Πώς να κάνετε εξετάσεις για HIV PCR; Δοκιμές για HIV λοίμωξη: χαρακτηριστικά της διαδικασίας και ερμηνεία των αποτελεσμάτων Ανάλυση PCR για την αξιοπιστία του HIV.

Η PCR (αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης) είναι μια μέθοδος μοριακής γενετικής που σας επιτρέπει να αναλύσετε οποιαδήποτε σύντομη αλληλουχία DNA (ή RNA) ακόμη και σε δείγματα που περιέχουν μόνο ελάχιστες ποσότητες DNA ή RNA, προσδιορίζοντας έτσι την παρουσία/απουσία ενός παθογόνου προσδιορίστε, για παράδειγμα, εάν υπάρχει ανθρώπινος ιός HIV ή ηπατίτιδας Β ή Mycobacterium tuberculosis). Η PCR χρησιμοποιείται για την αναπαραγωγή/πολλαπλασιασμό/κλωνοποίηση (ενίσχυση) επιλεγμένων τμημάτων DNA ή RNA για ανάλυση.

Η μέθοδος PCR είναι τόσο απλή που μπορεί να την κάνει ακόμη και ένας μαθητής)

Προηγουμένως, η ενίσχυση DNA περιλάμβανε κλωνοποίηση τμημάτων ενδιαφέροντος σε βακτηριακούς φορείς έκφρασης και χρειαζόταν εβδομάδες. Αλλά τώρα που η PCR γίνεται σε δοκιμαστικούς σωλήνες, διαρκεί μόνο λίγες ώρες. PCR είναι εξαιρετικά αποτελεσματικό, έτσι ώστε να μπορεί να γίνει ένας τεράστιος αριθμός αντιγράφων από το DNA.

Αλληλουχία DNA και αντιστοιχία νουκλεοτιδίων.

Είθε το χέρι του δωρητή να μην αποτύχει ποτέ

Έργο "AIDS.HIV.STD." είναι ένας μη κερδοσκοπικός οργανισμός, που δημιουργήθηκε από εθελοντές εμπειρογνώμονες HIV/AIDS με δικά τους έξοδα για να φέρουν την αλήθεια στους ανθρώπους και να είναι ξεκάθαροι ενώπιον της επαγγελματικής τους συνείδησης. Θα είμαστε ευγνώμονες για οποιαδήποτε βοήθεια στο έργο. Είθε να σας ανταμείψει χιλιάδες φορές: ΠΡΟΣΦΕΡΩ .

Επιπλέον, η PCR χρησιμοποιεί τα ίδια μόρια που χρησιμοποιεί η φύση για να αντιγράψει το DNA:

• Δύο "εκκινητές", κοντές μονόκλωνες αλληλουχίες DNA που συντίθενται για να ταιριάζουν με την αρχή και το τέλος του τεντώματος DNA που πρόκειται να αντιγραφεί.
• Ένα ένζυμο που ονομάζεται πολυμεράση που κινείται κατά μήκος ενός τμήματος του DNA, διαβάζει τον κώδικά του και συναρμολογεί ένα αντίγραφο.
• Ένα σωρό μπλοκ DNA που χρειάζεται να κάνει αυτή η πολυμεράση.

Δηλαδή, η PCR είναι μια τεχνική κατά την οποία τα σωματίδια DNA (μερικές φορές RNA) πολλαπλασιάζονται σε ένα συγκεκριμένο διάλυμα ή σε μια ειδική επιφάνεια όπου μπορούν να εναποτεθούν.

Η PCR είναι μια τεχνική που επιτρέπει στους επιστήμονες να βρουν μια βελόνα σε μια θημωνιά και στη συνέχεια να φτιάξουν μια θημωνιά από αυτές τις βελόνες.

το καθήκον της PCR ως μεθόδου είναι να πολλαπλασιάσει (ενισχύει), να κάνει όσο το δυνατόν περισσότερα αντίγραφά τους, ώστε να είναι δυνατός ο εντοπισμός σε ποιον μπορεί να ανήκουν (συγκεκριμένο άτομο, ζώο ή παθογόνος οργανισμός), ακόμη και αν υπάρχουν μόνο ίχνη παρουσίας DNA/RNA.

Ωστόσο, η ενίσχυση PCR είναι μόνο μέρος της διαγνωστικής εξέτασης. Μετά την ενίσχυση, τα ενισχυμένα τμήματα πρέπει να συγκριθεί με άλλα τμήματα νουκλεοτιδίων, αλλά από γνωστή πηγή(για παράδειγμα, ένα συγκεκριμένο άτομο, ζώο ή παθογόνος οργανισμός). Αυτή η σύγκριση μοναδικών τμημάτων πραγματοποιείται συχνά τοποθετώντας αλληλουχίες νουκλεοτιδίων που δημιουργούνται από PCR δίπλα σε γνωστές αλληλουχίες νουκλεοτιδίων από ανθρώπους, παθογόνα ή άλλες πηγές σε ένα ειδικό πήκτωμα.

Όταν ένα ηλεκτρικό ρεύμα διέρχεται από το πήκτωμα, οι διαφορετικές αλληλουχίες νουκλεοτιδίων σχηματίζουν ζώνες που μοιάζουν με «σκάλα» ανάλογα με το ηλεκτρικό τους φορτίο και το μοριακό τους μέγεθος. Αυτό ονομάζεται ηλεκτροφόρηση γέλης. Μεταναστεύουν στα ίδια επίπεδα στο πήκτωμα, δείχνοντας την ταυτότητα των νουκλεοτιδικών αλληλουχιών. Αυτή η μέθοδος είναι μια από τις πιο δημοφιλείς δοκιμές PCR τελευταίου σταδίου.

Πώς λειτουργεί η PCR;

Το 1983, ο Kari Mullis ανέπτυξε τα βασικά βήματα για την ενίσχυση αλληλουχιών DNA. Αυτός και ο Michael Smith τιμήθηκαν με το βραβείο Νόμπελ για την ανάπτυξη της PCR το 1993.

Η PCR πραγματοποιείται σε έναν δοκιμαστικό σωλήνα με τα κατάλληλα χημικά και σε συγκεκριμένη θερμοκρασία θέρμανσης.

Απαιτούνται τα ακόλουθα αντιδραστήρια ή χημικές ουσίες:

• Ένα δείγμα που περιέχει μια νουκλεοτιδική αλληλουχία (από αίμα, μαλλιά, πύον, δέρμα κ.λπ.).
• Εκκινητές DNA: Βραχύ μονόκλωνο DNA που συνδέεται με αλληλουχίες νουκλεοτιδίων που προάγει τη σύνθεση ενός συμπληρωματικού κλώνου νουκλεοτιδίων.
• DNA πολυμεράση: Ένα ένζυμο που, όταν το DNA δεσμεύεται σε έναν εκκινητή, κινείται προς τα κάτω στο θραύσμα DNA προσθέτοντας δομικά στοιχεία DNA για να σχηματίσουν συμπληρωματικά ζεύγη βάσεων και έτσι συνθέτει τη συμπληρωματική νουκλεοτιδική αλυσίδα του DNA (εισαγωγή θερμοσταθερής DNA πολυμεράσης, Taq πολυμεράση, που προέρχεται από ανθεκτικά στη θερμότητα βακτήρια, βελτιώνει σημαντικά την ικανότητα PCR).
• Μια μεγάλη περίσσεια δομικών μονάδων DNA που ονομάζονται νουκλεοτίδια (αδενίνη, θυμιδίνη, κυτοσίνη και γουανίνη, που συντομεύονται ως: A, T, C και G, αντίστοιχα) σε διάλυμα. Όταν αυτά τα μπλοκ ενώνονται μεταξύ τους, σχηματίζουν μια νουκλεοτιδική αλληλουχία ή μια μονή αλυσίδα DNA. Όταν αυτά τα δομικά στοιχεία συνδέουν το συμπληρωματικό δομικό στοιχείο τους με ασθενείς δεσμούς υδρογόνου (για παράδειγμα, το Α θα συνδεθεί μόνο με το T και το G θα συνδεθεί μόνο με το C) σχηματίζεται μια συμπληρωματική αλληλουχία νουκλεοτιδίου DNA που συνδέεται με το αρχικό μονόκλωνο DNA. Όταν ολοκληρωθεί η σύνδεση, σχηματίζεται συμπληρωματικό δίκλωνο DNA σε μια συγκεκριμένη αλληλουχία.

