 1-2 месяца и 4-6 месяцев ПЦР отрицательная, то при условии, что мать не кормила его своим грудным молоком — ребёнок здоров.

В чём разница между ПЦР и ИФА?

ПЦР определяет сам вирус, а ИФА реакцию (в виде антител) организма на вирус.

ПЦР быстрее определяет наличие вируса, чем ИФА.

Одним из наиболее точных и достоверных методов молекулярно — генетической диагностики считается ПЦР, то есть полимеразная цепная реакция. Такой метод позволяет диагностировать у пациента различные виды заболеваний наследственного и инфекционного характера.

ПЦР — исследование позволяет диагностировать одно из таких сложных заболеваний, как , которое трудно поддается лечения. Достоверность ПЦР на ВИЧ оправдывает себя лишь в 80 случаях из 100.

Основным способов диагностики ВИЧ-инфекции в организме человека считается его крови, то есть проводиться тестирование на это заболевание. Самым простым и привычным способом диагностики является взятие венозной крови и проведение ее в специальной лаборатории. Конечно, полученный положительный результат может быть ложным, поэтому проводится его перепроверка более точным исследовательским способом в референц -лаборатории.

Полимеразная цепная реакция на считается довольно дорогостоящей процедурой, и ее проведение требует наличия специального оборудования и высококвалифицированных специалистов. Именно по этой причине она не получила широкого распространения среди населения.

Применение ПЦР-анализа для диагностики ВИЧ позволяет получить точный и достоверный результат о наличии заболевания, однако, часто это зависит от подготовки самого пациента.

ПЦР-анализ проводиться в следующих случаях:

1. Диагностирование ВИЧ-инфекции у новорожденных детей, которые появились на свет от матери, зараженной СПИДОМ.
2. С целью контроля концентрации ВИЧ в крови пациента
3. Ссследование крови донора.

Даже в том случае, если ПЦР-исследование покажет положительный результат, то диагноз только по такому тесту не ставится. Чаще всего его используют в качестве дополнительного метода для разрешения спорных ситуаций.

ПЦР-анализ, к сожалению, нельзя назвать универсальным методом , проведение которого дает точные результаты на наличие либо отсутствие инфекции в организме человека. Это связано с тем, что именно такой вид исследования чаще других методов дает ложноположительные результаты. К такому методу диагностики прибегают при постановке диагноза заболевания либо при проведении на ВИЧ-инфекцию. Преимущественно его используют как вспомогательный метод диагностирования вируса СПИДа.

Однако, несмотря на вероятность ложноположительного результата, такое исследование на ВИЧ имеет ряд преимуществ перед другими методами диагностики. Проводить ПЦР–анализ можно уже на 11-15 день после даты предполагаемого заражения, а все остальные методы позволяют оценить наличие вируса СПИДа в организме человека лишь через длительный промежуток времени. Такая разбежка объясняется тем, что большинство скрининг тестов на ВИЧ основываются на определении к вирусу, образование которых происходит в течение трех месяцев.

Главным отличием ПЦР-исследования от остальных методов диагностики считается тот факт, что он выявляет не к вирусу, а наличие самого вируса в организме пациента.

Именно по этой причине метод полимерную цепную реакцию можно назвать идеальной в том случае, если имеется необходимость проведения преждевременного выявления . Кроме этого, прибегнуть к проведению такого метода можно в том случае, когда наличие антител не может являться достоверным показателем.

Больше информации о исследованиях на ВИЧ можно узнать из видео.

При необходимости выявления степени либо тяжести патологии в организме человека прибегают к проведению ПЦР-исследования количественным способом. Именно он позволяет получить информацию об уровне концентрации инфекции в организме больного. Прогрессирование болезни сопровождается постепенным увеличением концентрации вируса и количественная ПЦР-диагностика позволяет определить стадию инфекции и эффективность проводимого . Диагностирование «вирусной нагрузки» до выявления болезни и после проведения лечения позволяет сделать заключение о том, насколько эффективно проводиться лечение.

Другие методы диагностики на ВИЧ

На сегодняшний день диагностика ВИЧ-инфекции является стандартной процедурой, которая предполагает применение различных видов диагностики:

ИФА тест-системы

Проведение такого скринингового теста позволяет выявить вирус уже через несколько недель после его проникновения в организм человека. Такое исследование направлено не на определение присутствия вируса у пациента, а на диагностировании выработки антител к нему. Выделяется несколько поколений ИФА-тестов, каждая из которых имеет разную чувствительность. Такой тест иногда дает результаты, что объясняется неправильным проведением обработки и наличием в организме пациента различных видов патологий.

