Celulele dendritice ale sistemului imunitar. Celulele T sunt marionete sau cum să reprogramați limfocitele T pentru a vindeca cancerul Copii: norma corpurilor albe

Limfocitele T din timus se diferențiază prin dobândirea de receptori ai celulelor T (ing. TCR) și diferiți coreceptori (markeri de suprafață). Ele joacă un rol important în răspunsul imun dobândit. Ele asigură recunoașterea și distrugerea celulelor care poartă antigene străine, îmbunătățesc acțiunea monocitelor, celulelor NK și, de asemenea, participă la schimbarea izotipurilor de imunoglobuline (la începutul răspunsului imun, celulele B sintetizează IgM, mai târziu trec la producerea de IgG, IgE, IgA).

• 1 Tipuri de limfocite T
  • 1.1 T-ajutoare
  • 1.2 T-killers
  • 1.3 T-supresoare
• 2 Diferențierea în timus
  • 2.1 β-selectie
  • 2.2 Selecție pozitivă
  • 2.3 Selecția negativă
• 3 Activare
• 4 Note

Tipuri de limfocite T

Receptorii celulelor T (ing. Receptorii celulelor T (TCR)) sunt principalele complexe proteice de suprafață ale limfocitelor T responsabile pentru recunoașterea antigenelor procesate asociate cu moleculele Complexului Major de Histocompatibilitate (MHC) de pe suprafața celulelor prezentatoare de antigen. Receptorul celulelor T este asociat cu un alt complex membranar polipeptidic, CD3. Funcțiile complexului CD3 includ transducția semnalului în celulă, precum și stabilizarea receptorului celulei T de pe suprafața membranei. Receptorul celulelor T poate fi asociat cu alte proteine ​​de suprafață, co-receptori TCR. În funcție de coreceptor și de funcțiile îndeplinite, se disting două tipuri principale de celule T.

T-ajutoare

T-helpers (din engleza helper - assistant) - limfocite T, a căror funcție principală este de a spori răspunsul imun adaptativ. Aceștia activează ucigașii T, limfocitele B, monocitele, celulele NK prin contact direct, precum și umoral, eliberând citokine. Caracteristica principală a T-helpers este prezența moleculei co-receptoare CD4 pe suprafața celulei. Ajutoarele T recunosc antigenele atunci când receptorul lor de celule T interacționează cu un antigen asociat cu molecule din clasa II a complexului major de histocompatibilitate (ing. Complexul major de histocompatibilitate II (MHC-II)).

T-killers

T-helpers și T-killers formează un grup limfocitele T efectoare direct responsabil pentru răspunsul imun. În același timp, există un alt grup de celule limfocitele T reglatoare, a căror funcție este de a regla activitatea limfocitelor T efectoare. Prin modularea puterii și a duratei răspunsului imun prin reglarea activității celulelor T-efectoare, celulele T reglatoare mențin toleranța la antigenele proprii ale organismului și previn dezvoltarea bolilor autoimune. Există mai multe mecanisme de suprimare: directe, cu contact direct între celule și la distanță, efectuate la distanță - de exemplu, prin citokine solubile.

T-supresoare

Limfocitele T γδ sunt o populație mică de celule cu un receptor de celule T modificat. spre deosebire de majoritatea celorlalte celule T, al căror receptor este format din două subunități α și β, receptorul celulelor T al limfocitelor γδ este format din subunități γ și δ. Aceste subunități nu interacționează cu antigenele peptidice prezentate de complexele MHC. Se presupune că limfocitele T γδ sunt implicate în recunoașterea antigenelor lipidice.

Diferențierea în timus

Toate celulele T sunt derivate din celule stem hematopoietice roșii. măduvă osoasă care migrează în timus și se diferențiază în imature timocite. Timusul creează micromediul necesar pentru dezvoltarea unui repertoriu de celule T pe deplin funcțional, care este restricționat la MHC și auto-tolerant.

Diferențierea timocitelor este împărțită în diferite etapeîn funcţie de expresia diverşilor markeri de suprafaţă (antigeni). În stadiul cel mai incipient, timocitele nu exprimă co-receptorii CD4 și CD8 și, prin urmare, sunt clasificate drept dublu negativ (English Double Negative (DN)) (CD4-CD8-). În etapa următoare, timocitele exprimă ambii coreceptori și se numesc dublu pozitiv (DP) (CD4+CD8+). În cele din urmă, în etapa finală, sunt selectate celule care exprimă doar unul dintre coreceptori (English Single Positive (SP)): fie (CD4+) fie (CD8+).

Stadiul incipient poate fi împărțit în mai multe substadii. Deci, la substadiul DN1 (dublu negativ 1), timocitele au următoarea combinație de markeri: CD44+CD25-CD117+. Celulele cu această combinație de markeri sunt numite și progenitori limfoizi timpurii (Englez Early Lymphoid Progenitors (ELP)). Progresând în diferențierea lor, celulele ELP se divid activ și în cele din urmă își pierd capacitatea de a se transforma în alte tipuri de celule (de exemplu, limfocite B sau celule mieloide). Trecând la substadiul DN2 (dublu negativ 2), timocitele exprimă CD44+CD25+CD117+ și devin progenitori timpurii ai celulelor T (Early T-cell Progenitors (ETP)). în timpul substadiului DN3 (dublu negativ 3), celulele ETP au o combinație de CD44-CD25+ și intră în proces β-selectie.

selecția β

Genele receptorului celulelor T constau din segmente repetate aparținând la trei clase: V (variabilă), D (diversitate) și J (unire). În procesul de recombinare somatică, segmentele de gene, câte unul din fiecare clasă, sunt unite între ele (recombinare V(D)J). Secvența combinată a segmentelor V(D)J are ca rezultat secvențe unice pentru domeniile variabile ale fiecăruia dintre lanțurile receptorului. Natura aleatorie a formării secvențelor de domeniu variabil permite generarea de celule T care pot recunoaște un număr mare de antigeni diferiți și, ca rezultat, oferă o protecție mai eficientă împotriva agenților patogeni cu evoluție rapidă. Cu toate acestea, același mecanism duce adesea la formarea de subunități nefuncționale ale receptorului celulelor T. Genele care codifică subunitatea receptorului TCR-p sunt primele care suferă recombinare în celulele DN3. Pentru a exclude posibilitatea formării unei peptide nefuncționale, subunitatea TCR-β formează un complex cu subunitatea invariabilă pre-TCR-α, formând așa-numita. receptorul pre-TCR. Celulele incapabile să formeze un receptor funcțional pre-TCR mor prin apoptoză. Timocitele care au trecut cu succes de selecția β se deplasează în subetapa DN4 (CD44-CD25-) și sunt supuse procesului selecție pozitivă.

selecție pozitivă

Celulele care exprimă receptorul pre-TCR pe suprafața lor nu sunt încă imunocompetente, deoarece nu sunt capabile să se lege de moleculele complexe majore de histocompatibilitate (MHC). Recunoașterea moleculelor MHC de către receptorul TCR necesită prezența coreceptorilor CD4 și CD8 pe suprafața timocitelor. Formarea unui complex între receptorul pre-TCR și co-receptorul CD3 duce la inhibarea rearanjamentelor genelor subunității β și, în același timp, determină activarea expresiei genelor CD4 și CD8. Astfel timocitele devin dublu pozitive (DP) (CD4+CD8+). Timocitele DP migrează activ în cortexul timusului unde interacționează cu celulele epiteliale corticale care exprimă ambele complexe MHC (MHC-I și MHC-II). Celulele care nu sunt capabile să interacționeze cu complexele MHC ale epiteliului cortical suferă apoptoză, în timp ce celulele care au finalizat cu succes o astfel de interacțiune încep să se dividă activ.

selecție negativă

Timocitele care au suferit selecție pozitivă încep să migreze la marginea cortico-medulară a timusului. Odată ajunse în medulară, timocitele interacționează cu propriile antigene ale corpului prezentate pe complexele MHC ale celulelor epiteliale timice medulare (mTEC). Timocitele care interacționează activ cu propriile lor antigene suferă apoptoză. Selecția negativă împiedică apariția celulelor T auto-activante capabile să provoace boli autoimune, fiind un element important al toleranței imunologice a organismului.