Ο Kari Mullis είναι ένας πολύ ενδιαφέρον, κουλ τύπος, δείτε πόσο ενδιαφέροντα μιλάει για το πώς κατέληξε στο PCR:

Πιστεύει στην αστρολογία, αλλά δεν πιστεύει ότι ο HIV προκαλεί AIDS.)

Στη συνέχεια, η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης ξεκινά με ένα τμήμα DNA από το δείγμα, το οποίο τοποθετείται σε ένα σωλήνα που περιέχει τα παραπάνω αντιδραστήρια. Το διάλυμα θερμαίνεται στους 94°C. Η θέρμανση σπάει τους δεσμούς υδρογόνου που επιτρέπουν το σχηματισμό συμπληρωματικών κλώνων DNA, επομένως υπάρχουν μόνο μονόκλωνοι στο μείγμα (αυτό ονομάζεται μετουσίωση DNA διπλής έλικος).

Το μίγμα αφήνεται να κρυώσει στους 54°C. Σε αυτή τη θερμοκρασία, οι εκκινητές DNA και η DNA πολυμεράση συνδέονται με μεμονωμένο μονόκλωνο DNA (αυτό ονομάζεται ανόπτηση DNA). Επειδή τα δομικά στοιχεία είναι σε περίσσεια (υψηλή συγκέντρωση) στο μείγμα, η πολυμεράση τα χρησιμοποιεί για να δημιουργήσει νέους συμπληρωματικούς κλώνους DNA (που ονομάζεται επέκταση DNA) και αυτή η διαδικασία συμβαίνει πιο γρήγορα στους 72°C. Αυτή η διαδικασία δημιουργεί ένα νέο δίκλωνο μόριο DNA από κάθε μία από τις μονές έλικες του αρχικού μορίου.

Αυτός ο κύκλος επαναλαμβάνεται περίπου 40 φορές σε μια μηχανή που ονομάζεται θερμικός κυκλοποιητής, η οποία επαναλαμβάνει αυτόματα τους κύκλους θέρμανσης-ψύξης, με την ποσότητα κάθε αλληλουχίας DNA να διπλασιάζεται κάθε φορά που ολοκληρώνεται ο κύκλος θέρμανσης-ψύξης. Αυτό που ήταν αρχικά ένα σύντομο τμήμα DNA θα μπορούσε να επεκταθεί σε περίπου 100 δισεκατομμύρια αντίγραφα μετά από 40 κύκλους διπλασιασμού.

Πότε χρειάζεται εξέταση PCR;

Το τεστ PCR είναι η βάση για μια σειρά από τεστ που μπορούν να απαντήσουν σε πολλές διαφορετικές ιατρικές ερωτήσεις που βοηθούν τους γιατρούς να διαγνώσουν και να θεραπεύσουν ασθενείς. Για παράδειγμα, οι δοκιμές PCR μπορούν ανίχνευση και αναγνώριση παθογόνων οργανισμώνσε ασθενείς, ιδιαίτερα σε αυτούς που είναι δύσκολο να καλλιεργηθούν (π. HIV και άλλοι ιοί και κάποιοι μύκητες).

Μερικοί γιατροί συνταγογραφούν εξετάσεις PCR για να βοηθήσουν στη διάγνωση γενετικές ασθένειες, ενώ άλλοι γιατροί χρησιμοποιούν PCR για να ανιχνεύσουν βιολογικές σχέσεις όπως π.χ ταυτοποίηση των γονέων των παιδιών. Οι δοκιμές PCR χρησιμοποιούνται επίσης για ταυτοποίηση και χαρακτηρισμό γενετικές μεταλλάξειςκαι ανακατατάξεις που βρέθηκαν σε ορισμένες καρκινικές ασθένειες.

Ωστόσο, οι δοκιμές PCR έχουν τροποποιηθεί και έχουν εισαχθεί σε πολλές πτυχές της επιστημονικής έρευνας, συμπεριλαμβανομένης της εξελικτικής βιολογίας, του γενετικού δακτυλικού αποτυπώματος, της εγκληματολογικής έρευνας και πολλών άλλων.

Τι είναι η RT-PCR;

Η PCR αντίστροφης μεταγραφάσης (RT-PCR) είναι μια εξέταση PCR που έχει σχεδιαστεί για να ανιχνεύει και να μετράει την ποσότητα του RNA. Αν και οι αρχικές δοκιμές PCR ενίσχυσαν το DNA, πολλοί ιοί και άλλα βιολογικά συστατικά (όπως τα μιτοχόνδρια) χρησιμοποιούν το RNA ως γενετικό τους υλικό. Η RT-PCR διαφέρει από την κανονική PCR λαμβάνοντας πρώτα RNA και μετατρέποντας τον κλώνο RNA σε κλώνο DNA. Αυτό γίνεται ουσιαστικά με την ίδια μέθοδο για την PCR που περιγράφηκε παραπάνω, εκτός από τη χρήση ενός ενζύμου που ονομάζεται ανάστροφη μεταγραφάση αντί για πολυμεράση DNA.

Η ανάστροφη μεταγραφάση επιτρέπει τη μετατροπή ενός κλώνου RNA σε συμπληρωματικό κλώνο DNA. Μόλις συμβεί αυτή η αντίδραση, η μέθοδος ρουτίνας PCR μπορεί στη συνέχεια να χρησιμοποιηθεί για την ενίσχυση του DNA. Η RT-PCR χρησιμοποιείται για την ανίχνευση και τη μελέτη πολλών ιών RNA. Η RT-PCR δεν πρέπει να συγχέεται με μια άλλη παραλλαγή της PCR που ονομάζεται PCR πραγματικού χρόνου.

Η PCR πραγματικού χρόνου είναι μια παραλλαγή της PCR που επιτρέπει την ανάλυση του ενισχυμένου DNA εντός των συνηθισμένων 40 κύκλων της διαδικασίας. Αν και η διαδικασία είναι παρόμοια με τη συμβατική κυκλική PCR, η PCR σε πραγματικό χρόνο χρησιμοποιεί φθορίζουσες βαφές προσαρτημένες σε ορισμένες από τις δομικές μονάδες ή μικρούς κλώνους νουκλεοτιδίων. Ανάλογα με τη μέθοδο που χρησιμοποιείται, ο φθορισμός εμφανίζεται όταν σχηματίζονται ενισχυμένοι κλώνοι DNA. Η ποσότητα του φθορισμού μπορεί να μετρηθεί σε 40 κύκλους και επιτρέπει στους ερευνητές να μετρήσουν συγκεκριμένα προϊόντα και τις ποσότητες τους κατά τη διάρκεια των κύκλων ενίσχυσης.

Αυτό συχνά επιτρέπει σε ερευνητές ή τεχνικούς να παραλείπουν την ηλεκτροφόρηση γέλης ή άλλες δευτερεύουσες διαδικασίες που απαιτούνται για την ανάλυση προϊόντων PCR, παρέχοντας έτσι ταχύτερα αποτελέσματα. Η PCR πραγματικού χρόνου και η RT-PCR είναι παραλλαγές ή τροποποιήσεις της αρχικής δοκιμής PCR. Ωστόσο, υπάρχουν πολλές περισσότερες επιλογές (τουλάχιστον 25) που υπάρχουν και χρησιμοποιούνται για την επίλυση συγκεκριμένων προβλημάτων. Όλα έχουν διαφορετικά ονόματα όπως assembly PCR, hot start PCR, multiplex PCR, solid-state PCR και πολλά άλλα.

Τι είναι το τεστ PCR για τον HIV;

PCR(αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης) - μια μέθοδος πολλαπλασιασμού του γενετικού υλικού ενός ιού, τεστ που προσδιορίζει το γενετικό υλικό του ιού- HIV RNA ή DNA.