Иммунный блоттинг

В том случае, если иммунный блоттинг показывает положительный результат, то можно говорить о постановке окончательного диагноза ВИЧ. Основным способом его проведения является использование нироцеллюлозной полоски, на которую нанесены белки вирусного происхождения.

Экспресс-методы

Такой считается новинкой в области диагностирования ВИЧ-инфекции и оценивать результат можно уже через несколько минут после их проведения. Наиболее точные и достоверные результаты дают иммунохроматографичесие тесты, применение которых основывается на принципе капиллярного тока.

Говорить о наличии в организме ВИЧ–инфекции можно только после подтверждения тестов ИФА анализом ИБ.

Диагностирование ВИЧ-инфекции в организме человека вносит существенные изменения в его привычный образ жизни и отношения с окружающими. Обязанностью медицинского персонала является сохранение результатов анализов, и только сам пациент принимает решение о том, кому сообщить о своем заболевании. ПЦР — является одним из диагностических методов, позволяющих выявить присутствие вируса в организме человека всего за несколько недель.

Вирус иммунодефицита человека - одно из самых страшных заболеваний прошлого и нынешнего столетия. Его изучение, поиск вакцин и препаратов приносят определенные плоды. Однако полностью победить опасный недуг на сегодняшний день специалистам в области медицины не удалось. Современные методы диагностики позволяют не только выявить вирус иммунодефицита на ранней стадии, но и контролировать течение заболевания в дальнейшем. Для того, чтобы принять решение о необходимости применять ту или иную терапию, используется РНК ВИЧ-анализ. Применяется он и для выявления данного заболевания. Здесь важно отметить, что анализ РНК ВИЧ не является повсеместным. Применяют его лишь в случае необходимости. Как проводится такое исследование, в каких случаях его применяют и какова его достоверность?

Вирус ВИЧ по РНК: суть исследования

Прежде чем говорить о том, каким образом производится определение РНК ВИЧ, следует выяснить, что обозначает эта аббревиатура, и какую роль она играет в организме. Рибонуклеиновая кислота - это молекула, содержание которой отмечается во всех живых организмах и некоторых вирусных инфекциях. Синтез этой молекулы производится на основе матрицы дезоксирибонуклеиновой кислоты. Отвечают за эти процессы определенные ферменты. Это полимеразы рибонуклеиновой кислоты.

Суть исследования такого типа заключается в проверке генного материала вируса. Для того чтобы произвести РНК анализ на ВИЧ специалисты в области медицины используют полимеразную цепную реакцию. ПЦР позволяет многократно увеличить объемы используемого для исследования биологического материала, благодаря чему он проверяется в несколько этапов с использованием сравнительного метода. Стоит отметить, что используется ПЦР на РНК не только при ВИЧ. Такая методика позволяет выявить большое количество наследственных заболеваний, некоторые вирусы и инфекции. Применяется она и для определения наследственных генетических патологий. В качестве биологического материала используется сперма, слюна и кровь. В случае с вирусом иммунодефицита предпочтительным материалом считаются сыворотка и плазма крови.

Тест РНК ВИЧ производится в несколько этапов. После того, как у пациента осуществлен забор крови, она направляется в лабораторию. Биологический материал помещают в специальный реактор, где происходит его расщепление. Для синтеза применяют специальные ферменты. Далее в искусственно созданных условиях из одной молекулы РНК синтезируют две, из двух четыре и так далее. При достижении их нужного количества, происходит сравнение с разными типами вирусов. Кстати, на выходе из одной молекулы рибонуклеиновой кислоты получается несколько сотен или тысяч молекул. РНК ВИЧ ультрачувствительный бывает нескольких видов. Здесь все зависит от цели исследования.

РНК ВИЧ 20 ме/мл: точность и достоверность метода, виды

В современной медицине применяется два метода исследования рибонуклеиновой кислоты. Речь идет о количественном и качественном РНК ВИЧ. Оба эти способа исследования схожи, но несут они разные цели. РНК ВИЧ количественный - это определение вирусной нагрузки. Количество вирусных молекул генетической ткани может говорить о многом. В частности о том, на какой стадии находится заболевание в данный момент. Всем известно, что у вируса иммунодефицита их несколько. После наступления сероконверсии количество клеток вируса увеличивается, и его обнаружение становится возможным. На начальных этапах заболевания РНК ВИЧ количественный, норма которого устанавливается в лаборатории, позволяет не только обнаружить вирус иммунодефицита, но и принять решение о необходимости приема антиретровирусной терапии. Определив количественную вирусную нагрузку, специалист может принять решение о том, какую схему терапии необходимо использовать пациенту.