Activare

Limfocitele T care au trecut cu succes selecția pozitivă și negativă în timus, au ajuns la periferia corpului, dar nu au avut contact cu antigenul sunt numite celule T naive(ing. Celule T naive). Funcția principală a celulelor T naive este de a răspunde la agenți patogeni necunoscuți anterior sistemului imunitar al organismului. După ce celulele T naive recunosc antigenul, ele devin activate. Celulele activate încep să se dividă activ, formând multe clone. Unele dintre aceste clone se transformă în celule T efectoare, care îndeplinesc funcții specifice acestui tip de limfocite (de exemplu, secretă citokine în cazul T-helpers sau lizează celulele afectate în cazul T-killers). Cealaltă jumătate a celulelor activate se transformă în celule T cu memorie. Celulele de memorie rămân într-o formă inactivă după contactul inițial cu un antigen până când apare interacțiunea repetată cu același antigen. Astfel, celulele T de memorie stochează informații despre antigenele care acționează anterior și formează un răspuns imun secundar, care se realizează într-un timp mai scurt decât cel primar.

Interacțiunile receptorului și coreceptorilor celulelor T (CD4, CD8) cu complexul major de histocompatibilitate sunt importante pentru activarea cu succes a celulelor T naive, dar nu sunt suficiente în sine pentru diferențierea în celule efectoare. Pentru proliferarea ulterioară a celulelor activate, interacțiunea așa-numitelor. molecule costimulatoare. Pentru ajutoarele T, aceste molecule sunt receptorul CD28 de pe suprafața celulei T și imunoglobulina B7 de pe suprafața celulei prezentatoare de antigen.

Note

1. Murphy K., Travers P., Walport M. Janeway's Immunobiology.- New York: Garland Science, 2011. - 888 p. - ISBN 0-8153-4123-7.
2. Alberts B., Johnson A., Lewis J., Raff M., Roberts K., Walter P. Molecular Biology of the Cell. - New York: Garland Science, 2002. - 1367 p. - ISBN 0-8153-3218-1.
3. Holtmeier W., Kabelitz D. Celulele T Gammadelta leagă răspunsurile imune înnăscute și adaptive // ​​Imunologie chimică și alergie. - 2005. - Vol. 86.-P. 151–83. - ISBN 978-3-8055-7862-2. - DOI:10.1159/000086659 - PMID 15976493.
4. Schwarz B. A., Bhandoola A. Traficul de la măduva osoasă la timus: o condiție prealabilă pentru timopoieza // Immunol. Rev.. - 2006. - Vol. 209.-P. 47–57. - DOI:10.1111/j.0105-2896.2006.00350.x - PMID 16448533.
5. Sleckman B. P. Ansamblu de gene a receptorului antigenului limfocitar: straturi multiple de reglare // Immunol Res. - 2005. - Vol. 32. - P. 153-8.

limfocitele t sunt mai mari, limfocitele t sunt normale, limfocitele t sunt crescute, limfocitele t sunt scăzute

Informații despre limfocitele T

limfocitele T, sau celulele T(din lat. t hymus „thymus”) - limfocite care se dezvoltă la mamifere în timus din precursori - pretimocite care intră în el din măduva osoasă roșie. În timus, limfocitele T se diferențiază prin dobândirea de receptori ai celulelor T (TCR, TCR engleză) și diferiți co-receptori (markeri de suprafață). Ele joacă un rol important în răspunsul imun dobândit. Acestea asigură recunoașterea și distrugerea celulelor purtătoare de antigene străine, îmbunătățesc acțiunea monocitelor, celulelor NK și, de asemenea, participă la comutarea izotipurilor de imunoglobuline (la începutul răspunsului imun, celulele B sintetizează IgM, apoi trec la producerea de IgG. , IgE, IgA).

Tipuri de limfocite T

Receptorii celulelor T sunt principalele complexe proteice de suprafață ale limfocitelor T responsabile pentru recunoașterea antigenelor procesate asociate cu moleculele complexului major de histocompatibilitate (MHC). Complex major de histocompatibilitate (MHC)) pe suprafața celulelor prezentatoare de antigen. Receptorul celulelor T este asociat cu un alt complex membranar polipeptidic, CD3. Funcțiile complexului CD3 includ transducția semnalului în celulă, precum și stabilizarea receptorului celulei T de pe suprafața membranei. Receptorul celulelor T se poate asocia cu alte proteine ​​de suprafață, co-receptorii săi. În funcție de coreceptor și de funcțiile îndeplinite, se disting două tipuri principale de celule T.

T-ajutoare

T-helpers (din engleza helper - assistant) - limfocite T, a căror funcție principală este de a spori răspunsul imun adaptativ. Aceștia activează ucigașii T, limfocitele B, monocitele, celulele NK prin contact direct și, de asemenea, umoral, eliberând citokine. Caracteristica principală a T-helpers este prezența moleculei co-receptoare CD4 pe suprafața celulei. Celulele T helper recunosc antigenele atunci când receptorul lor de celule T interacționează cu un antigen legat de moleculele complexe majore de histocompatibilitate clasa II. Complexul major de histocompatibilitate II (MHC-II)).

T-killers

T-helpers și T-killers formează un grup limfocitele T efectoare direct responsabil pentru răspunsul imun. În același timp, există un alt grup de celule limfocitele T reglatoare, a căror funcție este de a regla activitatea limfocitelor T efectoare. Prin modularea puterii și duratei răspunsului imun prin reglarea activității celulelor efectoare T, celulele T reglatoare mențin toleranța la antigenele proprii ale organismului și previn dezvoltarea bolilor autoimune. Există mai multe mecanisme de suprimare: directe, cu contact direct între celule și la distanță, efectuate la distanță - de exemplu, prin citokine solubile.

γδ limfocite T

Limfocitele T sunt o populație mică de celule cu un receptor de celule T modificat. Spre deosebire de majoritatea altor celule T, al căror receptor este format de α (\displaystyle \alpha)și β (\displaystyle \beta) subunități, receptor de celule T γ δ (\displaystyle \gamma \delta)-se formează limfocite γ (\displaystyle \gamma )și δ (\displaystyle \delta ) subunități. Aceste subunități nu interacționează cu antigenele peptidice prezentate de proteinele MHC. Se presupune că γ δ (\displaystyle \gamma \delta) Limfocitele T sunt implicate în recunoașterea antigenelor lipidice.

T-supresoare

Limfocitele T care asigură reglarea centrală a răspunsului imun.