Εάν ο ιός περιέχεται σε ελάχιστη ποσότητα, τότε ως αποτέλεσμα της αντίδρασης αυτή η ποσότητα αυξάνεται πολλές φορές. Επομένως, η PCR έχει υψηλή διαγνωστική αξία.

Συνήθως αυτή η δοκιμή χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό HIV σε δωρεά αίματοςή για την έγκαιρη ανίχνευση του HIVστο σώμα πριν από την παραγωγή ειδικών αντισωμάτων κατά του HIV. Συγκεκριμένα αντισώματα ανιχνεύονται με συμβατικά τεστ HIV (ELISA), αλλά μόνο 1-3, σπάνια 12 μήνες μετά τη μόλυνση. ΕΝΑ χρησιμοποιώντας PCR μπορείτε να δώσετε μια αρκετά ακριβή απάντηση μετά από 14 ημέρεςμε 98% εμπιστοσύνη και ακόμη και μετά από 5 ημέρες, αλλά τότε η εμπιστοσύνη θα είναι 80%. Η HIV PCR είναι μια ακριβή και πιο εντατική εξέταση από την ELISA, επομένως Δεν το χρησιμοποιούν όλοι, αλλά μόνο για ειδικές ενδείξεις (δότες που υπέστησαν ιατρικό ατύχημα με HIV) ή έναντι αμοιβής.

Ποιοτική εξέταση PCR για HIV— καθορίζει εάν υπάρχει ή όχι ο ιός HIV-1/HIV-2, αλλά δεν καθορίζει τον αριθμό των αντιγράφων του ιού (χρησιμοποιείται ποσοτική PCR για τον προσδιορισμό του αριθμού). Η υψηλής ποιότητας PCR ΔΕΝ γίνεται για όσους έχουν γνωστή διάγνωση μόλυνσης από τον ιό HIV. Του Το κάνουν μόνο σε όσους δεν γνωρίζουν ακόμη αν έχουν μολυνθεί από τον ιό HIV ή όχι.

Αυτή είναι μια μέθοδος για τον προσδιορισμό της συμπληρωματικής περιοχής DNA στο γονιδίωμα ενός κυττάρου λεμφοκυττάρου που επηρεάζεται από τον HIV. Εκείνοι. Δεν προσδιορίζεται ο ίδιος ο ιός, αλλά το υλικό που ενσωματώνει ο ιός στο κύτταρο. Το DNA του θα είναι ήδη αποθηκευμένο στον πυρήνα του κυττάρου, από τον οποίο στη συνέχεια θα διαβαστεί και θα πολλαπλασιαστεί (αντιγραφή του εαυτού του).

Ποσοτική εξέταση PCR για HIV

Ποσοτική ανάλυση PCR για HIV RNA— καθορίζει τον αριθμό των αντιγράφων του ιού RNA στο αίμα (DNA PCR χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό του ιού στα κύτταρα, για παράδειγμα στα παιδιά). Γίνεται μόνο σε άτομα μολυσμένα με HIV, για την παρακολούθηση της θεραπείας, τον προσδιορισμό της σοβαρότητας της διαδικασίας της νόσου και την αποτελεσματικότητα της θεραπείας.

Πόσο καιρό μετά τη μόλυνση μπορεί να ανιχνευθεί ο HIV χρησιμοποιώντας τη μέθοδο PCR;

Πόσες ημέρες αργότερα μπορώ να κάνω μια εξέταση HIV PCR μετά από επαφή με έναν οροθετικό σύντροφο;

Ο HIV μπορεί να ανιχνευθεί χρησιμοποιώντας PCR 4-14 ημέρες μετά τη μόλυνση. Ένα αρνητικό αποτέλεσμα PCR για τον HIV είναι αξιόπιστο μετά από 14 ημέρες μετά από επικίνδυνη επαφή, αλλά σύμφωνα με τους ισχύοντες κανονισμούς, εξακολουθεί να απαιτείται εξέταση με τη βοήθεια του.

Πώς διαφέρει το DNA PCR από το HIV RNA PCR;

RNAσυνήθως χρησιμοποιείται σε ποσοτικές δοκιμές για την αξιολόγηση του ιικού φορτίου σε άτομα με διάγνωση, για παράδειγμα για την αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας της θεραπείας.

DNA- σε μονοπύρηνα κύτταρα, για παράδειγμα, για διάγνωση σε παιδιά, όπου τα μητρικά αντισώματα κατά του HIV εμποδίζουν τη χρήση της μεθόδου ELISA.

Και τα δύο τεστ μπορεί να είναι τόσο ποσοτικά όσο και ποιοτικά.

Και τα δύο μπορούν να χρησιμοποιηθούν σε ειδικές περιπτώσεις για διαγνωστικά, αλλά λαμβάνοντας υπόψη τους συγκεκριμένους περιορισμούς που επιβάλλουν οι τεχνικές παράμετροι του συστήματος, π.χ. όπως έχει συνταγογραφηθεί από γιατρό.

Μπορεί το HIV PCR να είναι ψευδώς θετικό, λόγοι;

Αν γίνει σωστά: η νοσοκόμα δεν ανακάτευε τα σωληνάρια, κοίταξε το διαβατήριο πριν βγάλει αίμα, έβαλε ετικέτα στο σωληνάριο σωστά, έγραψε σωστά τις οδηγίες κ.λπ., και ο ειδικός εργαστηρίου (συνήθως εργαστηριακός βοηθός) έκανε τα πάντα σύμφωνα με τις οδηγίες, πληρούσε όλες τις απαιτήσεις των εργαστηριακών κανονισμών (για παράδειγμα, το βιοϋλικό «ανασκάφηκε» σωστά, χωρίς διασταυρούμενη μόλυνση (μόλυνση) κ.λπ.) και χρησιμοποιήθηκε σύστημα δοκιμής υψηλής ποιότητας, ΤΟΤΕ Η PCR ΜΠΟΡΕΙ να είναι ψευδώς θετική μόνο σε 2 % των περιπτώσεων (αυτό οφείλεται στην ευαισθησία των συστημάτων δοκιμής που χρησιμοποιούνται) .

Αλλά εάν έγιναν λάθη από την πλευρά του ιατρικού προσωπικούιδρύματα , ΤΟΤΕ η PCR μπορεί να είναι ψευδώς θετική σε περισσότερο από 2% των περιπτώσεων.

Πώς γίνεται η εξέταση PCR για HIV;

Για τον έλεγχο του HIV χρησιμοποιώντας τη μέθοδο PCR, δίνεται αίμα από φλέβα, κατά προτίμηση (αλλά όχι απαραίτητα) το πρωί με άδειο στομάχι.

Πού μπορώ να κάνω τεστ για HIV PCR;

Για να το κάνετε αυτό, πληκτρολογήστε " κάντε τεστ HIV PCR"και προσθέστε την τοποθεσία σας στο αίτημα και θα δείτε οργανισμούς που ασχολούνται με την έρευνα PCR στην περιοχή σας.

Για παράδειγμα,

Πόσο κοστίζει ένα τεστ HIV PCR;

Κοντά 1,5-3 χιλιάδες ρούβλια.ανάλογα με την περιοχή.

Ποια είναι η αξιοπιστία των αποτελεσμάτων μιας εξέτασης PCR για HIV;

Διά μέσου 14 ημέρεςμετά τη μόλυνση, η αξιοπιστία της PCR για τον HIV είναι 100%, από 4-5 ημέρες - η αξιοπιστία είναι 80%.

Πόσος χρόνος χρειάζεται για να πραγματοποιηθεί μια εξέταση PCR για HIV;

Τεχνικά 4-6 ώρες, αλλά στην πραγματικότητα εξαρτάται από την οργάνωση του εργαστηρίου και συνήθως το αποτέλεσμα δίνεται σε 2-3 μέρες.