РНК ВИЧ качественный для новорожденных используется часто. Проводить его можно и у взрослых людей, например, для того, чтобы определить тип вируса. Но стоимость такого исследования не позволяет внедрить его во все медицинские учреждения. Поэтому применяют его в педиатрии и неонатологии.

Достоверность РНК ВИЧ, проводимого с чувствительностью 20 ме/мл, велика. Она составляет примерно девяносто один процент. Однако в современной медицине существуют методы, достоверность которых выше. Именно поэтому для определения наличия или отсутствия данного диагноза используется иммуноферментный анализ или иммунный блоттинг. Их достоверность несколько выше. Она составляет девяносто восемь - девяносто девять процентов.

Если говорить о самых оптимальных сроках проведения проверки, то медики назначают ее минимум через месяц после инфицирования. Если основная цель - определить, имеется ли у больного данный диагноз, проводить анализ РНК ВИЧ через 4 недели не стоит, достоверность его может быть неточной. Лучше сделать это через пять - шесть недель.

Если РНК ВИЧ не обнаружены, что это значит? Этот вопрос нередко задают специалистам в области медицины. Это может означать, что вирус иммунодефицита отсутствует, или говорит о том, что проверка была проведена слишком рано.

Обнаружение ВИЧ методом РНК у новорожденных: какова эффективность?

Предпочтительным методом проверки новорожденных на предмет наличия или отсутствия вируса иммунодефицита в том случае, если они родились у инфицированной матери, является анализ рибонуклеиновой кислоты. В этом случае РНК ВИЧ 20 ме/мл производится в первые 10 дней жизни малыша. Выявить наличие заболевания возможно и при помощи иммуноферментного анализа. Однако перед медиками стоит другая задача. Речь идет о необходимости определить, какие антитела вырабатывает организм малыша. Дело в том, что у младенца, рожденного от инфицированной матери, они будут в любом случае. Однако, иногда это всего лишь защита иммунной системы, а не факт заражения. Повторно достоверность ПЦР РНК ВИЧ проверяется через 6 месяцев.

Методами ИФА и ПЦР диагностируется ряд заболеваний, которые передаются половым путем.

При подготовке к обследованию пациентам в течение двух дней нежелательно употреблять жирную еду. Как и анализ крови на вирусы, пробы берутся натощак, последний прием пищи был не позднее 8 часов назад. Исключить из рациона жареное и алкоголь. Соблюдая эти несложные требования, вы приближаете результаты своих обследований к более точным.

В список выявляемых заболеваний входят:

• вирус папилломы человека (ВПЧ);
• хламидии;
• герпес (дополнительно назначается анализ крови на герпес);
• уреаплазма;
• микоплазма;
• гонорея;
• цитомегаловирус;
• трихомониаз;
• токсоплазмоз.

ПЦР на ВИЧ в диагностике на инфекции

В связи с тем, что нет известных симптомов, характерных исключительно для ВИЧ-инфекции, основываясь лишь на жалобах обратившегося пациента, произвести распознавание ВИЧ-инфекции не представляется возможным.

Тестирование на ВИЧ стало необходимостью, т.к. современное мнение общества об этой болезни сводится к тому, что СПИД считают смертельным приговором. Встречались такие случаи, что после нерегулярных сексуальных контактов человек уделяет повышенное внимание сигналам своего организма, находя, а зачастую придумывая все новые признаки смертельной болезни.

Проведение исследования в лабораторных условиях на сегодняшний момент единственный и самый надежный вариант диагностики (анализ крови на ВИЧ). Используют ПЦР для определения следующих проблем со здоровьем:

• для подтверждения или опровержения наличия ВИЧ в период серонегативного окна;
• при сомнительном результате иммуноблота (чтобы установить точное описание патологического процесса);
• при установлении генотипа ВИЧ-1 или ВИЧ-2;
• для установления и наблюдения за вирусной загруженностью организма;
• для выявления ВИЧ-статуса у новорожденных детей, матери которых являются носителями ВИЧ;
• при переливании крови.

Превосходство метода ПЦР при диагностировании инфекционных заболеваний:

При установлении у обратившегося за медицинской помощью пациента утвердительного результата на ВИЧ-инфекции начинают проводить более глубокие исследования больного для выяснения и уточнения характера заболевания и его течения, а также основания и характера вторичных болезней, уровня поражения иммунитета.