Diferențierea în timus

Etape de diferențiere a limfocitelor T

Toate celulele T provin din celule stem hematopoietice din măduva osoasă roșie care migrează către timus și se diferențiază în imature timocite. Timusul creează micromediul necesar pentru dezvoltarea unui repertoriu de celule T complet funcțional, limitat de MHC și auto-tolerant.

Diferențierea timocitelor este împărțită în diferite etape în funcție de expresia diverșilor markeri de suprafață (antigeni). În stadiul cel mai incipient, timocitele nu exprimă co-receptorii CD4 și CD8 și, prin urmare, sunt clasificate ca dublu negativ (Dublu Negativ Englez (DN)) (CD4-CD8-). În etapa următoare, timocitele exprimă ambii coreceptori și sunt numite dublu pozitiv (Eng. Double Positive (DP) ) (CD4+CD8+). În cele din urmă, în etapa finală, sunt selectate celule care exprimă doar unul dintre co-receptori (ing. Single Positive (SP)): fie (CD4+) fie (CD8+).

Stadiul incipient poate fi împărțit în mai multe substadii. Deci, la substadiul DN1 (Englez Double Negative 1), timocitele au următoarea combinație de markeri: CD44 + CD25 -CD117 +. Celulele cu această combinație de markeri sunt numite și progenitori limfoizi timpurii. Progenitori limfoizi timpurii (ELP)). Progresând în diferențierea lor, ELP se divid activ și în cele din urmă își pierd capacitatea de a se transforma în alte tipuri de celule (de exemplu, limfocite B sau celule mieloide). Trecând la substadiul DN2 (ing. Double Negative 2 ), timocitele exprimă CD44 + CD25 + CD117 + și devin progenitori timpurii ai celulelor T (ing. Progenitori de celule T timpurii (ETP)). În timpul substadiului DN3 (ing. dublu negativ 3) celulele ETP au o combinație de CD44-CD25 + și intră în proces β-selectie.

selecția β

Genele receptorului celulelor T constau din segmente repetate aparținând la trei clase: V (variabilă ing.), D (diversitate ing.) și J (unire ing.). În timpul recombinării somatice, segmentele de gene, câte unul din fiecare clasă, sunt legate între ele (recombinare V(D)J). Combinația aleatorie de secvențe de segmente V(D)J duce la apariția unor secvențe unice de domenii variabile ale fiecăruia dintre lanțurile receptorului. Natura aleatorie a formării secvențelor de domenii variabile permite generarea de celule T care pot recunoaște un număr mare de antigeni diferiți și, ca rezultat, oferă o protecție mai eficientă împotriva agenților patogeni cu evoluție rapidă. Cu toate acestea, același mecanism duce adesea la formarea de subunități nefuncționale ale receptorului celulelor T. Genele care codifică subunitatea β a receptorului sunt primele care suferă recombinare în celulele DN3. Pentru a exclude posibilitatea formării unei peptide nefuncționale, subunitatea β formează un complex cu subunitatea α invariabilă a receptorului pre-celulei T, formând așa-numitul. receptorul pre-T (pre-TCR). Celulele incapabile să formeze pre-TCR funcțional mor prin apoptoză. Timocitele care au trecut cu succes de selecția β se deplasează în subetapa DN4 (CD44 -CD25 -) și sunt supuse procesului selecție pozitivă.

selecție pozitivă

Celulele care exprimă pre-TCR pe suprafața lor nu sunt încă imunocompetente, deoarece nu sunt capabile să se lege de moleculele complexului major de histocompatibilitate. Recunoașterea moleculelor MHC de către receptorul celulelor T necesită prezența co-receptorilor CD4 și CD8 pe suprafața timocitelor. Formarea unui complex între pre-TCR și coreceptorul CD3 duce la inhibarea rearanjamentelor genelor subunității β și, în același timp, determină activarea exprimării genelor CD4 și CD8. Astfel timocitele devin dublu pozitive (DP) (CD4+CD8+). DP-timocitele migrează activ în cortexul timusului, unde interacționează cu celulele epiteliale corticale care exprimă proteine ​​din ambele clase de MHC (MHC-I și MHC-II). Celulele care nu sunt capabile să interacționeze cu proteinele MHC ale epiteliului cortical suferă apoptoză, în timp ce celulele care realizează cu succes o astfel de interacțiune încep să se dividă activ.

selecție negativă

Timocitele care au suferit selecție pozitivă încep să migreze la marginea cortico-medulară a timusului. Odată ajunse în medulară, timocitele interacționează cu antigenele proprii ale organismului, prezentate în combinație cu proteinele MHC pe celulele epiteliale timice medulare (mTEC). Timocitele care interacționează activ cu propriile lor antigene suferă apoptoză. Selecția negativă împiedică apariția celulelor T auto-activante capabile să provoace boli autoimune, fiind un element important al toleranței imunologice a organismului.

Primul studiu este întotdeauna un număr de leucocite (vezi capitolul „Studii hematologice”). Sunt evaluate atât valorile relative, cât și absolute ale numărului de celule sanguine periferice.

Determinarea principalelor populații (celule T, celule B, natural killer) și subpopulații de limfocite T (T-helper, T-CTL). Pentru studiul primar al stării imunitare și detectarea tulburărilor severe sistem imunitar OMS a recomandat determinarea raportului CD3, CD4, CD8, CD19, CD16+56, CD4/CD8. Studiul permite determinarea numărului relativ și absolut al principalelor populații de limfocite: celule T - CD3, celule B - CD19, ucigași naturali (NK) - CD3-CD16++56+, subpopulații de limfocite T (T- helpers CD3+ CD4+, T-citotoxic CD3+ CD8+ și raportul acestora).

Metodă de cercetare

Imunofenotiparea limfocitelor se efectuează folosind anticorpi monoclonali pentru angina diferențială superficială pe celulele sistemului imunitar, utilizând citofluorometrie cu laser pe citometre în flux.

Alegerea zonei pentru analiza limfocitelor se face în funcție de markerul suplimentar CD45, care este prezent pe suprafața tuturor leucocitelor.

Condiții de prelevare și păstrare a probelor

Sânge venos prelevat din vena cubitală dimineața, strict pe stomacul gol, în sistemul de vid până la semnul indicat pe eprubetă. K2EDTA este utilizat ca anticoagulant. După prelevare, tubul de probă este răsturnat încet de 8-10 ori pentru a amesteca sângele cu anticoagulant. Depozitarea și transportul strict la 18–23°С in pozitie verticala nu mai mult de 24 de ore

Nerespectarea acestor condiții duce la rezultate incorecte.

Interpretarea rezultatelor

Limfocitele T (celule CD3+). O cantitate crescută indică hiperactivitatea sistemului imunitar, observată în leucemia limfocitară acută și cronică. O creștere a indicelui relativ are loc cu unele vyrus și infectii bacteriene la debutul bolii, exacerbări ale bolilor cronice.

O scădere a numărului absolut de limfocite T indică o deficiență a imunității celulare, și anume o deficiență a legăturii efectoare celulare a imunității. Se detectează în inflamații de diverse etiologii, neoplasme maligne, după traumatisme, operații, infarct, fumat, luare de citostatice. O creștere a numărului lor în dinamica bolii este un semn clinic favorabil.

Limfocite B (celule CD19+) Scăderea se observă cu hipogammaglobulinemie fiziologică și congenitală și agammaglobulinemie, cu neoplasme ale sistemului imunitar, tratament cu imunosupresoare, infecții virale acute și bacteriene cronice și starea după îndepărtarea splinei.