PCR για HIV σε νεογέννητο μωρό

Δεδομένου ότι ένα παιδί κάτω του 1,5 ετών που γεννήθηκε από μητέρα HIV+ διατηρεί τα αντισώματά του κατά του HIV, είναι αδύνατο να προσδιοριστεί εάν το παιδί έχει μολυνθεί από τον ιό HIV ή δεν χρησιμοποιεί ELISA. Σε αυτήν την περίπτωση, η PCR χρησιμοποιείται:

• Εάν ανιχνευτεί ιός σε παιδί 1 μηνός που κάνει PCR, σημαίνει ότι έχει μολυνθεί.
• Εάν ένα παιδί έχει αρνητική PCR στους 1-2 μήνες και στους 4-6 μήνες, τότε με την προϋπόθεση ότι η μητέρα δεν το τάιζε με το μητρικό της γάλα, το παιδί είναι υγιές.

Ποια είναι η διαφορά μεταξύ PCR και ELISA;

Η PCR καθορίζει τον ίδιο τον ιό και η ELISA καθορίζει την αντίδραση του σώματος (με τη μορφή αντισωμάτων) στον ιό.

Η PCR ανιχνεύει την παρουσία του ιού πιο γρήγορα από την ELISA.

Μία από τις πιο ακριβείς και αξιόπιστες μεθόδους μοριακής γενετικής διάγνωσης είναι η PCR, δηλαδή η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης. Αυτή η μέθοδος καθιστά δυνατή τη διάγνωση διαφόρων τύπων κληρονομικών και μολυσματικών ασθενειών σε έναν ασθενή.

Η έρευνα PCR σάς επιτρέπει να διαγνώσετε μια από τις πολύπλοκες ασθένειες όπως, η οποία είναι δύσκολο να αντιμετωπιστεί. Η αξιοπιστία της HIV PCR δικαιολογείται μόνο σε 80 περιπτώσεις από τις 100.

Ο κύριος τρόπος για τη διάγνωση της λοίμωξης από τον ιό HIV στο σώμα ενός ατόμου είναι μέσω του αίματός του, δηλαδή, διεξάγεται έλεγχος για αυτήν την ασθένεια. Η απλούστερη και πιο κοινή διαγνωστική μέθοδος είναι η λήψη φλεβικού αίματος και η διεξαγωγή του σε ειδικό εργαστήριο. Φυσικά, το θετικό αποτέλεσμα που προκύπτει μπορεί να είναι ψευδές, επομένως ελέγχεται ξανά με πιο ακριβή ερευνητικό τρόπο σε εργαστήριο αναφοράς.

Η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης θεωρείται μια αρκετά δαπανηρή διαδικασία και η εφαρμογή της απαιτεί ειδικό εξοπλισμό και υψηλά καταρτισμένους ειδικούς. Γι' αυτό το λόγο δεν έχει γίνει ευρέως διαδεδομένο στον πληθυσμό.

Η χρήση της ανάλυσης PCR για τη διάγνωση του HIV σας επιτρέπει να αποκτήσετε ένα ακριβές και αξιόπιστο αποτέλεσμα σχετικά με την παρουσία της νόσου, ωστόσο, αυτό συχνά εξαρτάται από την προετοιμασία του ίδιου του ασθενούς.

Η ανάλυση PCR πραγματοποιείται στις ακόλουθες περιπτώσεις:

1. Διάγνωση της λοίμωξης από τον ιό HIV σε νεογνά που γεννήθηκαν από μητέρα μολυσμένη με AIDS.
2. Για τον έλεγχο της συγκέντρωσης του HIV στο αίμα του ασθενούς
3. Εξέταση αίματος δότη.

Ακόμα κι αν το τεστ PCR δείξει θετικό αποτέλεσμα, δεν μπορεί να γίνει διάγνωση χρησιμοποιώντας μόνο αυτό το τεστ. Τις περισσότερες φορές χρησιμοποιείται ως πρόσθετη μέθοδος για την επίλυση αμφιλεγόμενων καταστάσεων.

Η ανάλυση PCR, δυστυχώς, δεν μπορεί να ονομαστεί καθολική μέθοδος, η εφαρμογή της οποίας δίνει ακριβή αποτελέσματα σχετικά με την παρουσία ή την απουσία μόλυνσης στο ανθρώπινο σώμα. Αυτό οφείλεται στο γεγονός ότι αυτού του είδους η έρευνα είναι πιο πιθανό από άλλες μεθόδους να παράγει ψευδώς θετικά αποτελέσματα. Αυτή η διαγνωστική μέθοδος χρησιμοποιείται κατά τη διάγνωση μιας ασθένειας ή τον έλεγχο για λοίμωξη HIV. Χρησιμοποιείται κυρίως ως βοηθητική μέθοδος για τη διάγνωση του ιού του AIDS.

Ωστόσο, παρά την πιθανότητα ψευδώς θετικού αποτελέσματος, ένα τέτοιο τεστ HIV έχει πολλά πλεονεκτήματα σε σχέση με άλλες διαγνωστικές μεθόδους. Η ανάλυση PCR μπορεί να πραγματοποιηθεί ήδη 11-15 ημέρες μετά την ημερομηνία υποψίας μόλυνσης και όλες οι άλλες μέθοδοι καθιστούν δυνατή την αξιολόγηση της παρουσίας του ιού του AIDS στο ανθρώπινο σώμα μόνο μετά από μεγάλο χρονικό διάστημα. Αυτή η απόκλιση εξηγείται από το γεγονός ότι τα περισσότερα τεστ προσυμπτωματικού ελέγχου για τον HIV βασίζονται στην ανίχνευση του ιού, ο σχηματισμός του οποίου συμβαίνει εντός τριών μηνών.

Η κύρια διαφορά μεταξύ της εξέτασης PCR και άλλων διαγνωστικών μεθόδων είναι το γεγονός ότι δεν ανιχνεύει τον ιό, αλλά την παρουσία του ίδιου του ιού στο σώμα του ασθενούς.

Αυτός είναι ο λόγος που η μέθοδος αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμερούς μπορεί να ονομαστεί ιδανική εάν υπάρχει ανάγκη για πρόωρη ανίχνευση. Επιπλέον, αυτή η μέθοδος μπορεί να χρησιμοποιηθεί σε περιπτώσεις όπου η παρουσία αντισωμάτων δεν μπορεί να είναι αξιόπιστος δείκτης.

Περισσότερες πληροφορίες για το τεστ HIV μπορείτε να βρείτε στο βίντεο.

Εάν είναι απαραίτητο να προσδιοριστεί ο βαθμός ή η σοβαρότητα της παθολογίας στο ανθρώπινο σώμα, καταφεύγουν στη διεξαγωγή μιας ποσοτικής μελέτης PCR. Είναι αυτό που σας επιτρέπει να λάβετε πληροφορίες σχετικά με το επίπεδο συγκέντρωσης μόλυνσης στο σώμα του ασθενούς. Η εξέλιξη της νόσου συνοδεύεται από σταδιακή αύξηση της συγκέντρωσης του ιού και η ποσοτική διάγνωση PCR καθιστά δυνατό τον προσδιορισμό του σταδίου της μόλυνσης και της αποτελεσματικότητας της θεραπείας. Η διάγνωση του «ιικού φορτίου» πριν από τον εντοπισμό της νόσου και μετά τη θεραπεία μας επιτρέπει να βγάλουμε ένα συμπέρασμα σχετικά με το πόσο αποτελεσματική είναι η θεραπεία.

Άλλες μέθοδοι διάγνωσης HIV

Σήμερα, η διάγνωση της HIV λοίμωξης είναι μια τυπική διαδικασία που περιλαμβάνει τη χρήση διαφόρων τύπων διαγνωστικών:

Συστήματα δοκιμών ELISA

Η διεξαγωγή ενός τέτοιου τεστ προσυμπτωματικού ελέγχου καθιστά δυνατό τον εντοπισμό του ιού εντός λίγων εβδομάδων από την είσοδό του στο ανθρώπινο σώμα. Μια τέτοια μελέτη δεν στοχεύει στον προσδιορισμό της παρουσίας του ιού στον ασθενή, αλλά στη διάγνωση της παραγωγής αντισωμάτων σε αυτόν. Υπάρχουν πολλές γενιές δοκιμών ELISA, καθεμία από τις οποίες έχει διαφορετική ευαισθησία. Μια τέτοια δοκιμή μερικές φορές δίνει αποτελέσματα, γεγονός που εξηγείται από την ακατάλληλη επεξεργασία και την παρουσία διαφόρων τύπων παθολογιών στο σώμα του ασθενούς.