Анализы ИФА и ПЦР: особенности исследования, принципы и расшифровка

Кровь для проведения анализа берется из вены. В период беременности заборы крови на СПИД производятся в неукоснительном порядке. Выводы об отсутствии или присутствии в организме больного вируса иммунодефицита производятся по результатам наличия или отсутствия антител. ИФА нужно производить не сразу после подозрения на заражение, а спустя некоторое время, чтобы в крови пациента образовались антитела. Проходит по разным причинам от 3 недель до 3 месяцев.

Кроме того, выявлено, что результат ИФА может быть и ложноположительным и ложноотрицательным. При очень ранней диагностике на предполагаемую инфекцию, когда антитела к ВИЧ еще не появились, получается ложноотрицательный результат. В таких случаях для уточнения нужно пересдать кровь на ВИЧ по прошествии 1-3 месяцев.

Ложноположительный итог, напротив, может быть получен в случае, когда у обратившегося пациента есть хронические инфекции, онкологические болезни, аутоиммунные заболевания, кроме перечисленных возможны отклонения от нормы и в других ситуациях. Поэтому при утвердительном результате ИФА его непременно перепроверяют наиболее восприимчивыми способами.

ПЦР диагностика входит в ряды нынешних наиболее высокотехнологичных способов проведения исследований, достаточно часто используется при выявлении инфекционных заболеваний. Диагностирование ДНК вобрало в себя несколько различных способов проведения исследований, в большей степени популярен сегодня метод полимеразной цепной реакции, или ПЦР.

В основе этого метода лежит нахождение в тканях для микроисследования малой части ДНК возбудителя данной инфекции. При этом малая часть ДНК заключает в себе пары ДНК количеством до нескольких сотен, которые находятся в строгом порядке.

Метод ПЦР является наиболее точным, с его помощью возможно определение наличия вируса вне зависимости от того, появились антитела или нет. Но, несмотря на свою точность, метод имеет один серьезнейший недостаток, который как раз и вызван его повышенной точностью. Существует достаточно высокая вероятность, что результат окажется ложным. Поэтому в связи с этим методом и в дополнение к нему применяют иные способы для обнаружения генного и антигенного материалов.

Сущность диагностики гепатитов при помощи ПЦР

Существует пять доказанных вирусов, вызывающих болезни печени. Это известные вирусы гепатита А, В, С, D, Е. Очень редкими являются случаи, когда гепатит вызывается вирусом Эпштейна-Барр, который на деле является разновидностью герпеса. Перечисленные вирусы являются представителями разных семейств, что отражается на их лечении в зависимости от вида гепатита.

Опасное заболевание, которое вполне заслуженно называют «чумой двадцать первого века». Именно поэтому на борьбу с данным недугом тратятся огромные средства и ресурсы, как и на его исследование. Дело в том, что вирус иммунодефицита еще не до конца изучен. Новые открытия позволяют ученым разрабатывать вакцины и лекарственные средства для борьбы с ним. В современной медицине большое внимание уделяется и методам диагностики данного заболевания. Одним из наиболее эффективных способов выявления вируса врачи во всем мире признают ПЦР. На ВИЧ этот метод проводится посредством исследования ДНК. Что собой представляет данное исследование, какова его достоверность и как подготовиться к сдаче анализа?

Что представляет собой анализ на ВИЧ - ПЦР?

В первую очередь следует расшифровать данную аббревиатуру. Полимеразная цепная реакция (метод ПЦР на ВИЧ) - это диагностика, которая не нашла широко применения в бесплатной медицине в нашей стране. Причин тому несколько. Но основная заключается в том, что подобное исследование стоит недешево. При этом эффективность его составляет примерно восемьдесят процентов, когда у иммуноферментного анализа и иммунного блоттинга достоверность выше. Она составляет от девяноста пяти до девяноста восьми процентов. Естественно, выявить ВИЧ методом ПЦР можно. Он также используется и в других целях. С помощью исследования ДНК и РНК определяют генетические и наследственные заболевания, а также инфекционные и вирусные недуги.

Что представляет собой ПЦР на ВИЧ, достоверность которого, как уже было сказано выше, составляет всего восемьдесят процентов, и почему этот диагностический метод получил такое название? Для исследования такого типа используется несколько видов биологического материала. Это в первую очередь кровь, если речь идет о вирусе иммунодефицита. Также для забора анализа на ВИЧ методом ПЦР используются выделения из половых женских органов и сперма. Слюна в этом случае не исследуется. Поскольку это малоэффективно. В слюне содержится незначительное количество клеток вируса. То же самое можно сказать о моче, поте и слезной жидкости.