Limfocite NK cu fenotip CD3-CD16++56+ Celulele ucigașe naturale (celule NK) sunt o populație de limfocite granulare mari. Ei sunt capabili să lizeze celulele țintă infectate cu viruși și alți antigeni intracelulari, celule tumorale și alte celule de origine alogenă și xenogeneică.

O creștere a numărului de celule NK este asociată cu activarea imunității anti-transplant, în unele cazuri se observă în astmul bronșic, apare în boli virale, crește cu neoplasmele maligne și leucemia, în perioada de convalescență.

Limfocite T helper cu fenotip CD3+CD4+ O creștere a cantităților absolute și relative se observă în bolile autoimune, poate fi cu reactii alergice, niste boli infecțioase. Această creștere indică stimularea sistemului imunitar la antigen și servește ca confirmare a sindroamelor hiperreactive.

O scădere a numărului absolut și relativ de celule T indică un sindrom hiporeactiv cu o încălcare a legăturii de reglementare a imunității, este un semn patognomic pentru infecția cu HIV; are loc la boli cronice(bronșită, pneumonie etc.), tumori solide.

Limfocite T-citotoxice cu fenotip CD3+ CD8+ O creștere este detectată în aproape toate infecțiile cronice, infecții virale, bacteriene, protozoare. Este caracteristică infecției cu HIV. Scăderea se observă în hepatitele virale, herpesul, bolile autoimune.

Raportul CD4+/CD8+ Studiul raportului CD4+/CD8+ (CD3, CD4, CD8, CD4/CD8) este recomandat doar pentru monitorizarea infecției cu HIV și controlul eficacității terapiei ARV. Vă permite să determinați numărul absolut și relativ de limfocite T, subpopulații T-helper, CTL și raportul acestora.

Intervalul de valori este 1,2-2,6. Scăderea se observă în imunodeficiențe congenitale (sindrom DiGeorge, Nezelof, Wiskott-Aldrich), infecții virale și bacteriene, procese cronice, expunere la radiații și toxice. substanțe chimice, mielom multiplu, stres, scade cu varsta, cu afectiuni endocrine, tumori solide. Este un semn patognomic al infecției cu HIV (mai puțin de 0,7).

O creștere a valorii de peste 3 - în boli autoimune, leucemie acută limfoblastică T, timom, leucemie T cronică.

Modificarea raportului poate fi legată de numărul de ajutoare și CTL la un anumit pacient. De exemplu, o scădere a numărului de celule T CD4+ în pneumonia acută la debutul bolii duce la o scădere a indicelui, în timp ce CTL-urile s-ar putea să nu se modifice.

Pentru cercetări suplimentare și detectarea modificărilor sistemului imunitar în patologii care necesită o evaluare a prezenței unui proces inflamator acut sau cronic și a gradului de activitate a acestuia, se recomandă includerea numărării numărului de limfocite T activate cu fenotipul CD3+HLA-DR+ și a celulelor TNK cu CD3+CD16+. +56+ fenotip.

Limfocite T-activate cu fenotip CD3+HLA-DR+ Un marker al activării târzii, un indicator al hiperreactivității imune. Prin exprimarea acestui marker, se poate judeca severitatea și puterea răspunsului imun. Apare pe limfocitele T după a 3-a zi de boală acută. Cu o evoluție favorabilă a bolii, aceasta scade la normal. O creștere a expresiei pe limfocitele T poate fi asociată cu multe boli asociate cu inflamația cronică. Creșterea sa a fost observată la pacienții cu hepatită C, pneumonie, infecție HIV, tumori solide, boli autoimune.

Limfocite ТNK cu fenotip CD3+CD16++CD56+ Limfocitele T poartă markeri CD16++ CD 56+ pe suprafața lor. Aceste celule au proprietăți atât ale celulelor T, cât și ale celulelor NK. Studiul este recomandat ca marker suplimentar pentru bolile acute și cronice.

Scăderea lor în sângele periferic poate fi observată în diferite boli specifice organelor și boli sistemice. procese autoimune. S-a observat o creștere a bolilor inflamatorii de diferite etiologii, procese tumorale.

Studiul markerilor precoce și tardiv ai activării limfocitelor T (CD3+CD25+, CD3-CD56+, CD95, CD8+CD38+) prescris suplimentar pentru a evalua modificările IS în bolile acute și cronice, pentru diagnostic, prognostic, monitorizare a evoluției bolii și terapie în curs.

Limfocite T-activate cu fenotip CD3+CD25+, receptor IL2 CD25+ este un marker de activare precoce. Starea funcțională a limfocitelor T (CD3+) este evidențiată de numărul de receptori care exprimă IL2 (CD25+). În sindroamele hiperactive, numărul acestor celule crește (acute și leucemie limfocitară cronică, timom, respingerea grefei), în plus, creșterea lor poate indica un stadiu incipient al procesului inflamator. În sângele periferic, acestea pot fi detectate în primele trei zile de boală. O scădere a numărului acestor celule poate fi observată în imunodeficiențe congenitale, procese autoimune, infecție cu HIV, infecții fungice și bacteriene, radiatii ionizante, îmbătrânire, otrăvire cu metale grele.

Limfocite T-citotoxice cu fenotip CD8+CD38+ Prezența CD38+ pe limfocitele CTL a fost observată la pacienții cu diverse boli. Indicator informativ pentru infecția HIV, boala arsurilor. O creștere a numărului de CTL cu fenotipul CD8+CD38+ se observă în procesele inflamatorii cronice, oncologice și unele boli endocrine. În timpul terapiei, rata scade.

Subpopulație de ucigași naturali cu fenotip CD3-CD56+ Molecula CD56 este o moleculă adezivă larg reprezentată în tesut nervos. În plus față de ucigașii naturali, este exprimat pe multe tipuri de celule, inclusiv limfocitele T.

O creștere a acestui indicator indică extinderea activității unei clone specifice de celule ucigașe, care au o activitate citolitică mai mică decât celulele NK cu fenotipul CD3-CD16+. Numărul acestei populații crește cu tumori hematologice (limfom cu celule NK sau cu celule T, mielom cu celule plasmatice, limfom cu celule mari aplastic), boli cronice și unele infecții virale.

Scăderea se constată în imunodeficiențe primare, infecții virale, boli cronice sistemice, stres, tratament cu citostatice și corticosteroizi.

receptor CD95+ este unul dintre receptorii apoptozei. Apoptoza este un proces biologic complex necesar pentru îndepărtarea celulelor deteriorate, vechi și infectate din organism. Receptorul CD95 este exprimat pe toate celulele sistemului imunitar. Joacă un rol important în controlul funcționării sistemului imunitar, deoarece este unul dintre receptorii apoptozei. Expresia sa pe celule determină gradul de pregătire a celulelor pentru apoptoză.

O scădere a proporției de limfocite CD95+ în sângele pacienților indică o încălcare a eficacității ultimei etape de sacrificare a celulelor proprii defecte și infectate, ceea ce poate duce la o recidivă a bolii, cronicitatea procesului patologic, dezvoltarea bolilor autoimune și o creștere a probabilității transformării tumorii (de exemplu, cancer de col uterin cu infecție papilomatoasă). Determinarea exprimării CD95 are valoare prognostică în bolile mielo- și limfoproliferative.

O creștere a intensității apoptozei se observă în bolile virale, afecțiunile septice și utilizarea de droguri narcotice.