Immune blotting

Εάν το ανοσοποιητικό στύπωμα δείξει θετικό αποτέλεσμα, τότε μπορούμε να μιλήσουμε για τελική διάγνωση του HIV. Ο κύριος τρόπος διεξαγωγής της είναι η χρήση μιας λωρίδας νιροκυτταρίνης στην οποία εφαρμόζονται πρωτεΐνες ιικής προέλευσης.

Μέθοδοι εξπρές

Αυτό θεωρείται καινοτομία στον τομέα της διάγνωσης της HIV λοίμωξης και τα αποτελέσματα μπορούν να αξιολογηθούν μέσα σε λίγα λεπτά μετά την πραγματοποίησή τους. Τα πιο ακριβή και αξιόπιστα αποτελέσματα λαμβάνονται με ανοσοχρωματογραφικές δοκιμές, η χρήση των οποίων βασίζεται στην αρχή της τριχοειδούς ροής.

Μπορούμε να μιλήσουμε για την παρουσία HIV λοίμωξης στον οργανισμό μόνο αφού επιβεβαιώσουμε τις εξετάσεις ELISA με ανάλυση IB.

Η διάγνωση της λοίμωξης από τον ιό HIV στο σώμα ενός ατόμου επιφέρει σημαντικές αλλαγές στον συνήθη τρόπο ζωής και στις σχέσεις του με τους άλλους. Είναι ευθύνη του ιατρικού προσωπικού να αποθηκεύσει τα αποτελέσματα των εξετάσεων και μόνο ο ίδιος ο ασθενής αποφασίζει ποιον θα ενημερώσει για την ασθένειά του. Η PCR είναι μια από τις διαγνωστικές μεθόδους που επιτρέπει σε κάποιον να ανιχνεύσει την παρουσία ενός ιού στο ανθρώπινο σώμα μέσα σε λίγες μόνο εβδομάδες.

Ο ιός της ανθρώπινης ανοσοανεπάρκειας είναι μια από τις πιο τρομερές ασθένειες του παρελθόντος και του παρόντος. Η μελέτη του, η αναζήτηση εμβολίων και φαρμάκων αποδίδει ορισμένους καρπούς. Ωστόσο, μέχρι σήμερα, οι ειδικοί γιατροί δεν έχουν καταφέρει να νικήσουν εντελώς αυτήν την επικίνδυνη ασθένεια. Οι σύγχρονες διαγνωστικές μέθοδοι καθιστούν δυνατό όχι μόνο τον εντοπισμό του ιού της ανοσοανεπάρκειας σε πρώιμο στάδιο, αλλά και την παρακολούθηση της πορείας της νόσου στο μέλλον. Για να ληφθεί μια απόφαση σχετικά με την ανάγκη χρήσης μιας συγκεκριμένης θεραπείας, χρησιμοποιείται ανάλυση HIV RNA. Χρησιμοποιείται επίσης για τον εντοπισμό αυτής της ασθένειας. Είναι σημαντικό να σημειωθεί εδώ ότι η εξέταση HIV RNA δεν είναι καθολική. Χρησιμοποιήστε το μόνο όταν είναι απαραίτητο. Πώς γίνεται μια τέτοια έρευνα, σε ποιες περιπτώσεις χρησιμοποιείται και ποια είναι η αξιοπιστία της;

Ιός HIV μέσω RNA: η ουσία της μελέτης

Πριν μιλήσετε για τον τρόπο προσδιορισμού του HIV RNA, θα πρέπει να μάθετε τι σημαίνει αυτή η συντομογραφία και τι ρόλο παίζει στο σώμα. Το ριβονουκλεϊκό οξύ είναι ένα μόριο που βρίσκεται σε όλους τους ζωντανούς οργανισμούς και σε ορισμένες ιογενείς λοιμώξεις. Η σύνθεση αυτού του μορίου βασίζεται σε μια μήτρα δεοξυριβονουκλεϊκού οξέος. Ορισμένα ένζυμα είναι υπεύθυνα για αυτές τις διαδικασίες. Αυτές είναι πολυμεράσες ριβονουκλεϊκού οξέος.

Η ουσία αυτού του τύπου έρευνας είναι ο έλεγχος του γενετικού υλικού του ιού. Προκειμένου να πραγματοποιηθεί μια δοκιμή RNA για τον HIV, οι ειδικοί γιατροί χρησιμοποιούν την αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης. Η PCR σάς επιτρέπει να αυξήσετε επανειλημμένα τον όγκο του βιολογικού υλικού που χρησιμοποιείται για έρευνα, λόγω του οποίου δοκιμάζεται σε διάφορα στάδια χρησιμοποιώντας μια συγκριτική μέθοδο. Αξίζει να σημειωθεί ότι το RNA PCR δεν χρησιμοποιείται μόνο για τον HIV. Αυτή η τεχνική σάς επιτρέπει να αναγνωρίσετε μεγάλο αριθμό κληρονομικών ασθενειών, ορισμένων ιών και λοιμώξεων. Χρησιμοποιείται επίσης για τον προσδιορισμό κληρονομικών γενετικών παθολογιών. Ως βιολογικό υλικό χρησιμοποιούνται σπέρμα, σάλιο και αίμα. Στην περίπτωση του ιού της ανοσοανεπάρκειας, ο ορός και το πλάσμα θεωρούνται τα προτιμώμενα υλικά.

Το τεστ HIV RNA πραγματοποιείται σε διάφορα στάδια. Αφού ληφθεί το αίμα του ασθενούς, αποστέλλεται στο εργαστήριο. Το βιολογικό υλικό τοποθετείται σε ειδικό αντιδραστήρα, όπου διασπάται. Για τη σύνθεση χρησιμοποιούνται ειδικά ένζυμα. Στη συνέχεια, κάτω από τεχνητά δημιουργημένες συνθήκες, δύο μόρια RNA συντίθενται από ένα μόριο RNA, τέσσερα από δύο κ.ο.κ. Όταν επιτευχθεί ο απαιτούμενος αριθμός, γίνεται σύγκριση με διαφορετικούς τύπους ιών. Παρεμπιπτόντως, η έξοδος από ένα μόριο ριβονουκλεϊκού οξέος είναι αρκετές εκατοντάδες ή χιλιάδες μόρια. Το υπερευαίσθητο HIV RNA διατίθεται σε διάφορους τύπους. Όλα εξαρτώνται από τον σκοπό της έρευνας.

HIV RNA 20 IU/ml: ακρίβεια και αξιοπιστία της μεθόδου, τύποι

Στη σύγχρονη ιατρική, χρησιμοποιούνται δύο μέθοδοι μελέτης του ριβονουκλεϊκού οξέος. Μιλάμε για ποσοτικό και ποιοτικό HIV RNA. Και οι δύο αυτές μέθοδοι έρευνας είναι παρόμοιες, αλλά έχουν διαφορετικούς στόχους. Η ποσοτικοποίηση του HIV RNA είναι ο προσδιορισμός του ιικού φορτίου. Ο αριθμός των μορίων του ιού στον γενετικό ιστό μπορεί να μιλήσει πολλά. Ειδικότερα, για το σε ποιο στάδιο βρίσκεται η ασθένεια αυτή τη στιγμή. Όλοι γνωρίζουν ότι ο ιός της ανοσοανεπάρκειας έχει πολλά από αυτά. Μετά την ορομετατροπή, ο αριθμός των κυττάρων του ιού αυξάνεται και η ανίχνευσή του καθίσταται δυνατή. Στα αρχικά στάδια της νόσου, το ποσοτικό HIV RNA, ο κανόνας του οποίου καθορίζεται στο εργαστήριο, επιτρέπει όχι μόνο την ανίχνευση του ιού της ανοσοανεπάρκειας, αλλά και τη λήψη απόφασης σχετικά με την ανάγκη λήψης αντιρετροϊκής θεραπείας. Έχοντας καθορίσει το ποσοτικό ιικό φορτίο, ο ειδικός μπορεί να αποφασίσει ποιο θεραπευτικό σχήμα πρέπει να χρησιμοποιήσει ο ασθενής.