ВИЧ - ПЦР выявляет антиген или нет? Этот вопрос нередко задают специалистам в области медицины. Ответ на него не может быть положительным. Поскольку данный метод диагностики направлен на исследование именно ДНК и РНК. Качественный ПЦР на ВИЧ производится в определенной последовательности. У предполагаемого инфицированного производят забор необходимого биологического материала. Чаще всего для подобного исследования берут венозную кровь. Кстати, пациенту перед этим не рекомендуют употреблять жирную пищу в течение нескольких суток. Исследование производится натощак. Биологический материал помещают в специальный лабораторный реактор, где производят его расщепление. Далее к биологическому материалу добавляют определенные ферменты (для каждого заболевания или для каждой патологии они разные).Для того чтобы синтезировать копию микроба, вируса или инфекции, с их ДНК связываются данные ферменты.

Происходит это в несколько этапов по принципу цепной реакции. Сначала из одной молекулы дезоксирибонуклеиновой кислоты получается две, зачем четыре и так далее. По завершению нескольких циклов исследования лаборант получает сотни или тысячи копий ДНК исследуемого материала, благодаря чему с легкостью может сравнить их с ДНК любых патогенных организмов, инфекций и патологий на генетическом уровне, в том числе и вируса иммунодефицита. Благодаря такому исследованию больные могут сдать ПЦР на ВИЧ первого или второго типа. С его помощью также удается определить концентрацию клеток вируса в крови человека. Если ПЦР на ВИЧ положительный, но ему не предшествовал иммунный блоттинг или ИФА скрининг, то пациента направляют на данные типы исследований. Если же полимеразной цепной реакции предшествовал один из вышеперечисленных видов исследования, то сомнений у специалистов в области медицины не остается. В этом случае человеку ставят конкретный диагноз. Если же ПЦР на ВИЧ отрицательный, но у врачей остаются сомнения, то больного также могут направить на дополнительные исследования. Стоит отметить, что ложноположительный результат в случае с данным методом диагностики выявляется чаще, чем ложноотрицательный. Важно знать, что ПЦР методом мазка или соскоба на ВИЧ не производится.

Где сдать анализ крови ПЦР на ВИЧ, и можно ли сделать это бесплатно?

Как уже говорилось выше, исследование данного типа не слишком распространено в России. И причиной тому является его дороговизна. Это позволяет сделать вывод о том, что сдать анализ ПЦР на ВИЧ (достоверность ПЦР на ВИЧ 2 типа и 1 типа одинакова) в обычной государственной поликлинике нельзя. Для этого придется обратиться в специализированную лабораторию или в платную клинику. В крупных городах существуют специализированные СПИД центры, где анализы ПЦР производятся на коммерческой основе. В населенных пунктах поменьше возможность, пройти исследование такого типа есть не у всех, однако жители таких мест всегда могут посетить большие города, чтобы уделить внимание собственному здоровью.

Через сколько сдавать ПЦР на ВИЧ после предполагаемого заражения?

О том, через сколько можно сдать ПЦР на ВИЧ, нередко спрашивают у специалистов в области медицины. В этом случае никакой разницы между исследованиями нет. И полимеразная цепная реакция, и ИФА тест с иммунным блоттингом следует проводить не ранее чем через три - четыре недели после предполагаемого инфицирования. Раньше этого срока исследование производить не имеет смысла. ВИЧ через 10 дней ПЦР не выявит.

В некоторых случаях обнаружить инфекцию удается раньше или позже указанного срока. Но зависит это от конкретных особенностей организма исследуемого. Важно знать, что с помощью полимеразной цепной реакции можно обнаружить не только инфицированных, но и носителей вируса. Сроки ПЦР на ВИЧ зависят во многом от лаборатории, в которой производится диагностика. В среднем они составляют не более суток. Но существует и экспресс-исследование, которое необходимо при переливании крови или в экстренной медицине.

Роль ПЦР диагностики ВИЧ-инфекции в неонатологии

ПЦР-тест на ВИЧ используется в неонатологии в том случае, когда у инфицированных женщин появляются дети. Всем известно, что в этом случае крайне велик риск передачи вируса от матери ребенку. У всех новорожденных, матери которых являются зараженными или носителями вируса иммунодефицита, в момент появления на свет в крови уже присутствуют антитела к вирусу иммунодефицита, вне зависимости от того, произошло инфицирование или нет. С помощью ПЦР диагностики на ВИЧ удается выявить, являются они так называемой защитой иммунной системы или следствием инфицирования. В первые дни жизни младенцев исследование такого типа не производится. Ведь если инфицирование происходит во время появления на свет через родовые пути, то сразу же проведенный анализ не сможет выявить заболевания. Он покажет его лишь в том случае, если инфицирование было внутриутробным. Точность ПЦР на ВИЧ у новорожденных детей также составляет приблизительно восемьдесят процентов.