Limfocite activate CD3+CDHLA-DR+, CD8+CD38+, CD3+CD25+, CD95. Testul reflectă starea funcțională a limfocitelor T și este recomandat pentru monitorizarea evoluției bolii și monitorizarea imunoterapiei pentru boli inflamatorii de diverse etiologii.

Activarea celulară este înțeleasă ca tranziția lor de la o stare de repaus la o stare funcțional activă - macrofagele produc specii reactive de oxigen, mastocitele aruncă granule, celulele musculare se contractă etc. În cazul unui limfocit, activarea înseamnă și părăsirea stării de repaus (G0), dar într-un sens ușor diferit: limfocitul în repaus este în exterior. ciclul celulei, iar activarea lui înseamnă intrarea în ciclu. Această consecință a activării limfocitelor este profund funcțională, deoarece orice manifestare a funcției limfocitelor trebuie să fie precedată de reproducerea lor (deoarece numărul inițial de celule din fiecare clonă este mic). Acest lucru nu se aplică ucigașilor naturali - limfocite, a căror populație nu are o structură clonală. Activarea celulelor NK nu este asociată cu proliferarea și înseamnă o tranziție la o stare de pregătire pentru a îndeplini o funcție citotoxică.
Baza moleculară a activării celulelor T
Activarea celulelor, inclusiv a limfocitelor, este întotdeauna asociată cu exprimarea multor gene. În cazul limfocitelor, activarea ar trebui să conducă, în primul rând, la exprimarea genelor care asigură expansiunea proliferativă a clonei. Esența preparării celulelor T pentru proliferare constă în primul rând în exprimarea genelor autocrine. factor de creștere- IL-2 și receptorul său, sau mai degrabă lanțul a al acestui receptor, care asigură atingerea nivelului necesar de afinitate pentru citokină, care servește drept condiție pentru ca receptorul să își îndeplinească funcțiile. Ambele gene sunt inductibile; în stare de repaus, acestea sunt oprite, dar sunt exprimate ca răspuns la un efect inductor. Semnalul de pornire a genei vine din regiunea sa reglatoare (promotoare), care conține locuri de interacțiune specifice cu anumite proteine ​​- factori de transcripție. Unele dintre aceste proteine ​​sunt prezente inițial în celulă într-o formă activă, dar cele mai multe sunt absente și pot fi sintetizate de novo sau activate prin fosforilare sau îndepărtarea subunității inhibitoare. Astfel, baza moleculară a activării este formarea factorilor de transcripție necesari care asigură includerea genelor inductibile.
Limfocitele T sunt activate de inductori de activare. În condiții fiziologice, un astfel de inductor este un stimul antigenic. Prin ea însăși, recunoașterea antigenului la contactul T-helper cu APC nu poate afecta activitatea genei datorită disocierii spațiale a receptorului membranar și a genelor localizate în nucleu. TCR intră în celulă după ce se leagă de un antigen, nu pentru a migra către nucleu și pentru a afecta activitatea genei, ci pentru a fi scindat. Cu toate acestea, atunci când complexul antigenic se leagă de TCR, în combinație cu un efect de costimulare, apare un semnal care ajunge la nucleu și reglează expresia genelor. Transmisia semnalului se realizează conform principiului cascadei. În diferite stadii de transducție a semnalului, acesta este realizat de molecule de enzime (în principal protein kinaze care activează proteinele în fiecare etapă succesivă de transducție a semnalului), precum și de adaptor și proteine ​​de legare a GTP. Semnalul este inițial dual, deoarece transmisia sa se realizează simultan de la TCR și CD28. Apoi aceste căi se intersectează și din nou se împart în mai multe ramuri. Rezultatul final al transducției semnalului de-a lungul fiecărei căi de semnalizare este formarea unui factor de transcripție. Pe fig. 3.90 prezintă o schemă tipică de transmitere a semnalului intracelular, culminând cu formarea factorilor de transcripție și activarea genelor. Activarea celulelor T necesită formarea a trei factori de transcripție, NF-AT, NF-kB și AP-1. În continuare, luăm în considerare implementarea transmisiei de semnal intracelular folosind exemplul activării T-helper la recunoașterea unui antigen prezentat de celulele dendritice.
Legarea complexului MHC-II-peptidă provoacă modificări conformaționale în molecula TCR și molecula eptor miez CD4 asociată. Încă nu se știe complet dacă acest lucru modifică doar conformația receptorilor sau dacă aceștia se oligomerizează. Astfel de modificări activează tirozin kinazele asociate cu receptorul și coreceptor - Lck (p56lck) asociat cu CD4 și Fyn (p59fyn) asociat cu CD3. Aceste tirozin kinaze se numesc receptor, sau proximale, datorita faptului ca sunt direct adiacente receptorului, intrand in complexul receptor. Ambele aceste kinaze aparțin familiei Src kinazei. Kinazele acestei familii conțin domeniile SH1, SH2 și SH3 (SH - din Src-omology) (Fig. 3.91). Primul domeniu are activitate enzimatică, restul interacționează cu alte kinaze și proteine ​​adaptoare. Funcția tirozin kinazelor este de a fosforila proteinele țintă la reziduul de tirozină, ceea ce este necesar pentru activarea lor și manifestarea funcțiilor, inclusiv a celor enzimatice. Țintele receptorilor kinazelor sunt numeroase. Acestea includ moleculele Fyn și Lck în sine (care determină autofosforilarea lor), precum și lanțurile polipeptidice TCR și alte kinaze. Țintele kinazei Lck sunt deosebit de diverse.
Totuși, condiția inițială pentru activarea receptorilor kinazelor este, dimpotrivă, defosforilarea acestora, care asigură re-

trece de la hiperfosforilat la normal. Faptul este că într-o celulă în repaus, domeniul SH2 al kinazei Lck este într-o formă pliată datorită fosforilării restului de tirozină C-terminal Y505 de către kinaza Csk activată constitutiv. Y505 fosforilat interacționează prin intermediul unei grupări fosfat cu un reziduu de tirozină în domeniul Sffi, spre care este trasă capătul C-terminal al moleculei. În această formă, enzima nu este activă, deoarece restul Y394 important din punct de vedere funcțional din domeniul SH1 nu poate fi fosforilat. Pentru a elimina o astfel de blocare funcțională, este necesară defosforilarea, urmată de desfășurarea moleculei, care se realizează cu participarea tirozinfosfatazei. Rolul principal în transferul receptorilor kinazelor în starea „de lucru” îl joacă molecula CD45, al cărei domeniu citoplasmatic are activitatea tirozin fosfatazei. S-a menționat deja mai devreme că această moleculă mare, care împiedică formarea unui contact strâns între celula dendritică și T-helper, este mai întâi îndepărtată din zona sinapsei imune, iar apoi unele dintre molecule se întorc în această zonă pentru a-și efectua. funcția – defosforilarea moleculelor receptorului tirozin kinazei. Odată ce reziduul Y394 devine disponibil pentru fosforilare, Lck poate prezenta activitate tirozin kinazei.
În generarea semnalelor transmise din lanțurile polipeptidice ale complexului TCR-CD3, cea mai importantă este prezența în regiunea citoplasmatică a lanțurilor y-, 5-, e- și Z a secvenței de activare ITAM, care are fost menționat în mod repetat. Structura acestui motiv este următoarea: YXXI / L / VX (6-8) YXXI / L / V (unde Y este tirozină, X este orice reziduu, I / L / V este izoleucină, leucină sau valină) (Fig. 3,92). Fosforilarea reziduurilor de tirozină