Η ποιότητα του HIV RNA για νεογνά χρησιμοποιείται συχνά. Μπορεί επίσης να πραγματοποιηθεί σε ενήλικες, για παράδειγμα, προκειμένου να προσδιοριστεί ο τύπος του ιού. Αλλά το κόστος μιας τέτοιας έρευνας δεν επιτρέπει την εφαρμογή της σε όλα τα ιατρικά ιδρύματα. Ως εκ τούτου, χρησιμοποιείται στην παιδιατρική και τη νεογνολογία.

Η αξιοπιστία του τεστ HIV RNA με ευαισθησία 20 IU/ml είναι υψηλή. Είναι περίπου ενενήντα ένα τοις εκατό. Ωστόσο, στη σύγχρονη ιατρική υπάρχουν μέθοδοι των οποίων η αξιοπιστία είναι μεγαλύτερη. Αυτός είναι ο λόγος για τον οποίο χρησιμοποιείται μια συνδεδεμένη με ένζυμο ανοσοπροσροφητική δοκιμασία ή ανοσοστύπωμα για να προσδιοριστεί η παρουσία ή η απουσία αυτής της διάγνωσης. Η αξιοπιστία τους είναι ελαφρώς υψηλότερη. Είναι ενενήντα οκτώ έως ενενήντα εννέα τοις εκατό.

Αν μιλάμε για τον βέλτιστο χρόνο για τη δοκιμή, οι γιατροί το συνταγογραφούν τουλάχιστον ένα μήνα μετά τη μόλυνση. Εάν ο κύριος στόχος είναι να προσδιοριστεί εάν ο ασθενής έχει μια δεδομένη διάγνωση, δεν αξίζει τον κόπο να γίνει μια εξέταση HIV RNA μετά από 4 εβδομάδες· η αξιοπιστία της μπορεί να είναι ανακριβής. Είναι καλύτερα να το κάνετε αυτό σε πέντε έως έξι εβδομάδες.

Εάν το RNA του HIV δεν ανιχνεύεται, τι σημαίνει αυτό; Αυτή η ερώτηση τίθεται συχνά σε επαγγελματίες υγείας. Αυτό μπορεί να σημαίνει ότι ο ιός ανοσοανεπάρκειας δεν υπάρχει ή μπορεί να υποδεικνύει ότι το τεστ έγινε πολύ νωρίς.

Ανίχνευση HIV με μέθοδο RNA σε νεογνά: ποια είναι η αποτελεσματικότητα;

Η προτιμώμενη μέθοδος ελέγχου των νεογνών για την παρουσία ή την απουσία ιού ανοσοανεπάρκειας εάν γεννιούνται από μολυσμένη μητέρα είναι η εξέταση ριβονουκλεϊκού οξέος. Σε αυτή την περίπτωση, παράγονται 20 IU/ml HIV RNA τις πρώτες 10 ημέρες της ζωής του μωρού. Είναι επίσης δυνατό να ανιχνευθεί η παρουσία της νόσου χρησιμοποιώντας ενζυμική ανοσοδοκιμασία. Ωστόσο, οι γιατροί αντιμετωπίζουν μια διαφορετική πρόκληση. Μιλάμε για την ανάγκη προσδιορισμού των αντισωμάτων που παράγει το σώμα του μωρού. Γεγονός είναι ότι ένα μωρό που γεννιέται από μολυσμένη μητέρα θα τα έχει σε κάθε περίπτωση. Ωστόσο, μερικές φορές αυτό είναι απλώς μια άμυνα του ανοσοποιητικού συστήματος και όχι το γεγονός της μόλυνσης. Η ακρίβεια της HIV RNA PCR ελέγχεται εκ νέου μετά από 6 μήνες.

Ένας αριθμός ασθενειών που μεταδίδονται σεξουαλικά διαγιγνώσκονται χρησιμοποιώντας μεθόδους ELISA και PCR.

Κατά την προετοιμασία για την εξέταση, οι ασθενείς δεν συνιστάται να τρώνε λιπαρά τρόφιμα για δύο ημέρες. Όπως μια εξέταση αίματος για ιούς, τα δείγματα λαμβάνονται με άδειο στομάχι· το τελευταίο γεύμα ήταν το αργότερο πριν από 8 ώρες. Αποκλείστε τα τηγανητά και το αλκοόλ από τη διατροφή σας. Ακολουθώντας αυτές τις απλές απαιτήσεις, θα κάνετε πιο ακριβή τα αποτελέσματα των εξετάσεών σας.

Ο κατάλογος των ανιχνευόμενων ασθενειών περιλαμβάνει:

• ιός των ανθρώπινων θηλωμάτων (HPV);
• χλαμύδια;
• έρπης (συνταγογραφείται μια πρόσθετη εξέταση αίματος για έρπητα).
• ουρεόπλασμα;
• μυκόπλασμα;
• βλεννόρροια;
• κυτταρομεγαλοϊός;
• τριχομονίαση;
• τοξοπλάσμωση.

PCR για τον HIV στη διάγνωση λοίμωξης

Λόγω του γεγονότος ότι δεν υπάρχουν γνωστά συμπτώματα που να χαρακτηρίζουν αποκλειστικά την HIV λοίμωξη, με βάση μόνο τα παράπονα του ασθενούς που έκανε αίτηση, δεν είναι δυνατό να αναγνωριστεί η HIV λοίμωξη.

Το τεστ για τον ιό HIV έχει καταστεί αναγκαιότητα γιατί... Η τρέχουσα κοινή γνώμη για αυτή την ασθένεια είναι ότι το AIDS θεωρείται θανατική ποινή. Υπήρξαν περιπτώσεις όπου, μετά από ακανόνιστες σεξουαλικές επαφές, ένα άτομο δίνει αυξημένη προσοχή στα σήματα του σώματός του, βρίσκοντας και συχνά επινοώντας νέα σημάδια μιας θανατηφόρας ασθένειας.

Η διεξαγωγή έρευνας σε εργαστηριακές συνθήκες είναι αυτή τη στιγμή η μόνη και πιο αξιόπιστη διαγνωστική επιλογή (εξέταση αίματος για HIV). Η PCR χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό των ακόλουθων προβλημάτων υγείας:

• να επιβεβαιώσει ή να αντικρούσει την παρουσία του HIV κατά τη διάρκεια του οροαρνητικού παραθύρου.
• με ένα αμφίβολο αποτέλεσμα ανοσοστύπωσης (για τη δημιουργία ακριβούς περιγραφής της παθολογικής διαδικασίας).
• κατά τον καθορισμό του γονότυπου του HIV-1 ή του HIV-2.
• για τη δημιουργία και παρακολούθηση του ιικού φορτίου του σώματος·
• για τον εντοπισμό της κατάστασης του HIV σε νεογέννητα των οποίων οι μητέρες είναι φορείς HIV·
• κατά τη μετάγγιση αίματος.

Η υπεροχή της μεθόδου PCR στη διάγνωση λοιμωδών νοσημάτων:

Όταν διαπιστωθεί θετικό αποτέλεσμα για λοίμωξη από τον ιό HIV σε έναν ασθενή που έχει ζητήσει ιατρική βοήθεια, αρχίζουν να διεξάγουν πιο εμπεριστατωμένες μελέτες του ασθενούς για να αποσαφηνίσουν και να διευκρινίσουν τη φύση της νόσου και την πορεία της, καθώς και τη βάση και τη φύση. δευτερογενών ασθενειών και το επίπεδο βλάβης του ανοσοποιητικού.

Αναλύσεις ELISA και PCR: ερευνητικά χαρακτηριστικά, αρχές και ερμηνεία

Το αίμα για ανάλυση λαμβάνεται από μια φλέβα. Κατά τη διάρκεια της εγκυμοσύνης, τα δείγματα αίματος για το AIDS λαμβάνονται αυστηρά. Τα συμπεράσματα σχετικά με την απουσία ή την παρουσία του ιού της ανοσοανεπάρκειας στον οργανισμό του ασθενούς γίνονται με βάση την παρουσία ή την απουσία αντισωμάτων. Η ELISA δεν πρέπει να πραγματοποιείται αμέσως μετά την υποψία μόλυνσης, αλλά μετά από κάποιο χρονικό διάστημα ώστε να σχηματιστούν αντισώματα στο αίμα του ασθενούς. Φεύγει για διάφορους λόγους από 3 εβδομάδες έως 3 μήνες.

Επιπλέον, αποκαλύφθηκε ότι το αποτέλεσμα ELISA μπορεί να είναι και ψευδώς θετικό και ψευδώς αρνητικό. Κατά τη διάγνωση μιας ύποπτης λοίμωξης πολύ νωρίς, όταν τα αντισώματα κατά του HIV δεν έχουν ακόμη εμφανιστεί, προκύπτει ένα ψευδώς αρνητικό αποτέλεσμα. Σε τέτοιες περιπτώσεις, για να διευκρινιστεί, πρέπει να κάνετε επανέλεγχο αίματος για HIV μετά από 1-3 μήνες.

Ένα ψευδώς θετικό αποτέλεσμα, αντίθετα, μπορεί να ληφθεί όταν ο ασθενής έχει χρόνιες λοιμώξεις, καρκίνο, αυτοάνοσα νοσήματα· εκτός από τα παραπάνω, αποκλίσεις από τον κανόνα είναι δυνατές σε άλλες καταστάσεις. Επομένως, εάν το αποτέλεσμα ELISA είναι θετικό, σίγουρα ελέγχεται ξανά με τις πιο ευαίσθητες μεθόδους.

Η διάγνωση με PCR είναι μια από τις πιο σύγχρονες μεθόδους διεξαγωγής έρευνας υψηλής τεχνολογίας και χρησιμοποιείται αρκετά συχνά για τον εντοπισμό μολυσματικών ασθενειών. Η διάγνωση DNA έχει συμπεριλάβει πολλές διαφορετικές μεθόδους διεξαγωγής έρευνας· η πιο δημοφιλής μέθοδος σήμερα είναι η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης ή PCR.

Αυτή η μέθοδος βασίζεται στην εύρεση ενός μικρού μέρους του DNA του αιτιολογικού παράγοντα μιας δεδομένης λοίμωξης σε ιστούς για μικρομελέτη. Σε αυτή την περίπτωση, ένα μικρό μέρος του DNA περιέχει έως και αρκετές εκατοντάδες ζεύγη DNA, τα οποία είναι σε αυστηρή σειρά.

Η μέθοδος PCR είναι η πιο ακριβής· μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τον προσδιορισμό της παρουσίας ενός ιού, ανεξάρτητα από το αν εμφανίζονται αντισώματα ή όχι. Όμως, παρά την ακρίβειά της, η μέθοδος έχει ένα σοβαρό μειονέκτημα, το οποίο προκαλείται ακριβώς από την αυξημένη ακρίβειά της. Υπάρχει μια αρκετά μεγάλη πιθανότητα το αποτέλεσμα να είναι ψευδές. Ως εκ τούτου, σε σχέση με αυτή τη μέθοδο και εκτός από αυτήν, χρησιμοποιούνται και άλλες μέθοδοι για την ανίχνευση γενετικών και αντιγονικών υλικών.

Η ουσία της διάγνωσης της ηπατίτιδας χρησιμοποιώντας PCR

Υπάρχουν πέντε αποδεδειγμένοι ιοί που προκαλούν ηπατική νόσο.Πρόκειται για τους γνωστούς ιούς της ηπατίτιδας A, B, C, D, E. Πολύ σπάνιες περιπτώσεις είναι όταν η ηπατίτιδα προκαλείται από τον ιό Epstein-Barr, που είναι στην πραγματικότητα ένας τύπος έρπητα. Οι ιοί που αναφέρονται είναι εκπρόσωποι διαφορετικών οικογενειών, γεγονός που επηρεάζει τη θεραπεία τους ανάλογα με τον τύπο της ηπατίτιδας.

Μια επικίνδυνη ασθένεια που δικαίως ονομάζεται «μάστιγα του εικοστού πρώτου αιώνα». Γι' αυτό δαπανώνται τεράστια ποσά και πόροι για την καταπολέμηση αυτής της ασθένειας, καθώς και για την έρευνά της. Το γεγονός είναι ότι ο ιός της ανοσοανεπάρκειας δεν έχει ακόμη μελετηθεί πλήρως. Νέες ανακαλύψεις επιτρέπουν στους επιστήμονες να αναπτύξουν εμβόλια και φάρμακα για την καταπολέμησή του. Στη σύγχρονη ιατρική, δίνεται μεγάλη προσοχή στις μεθόδους διάγνωσης αυτής της ασθένειας. Οι γιατροί σε όλο τον κόσμο αναγνωρίζουν την PCR ως έναν από τους πιο αποτελεσματικούς τρόπους ανίχνευσης του ιού. Για τον HIV, αυτή η μέθοδος πραγματοποιείται μέσω τεστ DNA. Τι είναι αυτή η μελέτη, ποια είναι η αξιοπιστία της και πώς να προετοιμαστούμε για την ανάλυση;

Τι είναι το τεστ HIV - PCR;

Πρώτα απ 'όλα, θα πρέπει να αποκρυπτογραφήσετε αυτήν τη συντομογραφία. Η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (μέθοδος PCR για τον HIV) είναι ένα διαγνωστικό που δεν έχει χρησιμοποιηθεί ευρέως στην ελεύθερη ιατρική στη χώρα μας. Υπάρχουν διάφοροι λόγοι για αυτό. Αλλά το κυριότερο είναι ότι μια τέτοια έρευνα δεν είναι φθηνή. Επιπλέον, η αποτελεσματικότητά του είναι περίπου ογδόντα τοις εκατό, όταν η ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία και η ανοσοστύπωση έχουν υψηλότερη αξιοπιστία. Κυμαίνεται από ενενήντα πέντε έως ενενήντα οκτώ τοις εκατό. Φυσικά, ο HIV μπορεί να ανιχνευθεί χρησιμοποιώντας PCR. Χρησιμοποιείται και για άλλους σκοπούς. Χρησιμοποιώντας μελέτες DNA και RNA, προσδιορίζονται γενετικές και κληρονομικές ασθένειες, καθώς και μολυσματικές και ιογενείς ασθένειες.

Τι είναι η PCR για τον HIV, η αξιοπιστία του οποίου, όπως αναφέρθηκε παραπάνω, είναι μόνο ογδόντα τοις εκατό, και γιατί αυτή η διαγνωστική μέθοδος έλαβε αυτό το όνομα; Για αυτού του είδους την έρευνα, χρησιμοποιούνται διάφορα είδη βιολογικού υλικού. Αυτό είναι κυρίως αίμα όταν πρόκειται για τον ιό της ανοσοανεπάρκειας. Επίσης, για τη λήψη τεστ HIV με τη μέθοδο PCR, χρησιμοποιούνται εκκρίσεις από τα γυναικεία γεννητικά όργανα και το σπέρμα. Σε αυτή την περίπτωση, το σάλιο δεν εξετάζεται. Γιατί είναι αναποτελεσματικό. Το σάλιο περιέχει μικρό αριθμό κυττάρων του ιού. Το ίδιο μπορεί να ειπωθεί για τα ούρα, τον ιδρώτα και τα δακρυϊκά υγρά.