Orez. 3,92. Comparația caracteristicilor motivelor de activare și inhibitoare (ITAM și ITIM)

în ITAM face această regiune accesibilă pentru recunoaștere de către regiuni similare ale moleculelor de semnalizare situate mai distal. Dintre lanțurile polipeptidice TCR, lanțul Z este cel mai important pentru transducția semnalului. Spre deosebire de lanțurile y-, 5- și e ale TCR, care au fiecare câte un situs ITAM, partea citoplasmatică a lanțului Z conține 3 secvențe ITAM concepute pentru a interacționa cu reziduurile de tirozină ale tirozin kinazei ZAP-70 (de la Proteina asociată Z - proteina asociată ^-; masa 70 kDa) - un factor cheie în transmiterea semnalului de la TCR atunci când se leagă de ligand. Fosforilarea lanțului Z este etapa cea mai responsabilă și, în același timp, cea mai vulnerabilă a activării celulelor T. Se crede că pentru a asigura fosforilarea tuturor motivelor ITAM ale acestei molecule, este necesar întreținere pe termen lung contactul limfocitelor T și celulele dendritice. În lanțul Z al unei celule T în repaus, 1 reziduu de tirozină este fosforilat; absenţa fosforilării duce la dezvoltarea apoptozei (Fig. 3.93). După interacțiunea lanțului Z și a kinazei ZAP, începe

Orez. 3,94. Schema căilor de semnalizare în timpul activării celulelor T. Recunoașterea complexului moleculei MHC cu un epitop antigenic în combinație cu costimularea induce declanșarea semnalelor transmise nucleului prin 5 cascade care asigură formarea a 3 factori de transcripție necesari activării celulare. Contur îndrăzneț a înconjurat factorii pentru care este afișat grad înalt dependenta de costimulare

Un proces la scară completă apare sub forma mai multor căi paralele pentru transmiterea unui semnal de activare (Fig. 3.94).
Molecula ZAP-70 aparține tirozin kinazelor din familia Syk. Conține un tandem de două domenii SH2. Condiția pentru interacțiunea sa cu fchain este fosforilarea preliminară a reziduurilor de tirozină din fchain ITAM. După fosforilare, al 2-lea reziduu de tirozină din motivele fchain ITAM interacționează cu tirozina domeniilor S^ ale kinazei ZAP-70. Ca urmare, gruparea fosfat a tirozinei phchain devine comună cu tirozina domeniului Sffi al moleculei ZAP-70. Aceasta este urmată de fosforilarea resturilor de tirozină în domeniul enzimatic al moleculei ZAP-70, efectuată de tirozin kinazele Lck și, eventual, Fyn, ceea ce duce la includerea activității enzimatice (kinazei) a moleculei.
Transmiterea ulterioară a semnalului se datorează interacțiunii ZAP-70 cu substratul său principal - proteina adaptor LAT (de la Linker for activation of T-cells - T-cell activation linker). Această proteină este asociată cu membrana și face parte din plute. După fosforilarea catalizată de ZAP-70, LAT dobândește capacitatea de a lega moleculele semnal implicate în transducția ulterioară a semnalului: proteinele adaptoare SLP-76, Grb2, factorul Vav, precum și enzimele PLCy1 și PI3K. Activarea unora dintre proteinele menționate depinde de LAT nu direct, ci indirect. Deci, prin domeniile SH3

proteinele adaptoare din familia Grb2, factorii SLP-76 și Sos sunt conectați la calea de semnalizare. SLP-76, la rândul său, mediază conexiunea la calea de semnalizare a PLСy1 și GTPase Ras. Activarea PLCy1 are loc cu participarea tirozin kinazei Itk, aparținând familiei Btk, a treia familie (după Src și Syk) de tirozin kinaze implicate în transducția semnalului intracelular în timpul activării limfocitelor. Toți factorii de semnalizare implicați în procesul de activare cu implicare directă și indirectă a LAT sunt recrutați în membrana celulară și interacționează cu componentele sale fosfoinozitid. Complexul format în timpul interacțiunii dintre SLP-76, Vav și Nck reacționează cu proteinele citoscheletice PAK și WASP, care servesc ca mediatori ai rearanjamentelor în citoscheletul celulelor activate.
PLCy1 activat catalizează scindarea fosfatidilinozitolului 4,5-bifosfat pentru a forma diacilglicerol (DAG), care rămâne legat de membrană, și inozitol-1,4,5-trifosfat (Fig. 3.95). Trifosfatul de inozitol intră în citoplasmă și interacționează cu receptorii de pe suprafața reticulului endoplasmatic, ceea ce determină eliberarea ionilor de Ca2+ din depozitul intracelular. Depleția acestuia din urmă determină deschiderea canalelor dependente de Ca2+ în membrana celulară, prin care ionii de Ca2+ intră în celulă din spațiul extracelular. Ca urmare, concentrația ionilor liberi de Ca2+ în citoplasma celulei crește. Ionii de Ca2+ activează calcineurin fosfataza, care defosforilează componenta citoplasmatică a factorului de transcripție NF-AT (Nuclear factor of activated T-cells - the nuclear factor of activated T cells) (Fig. 3.96). Acest lucru face ca factorul să migreze către nucleu, să interacționeze cu componenta nucleară și să formeze forma matură a moleculei NF-AT capabilă să interacționeze cu ADN-ul în regiunile promotoare ale genelor implicate în activarea celulelor T (IL2, IL2R, etc.).
Diacilglicerolul a fost considerat în mod tradițional ca un factor care activează protein kinaza C (PKC) - serină / tre-

Orez. 3,96. Legătura de activare a celulelor T dependentă de Ca2+ și blocarea acesteia de către ciclosporina A. Calea de semnalizare dependentă de inozitol trifosfat duce la mobilizarea factorului de transcripție NF-AT în nucleu. Această cale poate fi blocată de ciclosporina A, care, în combinație cu ciclofilina, poate inactiva calcineurin fosfataza, care este responsabilă de defosforilarea factorului citoplasmatic NF-AT (care servește drept condiție pentru migrarea acestuia în nucleu)

onine kinaza, recunoscută ca unul dintre factorii cheie în activarea celulelor T. Cu toate acestea, s-a dovedit că izoformele PKC activate de diacilglicerol nu sunt legate de activarea celulelor T. Acesta implică izoforma 0 PKC, care apare în sinapsa imună la vârful „maturității” acesteia. Recrutarea lui în sinapsa imună depinde de activitatea lui P13K și Vav (cel din urmă factor este asociat cu citoscheletul, al cărui rol în transportul PKC0 este foarte important). Deoarece activarea Vav depinde de semnalizare nu numai prin TCR, ci și prin CD28, iar calea dependentă de CD28 este realizată cu participarea PI3K (este asociată cu CD28 - vezi mai jos), devine evident că PI3K și Vav reprezintă diferite stadiile aceleiași căi de semnalizare și, prin urmare, implicarea în activarea moleculei PKC0 depinde de costimularea prin CD28. În același timp, rolul semnalelor care provin de la TCR în activarea PKC0 este fără îndoială, deoarece PKC0 este fosforilat (și, prin urmare, activat) de kinaza Lck. Alți factori, inclusiv diacilglicerolul, pot participa la activarea PKC0, dar aceste influențe sunt secundare. Activarea PKC0 este necesară pentru a preveni apoptoza celulelor activate și pentru a activa doi dintre cei trei factori de transcripție critici necesari pentru exprimarea genelor IL2 și IL2R, AP-1 și NF-kB. Activarea AP-1 dependentă de PKC0 este realizată prin ramura Rac/JNK a cascadei MAP (va fi discutată mai jos). Calea care duce la activarea factorului de transcripție NF-kB conține ca