Ανιχνεύει το HIV PCR αντιγόνο ή όχι; Αυτή η ερώτηση τίθεται συχνά σε επαγγελματίες υγείας. Η απάντηση δεν μπορεί να είναι θετική. Δεδομένου ότι αυτή η διαγνωστική μέθοδος στοχεύει στη μελέτη του DNA και του RNA. Η ποιοτική PCR για τον HIV εκτελείται με μια συγκεκριμένη σειρά. Το απαραίτητο βιολογικό υλικό συλλέγεται από το ύποπτο μολυσμένο άτομο. Τις περισσότερες φορές, λαμβάνεται φλεβικό αίμα για μια τέτοια μελέτη. Παρεμπιπτόντως, ο ασθενής δεν συνιστάται να τρώει λιπαρά τρόφιμα για αρκετές ημέρες πριν από αυτό. Η μελέτη πραγματοποιείται με άδειο στομάχι. Το βιολογικό υλικό τοποθετείται σε ειδικό εργαστηριακό αντιδραστήρα, όπου διασπάται. Στη συνέχεια, ορισμένα ένζυμα προστίθενται στο βιολογικό υλικό (διαφέρουν για κάθε ασθένεια ή παθολογία) Προκειμένου να συντεθεί ένα αντίγραφο ενός μικροβίου, ιού ή μόλυνσης, αυτά τα ένζυμα συνδέονται με το DNA τους.

Αυτό συμβαίνει σε διάφορα στάδια σύμφωνα με την αρχή της αλυσιδωτής αντίδρασης. Πρώτον, από ένα μόριο δεοξυριβονουκλεϊκού οξέος λαμβάνονται δύο, γιατί τέσσερα κ.ο.κ. Μετά την ολοκλήρωση αρκετών κύκλων έρευνας, ο τεχνικός εργαστηρίου λαμβάνει εκατοντάδες ή χιλιάδες αντίγραφα του DNA του υλικού που μελετάται, χάρη στα οποία μπορεί εύκολα να τα συγκρίνει με το DNA οποιουδήποτε παθογόνου οργανισμού, λοιμώξεων και παθολογιών σε γενετικό επίπεδο. συμπεριλαμβανομένου του ιού της ανοσοανεπάρκειας. Χάρη σε αυτή τη μελέτη, οι ασθενείς μπορούν να κάνουν ένα τεστ PCR για HIV τύπου 1 ή 2. Μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί για τον προσδιορισμό της συγκέντρωσης των κυττάρων του ιού στο ανθρώπινο αίμα. Εάν η εξέταση PCR για HIV είναι θετική, αλλά δεν είχε προηγηθεί ανοσοστύπωμα ή έλεγχος ELISA, τότε ο ασθενής παραπέμπεται για τέτοιου είδους μελέτες. Αν της αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης είχε προηγηθεί ένας από τους παραπάνω τύπους έρευνας, τότε οι ειδικοί στον τομέα της ιατρικής δεν έχουν καμία αμφιβολία. Σε αυτή την περίπτωση, δίνεται στο άτομο μια συγκεκριμένη διάγνωση. Εάν το τεστ PCR για HIV είναι αρνητικό, αλλά οι γιατροί εξακολουθούν να έχουν αμφιβολίες, ο ασθενής μπορεί επίσης να παραπεμφθεί για πρόσθετες εξετάσεις. Αξίζει να σημειωθεί ότι ένα ψευδώς θετικό αποτέλεσμα στην περίπτωση αυτής της διαγνωστικής μεθόδου ανιχνεύεται συχνότερα από ένα ψευδώς αρνητικό. Είναι σημαντικό να γνωρίζετε ότι η εξέταση PCR για HIV δεν πραγματοποιείται με τη μέθοδο του επιχρίσματος ή της απόξεσης.

Πού μπορώ να κάνω μια εξέταση αίματος PCR για HIV και μπορεί να γίνει δωρεάν;

Όπως αναφέρθηκε παραπάνω, η έρευνα αυτού του τύπου δεν είναι πολύ συχνή στη Ρωσία. Και ο λόγος για αυτό είναι το υψηλό κόστος του. Αυτό μας επιτρέπει να συμπεράνουμε ότι είναι αδύνατο να κάνουμε μια εξέταση PCR για HIV (η αξιοπιστία της PCR για τον HIV τύπου 2 και τύπου 1 είναι η ίδια) σε μια κανονική δημόσια κλινική. Για να το κάνετε αυτό, θα πρέπει να επικοινωνήσετε με ένα εξειδικευμένο εργαστήριο ή μια κλινική επί πληρωμή. Στις μεγάλες πόλεις υπάρχουν εξειδικευμένα κέντρα για το AIDS όπου πραγματοποιούνται εξετάσεις PCR σε εμπορική βάση. Σε μικρότερους οικισμούς, δεν έχουν όλοι την ευκαιρία να υποβληθούν σε αυτό το είδος έρευνας, αλλά οι κάτοικοι τέτοιων τόπων μπορούν πάντα να επισκέπτονται τις μεγάλες πόλεις για να προσέχουν τη δική τους υγεία.

Πόσο σύντομα πρέπει να κάνω μια εξέταση PCR για HIV μετά από υποψία μόλυνσης;

Οι ειδικοί γιατροί ρωτούνται συχνά για το πόσος χρόνος χρειάζεται για να γίνει ένα τεστ PCR για HIV. Σε αυτή την περίπτωση, δεν υπάρχει διαφορά μεταξύ των μελετών. Τόσο οι δοκιμές αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης όσο και οι δοκιμές ανοσοστύπωσης ELISA θα πρέπει να εκτελούνται όχι νωρίτερα από τρεις έως τέσσερις εβδομάδες μετά την υποψία μόλυνσης. Δεν έχει νόημα η διεξαγωγή έρευνας πριν από αυτή την περίοδο. Η PCR δεν θα ανιχνεύσει τον HIV μετά από 10 ημέρες.

Σε ορισμένες περιπτώσεις, η μόλυνση μπορεί να ανιχνευθεί νωρίτερα ή αργότερα από την καθορισμένη περίοδο. Αλλά αυτό εξαρτάται από τα ειδικά χαρακτηριστικά του οργανισμού που μελετάται. Είναι σημαντικό να γνωρίζουμε ότι η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης μπορεί να ανιχνεύσει όχι μόνο μολυσμένα άτομα, αλλά και φορείς του ιού. Ο χρόνος της HIV PCR εξαρτάται σε μεγάλο βαθμό από το εργαστήριο στο οποίο γίνεται η διάγνωση. Κατά μέσο όρο δεν είναι περισσότερο από μία ημέρα. Υπάρχει όμως και ένα τεστ εξπρές που είναι απαραίτητο για μεταγγίσεις αίματος ή στην επείγουσα ιατρική.

Ο ρόλος της PCR διάγνωσης της HIV λοίμωξης στη νεογνολογία

Το τεστ HIV PCR χρησιμοποιείται στη νεογνολογία όταν οι μολυσμένες γυναίκες γεννούν παιδιά. Όλοι γνωρίζουν ότι σε αυτή την περίπτωση ο κίνδυνος μετάδοσης του ιού από τη μητέρα στο παιδί είναι εξαιρετικά υψηλός. Όλα τα νεογνά των οποίων οι μητέρες είναι μολυσμένες ή φορείς του ιού της ανοσοανεπάρκειας έχουν ήδη αντισώματα κατά του ιού της ανοσοανεπάρκειας στο αίμα τους τη στιγμή της γέννησης, ανεξάρτητα από το αν έχει συμβεί μόλυνση ή όχι. Χρησιμοποιώντας τα διαγνωστικά PCR για τον HIV, είναι δυνατό να προσδιοριστεί εάν αποτελούν τη λεγόμενη άμυνα του ανοσοποιητικού συστήματος ή συνέπεια μόλυνσης. Αυτό το είδος έρευνας δεν πραγματοποιείται τις πρώτες ημέρες της ζωής των βρεφών. Εξάλλου, εάν η μόλυνση εμφανιστεί κατά τη γέννηση μέσω του καναλιού γέννησης, τότε η άμεση ανάλυση δεν θα μπορέσει να ανιχνεύσει την ασθένεια. Θα το δείξει μόνο αν η μόλυνση ήταν ενδομήτρια. Η ακρίβεια της HIV PCR στα νεογνά είναι επίσης περίπου ογδόντα τοις εκατό.