legăturile intermediare au activat secvențial (cu participarea PKC0) factori CARMA-1, Bcl-10 și MALT-1, IKK. IKK fosforilează subunitatea inhibitoare a NF-kB - IkK, dându-i capacitatea de a lega ubiquitina, ceea ce predetermina degradarea sa ulterioară. Aceasta eliberează subunitatea activă NF-kB, care migrează în nucleu și acționează ca un factor de transcripție, unul dintre cei trei necesari pentru exprimarea genelor de activare a celulelor T. Factorul de transcripție NF-kB, care joacă un rol cheie în activarea celulelor imune înnăscute, a fost discutat mai sus (a se vedea secțiunea 2.2.4).
O altă cale de semnalizare care este declanșată de activarea limfocitelor T, cascada MAP sau modulul MAP (de la kinaze activate de mitogen - kinaze activate de mitogen), este, de asemenea, utilizată pe scară largă în timpul activării celulare. Rolul său este în principal de a induce factorul de transcripție AP-1 (dimer c-jun/c-fos). Există 3 ramuri ale acestei cascade, ducând la formarea a trei tipuri de MAP kinaze (MAP ^ - ERK1 / ERK2 (din Extracellular signal-regulated kinaze - kinaze regulate prin semnale extracelulare), p38 și JNK (din c-Jun NH2-). kinaze terminale - c -Jun NH2-kinaze terminale).Cascadele care conduc la activarea MAP-kinazelor sunt pornite cu participarea proteinelor adaptoare și a GTPazelor cu greutate moleculară mică.Una dintre proteinele adaptoare, Grb2 (proteina 2 legată de receptorul factorului de creștere). ), este activat la interacțiunea cu factorul LAT.Grb2 activat se leagă spontan de o altă proteină activată de LAT, SLP-76 și Sos (din Son of sevenless) Sos este un factor de înlocuire a nucleotidelor guaninei: determină înlocuirea GDP cu GTP în proteinele G mici (adică proteinele de legare la nucleotide de guanină Prin urmare, complexul SLP-76/Grb2/Sos determină activarea proteinei G Ras, transformând GDP-ul asociat în GTP. Ras-GTP activează serină/treonin kinaza Raf ( MAP kinaze kinaze kinaze - MKKK). Urmează o cascadă de reacții: R af activează MEK (MAP kinaze kinaze - MCK), iar MEK activează MAP kinazele ERK1 și ERO menționate mai sus. Activarea ramului JNK a cascadei MAP este inițiată de factorul Vav menționat mai sus (în funcție de LAT și asociat cu activarea citoscheletului, precum și PKC0, vezi mai sus). Determină conversia PIB-ului în GTP în complex cu proteina G Rac (familia Rho). Rac-GTP activează MEKK kinaza (acționând ca MKKK), activează JNKK kinaza (MKK), care la rândul său activează JNK MAP kinaza. A treia cale a modulului MAP, care duce la formarea kinazei p38 MAP, depinde, de asemenea, de proteinele G din familia Rho. Este similar în schiță generală cu celelalte două căi, dar a fost studiat mai puțin în detaliu.
Kinazele MAP ERK1/ERK2, JNK și p38 sunt activate prin fosforilarea resturilor de treonină și tirozină în motivul TXY, cu diferite reziduuri (Glu, Pro și, respectiv, Gly) jucând rolul lui X în trei tipuri de kinaze. Aceste MAP kinaze determină formarea factorilor de transcripție implicați în mulți procesele celulare. ERK1/ERK2 determină formarea factorilor de transcripție АР-1 și Elk-1, JNK - factori ATF2, Elk-1 și c-Jun (componenta АР-1), p38 - factori ATF2, Elk-1 și MEF-2C.
Activarea căilor de semnalizare de mai sus în timpul activării celulelor T are loc cu legarea paralelă a TCR și costimularea prin molecula CD28. Diferențierea căilor de semnalizare pornite prin aceste molecule de membrană, precum și descifrarea interacțiunii acestor căi, nu a fost complet finalizată. Cu toate acestea, imaginea de ansamblu reiese suficient de clar pentru a oferi o înțelegere generală a bazei moleculare a costimularii. Când legarea TCR este coordonată cu legarea co-receptorului, are loc o modificare a conformației complexului TCR-CD3, CD4 determină activarea receptorilor tirozin kinazelor Fyn și Lck, precum și a fosfatazei CD45. Rezultatul final al evenimentelor „proximale” este fosforilarea lanțului Z al complexului receptor și transmiterea unui semnal de activare către kinaza ZAP-70. În plus, cu participarea proteinelor adaptoare LAT, SLP-76 și Vav, regiunea implicată în transducția semnalului este extinsă semnificativ, inclusiv kinazele legate de membrană, citoscheletul și proteinele G mici. Calea de semnalizare care duce (prin activarea PLCyl, formarea trifosfatului de inozitol și activarea calcineurinei) la mobilizarea Ca2+ și activarea factorului de transcripție NF-AT pare să fie realizată fără participarea directă a semnalelor generate în timpul costimularii. Alte căi sunt mai mult sau mai puțin dependente de semnalul costimulator.
Cea mai directă consecință a costimularii prin CD28 este activarea enzimei membranare PI3K, care este asociată fizic cu molecula CD28. Această enzimă catalizează formarea de fosfatidilinozitol 4,5-bifosfat, care servește ca sursă de inozitol trifosfat. Cu toate acestea, acest eveniment nu este direct legat de activare și poate fi considerat pregătitor. La activarea celulară, fosfatidilinozitol trifosfat activează Vav, un factor nodal responsabil de implicarea în procesul de activare a citoscheletului și implicat în recrutarea și activarea protein kinazei PKC0. Această enzimă este importantă pentru funcționarea căii de semnalizare care duce la formarea factorilor de transcripție NF-kB și AP-1. În ambele cazuri, rolul PKC0 este cel mai pronunțat în includerea ramurii Rac/JNK a cascadei MAP. Ramurile Raf/ERK și Rac/p38 ale cascadei MAP sunt mai puțin dependente de PKC0 și, în consecință, de costimulare. Astfel, baza moleculară a costimularii este implicarea în procesul de activare T-helper a căilor de semnalizare implementate cu participarea a trei factori cheie - PI3K, factorul Vav și izoforma protein kinazei C 0. Dintre cei trei factori cheie de transcripție care declanșează genele de activare a celulelor T, expresia a două (AP-1 și NF-kB) depinde de costimulare și nu este necesară doar costimularea pentru producerea de NF-AT.
Astfel, ca rezultat, în celula T se formează 3 factori de transcripție - NF-AT, NF-kB AP-1. Acești factori sunt formați în moduri diferite. NF-AT activ se formează ca rezultat al asamblarii unui dimer care include subcomponentele citoplasmatice și nucleare ale NF-AT - NF-ATc și NF-ATn. Dacă NF-ATn este un factor constitutiv întotdeauna prezent în nucleul celulei T, NF-ATc trebuie activat pentru a migra în nucleu, ceea ce se realizează prin defosforilarea sa catalizată de calcineurină (vezi mai sus). Factorul de transcripție NF-kB este activat prin scindarea subunității inhibitoare IkB din complexul IkB-NF-kB. După cum sa menționat mai sus, acest lucru are loc atunci când IkB este fosforilat de IKK kinaza, care este activată cu participarea PKC0. Subunitatea fosforilată devine disponibilă pentru degradare

de-a lungul căii ubiquitinei. Factorul AP-1 este un dimer al produselor proteice a două proto-oncogene inductibile - c-fos și c-jun. Exprimarea acestor gene și sinteza proteinelor necesită factori de transcripție corespunzători, și anume Elk-1 (pentru c-fos) și JNK (pentru c-jun). După cum sa menționat mai sus, Elk-1 și JNK sunt produsele finale ale diferitelor ramuri ale cascadei MAP. Proteinele c-fos și c-jun sintetizate de novo formează homo- și heterodimeri care formează factorul de transcripție AP-1.
Cei trei factori luați în considerare (NF-AT, NF-kB și AP-1) sunt necesari pentru inducerea genelor de activare a celulelor T, în primul rând IL2 și IL2R. Regiunea promotor a genei IL2 conține 9 situsuri de legare pentru factorii de transcripție (Fig. 3.97). Printre acestea, există 2 site-uri de legare pentru octomerul octombrie, care nu limitează procesul de inducție a genelor. Dintre cei trei factori cheie de transcripție, NF-kB interacționează cu promotorul la un loc independent de alți factori de transcripție. Alți doi factori, NF-AT și AP-1, interacționează cu promotorul atât separat unul de celălalt (prin 1 situs de legare) cât și într-un complex (3 situsuri de legare). Umplerea tuturor situsurilor cu factorii de transcripție corespunzători, ceea ce duce la inducerea genelor, este rezultatul final al transducției semnalului în timpul activării celulelor T.
Căile de semnalizare implicate în activarea ajutoarelor T au fost discutate în detaliu mai sus. Activarea celulelor T citotoxice se realizează prin mecanisme similare.
3.5.2.2. Manifestări ale activării celulelor T
Activarea celulelor T CD4+ (precum și a oricăror limfocite T) duce la exprimarea unui număr mare de gene, printre care genele IL2 și IL2R, care codifică citokina IL-2 și lanțul α al receptorului său, joacă cel mai mare nivel. rol în implementarea principalelor evenimente efectoare. Exprimarea genei IL2 are loc la aproximativ 1 oră după primirea unui semnal de stimulare. Secreția proteinei IL-2 de către celulele T stimulate in vitro este detectată după 3-4 ore; atinge un vârf după 8-12 ore și se oprește după 24 de ore.In vivo, secreția de IL-2 începe la 1-3 zile după administrarea antigenului

Orez. 3,98. Dinamica temporală a expresiei moleculelor de activare a celulelor T. Pe grafic
Este prezentat momentul de exprimare a moleculelor cheie de activare după stimularea celulelor T.

(imunizare) și persistă 7-12 zile. Exprimarea lanțului α al receptorului IL-2 are loc ceva mai târziu și durează mai mult - in vitro este detectată la 4 ore după stimulare; atinge maximul după 2-3 zile şi se opreşte după 5 zile (Fig. 3.98).
Concomitent cu gena IL2, cât mai curând posibil după acțiunea stimulatorului (în condiții fiziologice, complexul antigenic peptidă-MHC), se exprimă genele c-Myc și N-Myc, numite gene de activare precoce. Ele sunt implicate în pregătirea celulelor pentru mitoză. După 2-3 ore, CD69 apare pe suprafața celulei T, cel mai timpuriu antigen de activare, mobilizat parțial din depozitele intracelulare și exprimat parțial de novo. Expresia sa durează puțin mai mult de o zi. La scurt timp după CD69, pe suprafața celulei apare un alt marker de activare precoce, CD25, reprezentând lanțul a deja menționat al receptorului IL-2. Ceva mai devreme, sunt detectate expresia unui număr de gene de citokine și sinteza unor cantități limitate de citokine corespunzătoare (IFNy, IL-4, IL-5, IL-6).
Următoarele manifestări de activare se observă la o zi după acțiunea stimulatorului, când se exprimă molecula receptoră pentru transferină (CD71). Acest factor joacă un rol important în proliferare, deoarece ionii de fier sunt necesari pentru implementarea sa. În următoarele zile (3-6 zile), sunt exprimate molecule MHC-II, care sunt clasificate ca markeri tardivi ai activării celulelor T, iar apoi p1-integrine, denumite antigene de activare foarte tardivă - VLA (Very late activation antigens). ), iar chemokinele sunt secretate. Aceste manifestări târzii ale activării celulare sunt combinate cu procesul proliferativ.

receptorul celulelor T. Celulele T recunosc antigenul folosind două tipuri de glicoproteine ​​membranare - receptorii celulelor T și CD3. Receptorul celulelor T este un heterodimer care conține lanțuri a și p (aproximativ 98% din toate celulele T) sau 5 lanțuri (aproximativ 1,5-2% din celule) cu o greutate moleculară de 40-50 kD. Receptorul celulelor T face parte dintr-o superfamilie de molecule de suprafață celulară asemănătoare Ig implicate în reacțiile de recunoaștere. Mecanismele de transmitere transmembranară de la receptorul celulelor T rămân necunoscute; se presupune că se datorează CD3, asociat necovalent cu receptorii limfocitelor T.

Activarea celulelor T

Pentru a activa celulele T sunt necesare două semnale de la macrofage. Primul semnal este prezentarea Ag, al doilea este secreția unui factor de activare (IL-1). Acesta din urmă stimulează sinteza IL-2 de către limfocitele T, care activează aceste celule (reglare autocrină). În același timp, expresia receptorilor pentru IL-2 (CD25) crește pe membranele celulelor T.

Subpopulații de limfocite T

Pe baza markerilor de suprafață, există mai multe subpopulații de limfocite Tîndeplinind diverse funcții. Pentru Diferențierea celulelor T utilizați un set de anticorpi monoclonali care detectează markerul de suprafață CD-Ag [din engleză. cluster de diferențiere]. Toate mature celulele T CD3-Ag de suprafață expres; în plus față de acesta, subpopulațiile de limfocite T exprimă și alte CD-Ag.

limfocite CD4+

Molecule de membrană CD4 transportă diferite populații de celule, împărțite în mod convențional în reglatoare (ajutoare) și efectoare (T hzt).

T-ajutoare[din engleza. pentru a ajuta] recunoaște în mod specific Ag și interacționează cu macrofagele și celulele B în timpul inducerii răspunsului imun umoral. Raportul celulelor CD4 + /CD8 + - este un parametru important pentru evaluarea stării imune; în condiții normale, raportul CD4 + /CD8 + este aproximativ egal cu doi și reflectă influența dominantă asupra răspunsului imun al factorilor stimulatori. În unele stări de imunodeficiență, raportul este inversat (mai puțin decât I, adică domină celulele CD8 +), indicând o influență predominantă a efectelor imunosupresoare; stă la baza patogenezei multor imunodeficiențe (de exemplu, SIDA).

Limfocitele T care recunosc Ag„recunoaște” un epitop străin de Ag viral sau tumoral în complex cu molecula MHC de pe membrana plasmatică a celulei țintă. T HRT [T-efectori ai reacțiilor de hipersensibilitate de tip întârziat (DTH)] mediază reacțiile DTH.