Cuantificare. Determinarea calitativă a vitaminelor în preparate medicinale Principiul determinării calitative a vitaminei C

GOST R 54635-2011

Grupa H59

STANDARDUL NAȚIONAL AL ​​FEDERATIEI RUSE

PRODUSE ALIMENTARE FUNCȚIONALE

Metoda de determinare a vitaminei A

produse alimentare functionale. Metoda de determinare a vitaminei A

OK 67.050
OKSTU 9109

Data introducerii 2013-01-01

cuvânt înainte

Obiectivele și principiile standardizării în Federația Rusă stabilit prin Legea federală N 184-FZ „Cu privire la reglementarea tehnică” din 27 decembrie 2002 și regulile de aplicare a standardelor naționale ale Federației Ruse - GOST R 1.0-2004 „Standardizarea în Federația Rusă. Dispoziții de bază”

Despre standard

1 DEZVOLTAT de Instituția Academiei Ruse Stiinte Medicale Institutul de Cercetare în Nutriție

2 INTRODUS de Comitetul Tehnic de Standardizare TC 36 „Alimente funcționale”

3 APROBAT ȘI DAT ÎN VIGOARE prin Ordinul Agenției Federale pentru Reglementare Tehnică și Metrologie din 12 decembrie 2011 N 784-st

4 INTRODUS PENTRU PRIMA Oara


Informațiile despre modificările aduse acestui standard sunt publicate în indexul de informații publicat anual „Standarde naționale”, iar textul modificărilor și amendamentelor - în indicii de informații publicate lunar „Standarde naționale”. În cazul revizuirii (înlocuirii) sau anulării acestui standard, un anunț corespunzător va fi publicat în indexul de informații publicat lunar „Standarde naționale”. Sunt de asemenea plasate informații relevante, notificări și texte Sistem informatic utilizare generală - pe site-ul oficial al Agenției Federale pentru Reglementare Tehnică și Metrologie pe Internet

1 domeniu de utilizare

1 domeniu de utilizare

Acest standard se aplică alimentelor funcționale și stabilește o metodă pentru determinarea fracției de masă a vitaminei A sub formă de retinol, acetat de retinol, palmitat de retinol folosind cromatografia lichidă de înaltă performanță (denumită în continuare HPLC).

Domeniul de măsurare al fracției de masă a vitaminei A este de la 0,5 la 10,0 ppm.

NOTĂ Acest standard poate fi aplicat produselor alimentare care fac obiectul domeniului de măsurare.

2 Referințe normative

Acest standard folosește referințe normative la următoarele standarde:

GOST R 8.563-2009 Sistem de stat pentru asigurarea uniformității măsurătorilor. Tehnici (metode) de măsurători

GOST R 12.1.019-2009 Sistem de standarde de securitate a muncii. Siguranta electrica. Cerințe generale și nomenclatura tipurilor de protecție

GOST R ISO 5725-6-2002 Acuratețea (corectitudinea și precizia) metodelor și rezultatelor de măsurare. Partea 6. Utilizarea valorilor de precizie în practică

GOST R ISO/IEC 17025-2006 * Cerințe generale pentru competența laboratoarelor de testare și calibrare
________________
GOST ISO/IEC 17025-2009

GOST R 51652-2000 Alcool etilic rectificat din materii prime alimentare. Specificații

GOST R 52062-2003 Uleiuri vegetale. Reguli de acceptare și metode de eșantionare

GOST R 52179-2003 Margarine, grăsimi pentru gătit, cofetărie, panificație și produse lactate. Reguli de acceptare și metode de control

GOST R 52349-2005 Produse alimentare. Produse alimentare funcționale. Termeni și definiții

GOST R 53228-2008 Scale de acțiune neautomată. Partea 1. Cerințe metrologice și tehnice. Teste

GOST 12.1.004-91 Sistem de standarde de securitate a muncii. Siguranța privind incendiile. Cerințe generale

GOST 12.1.005-88 Sistemul standardelor de securitate a muncii. Cerințe generale sanitare și igienice pentru aerul din zona de lucru

GOST 12.1.007-76 Sistem de standarde de securitate a muncii. Substanțe dăunătoare. Clasificare și Cerințe generale Securitate

GOST 427-75 Rigle metalice de măsurare. Specificații

GOST 1770-74 (ISO 1042-83, ISO 4788-80) Sticla de laborator de măsurare. Cilindri, pahare, baloane, eprubete. Specificații generale

Reactivi GOST 4166-76. Sulfat de sodiu. Specificații

GOST 4517-87 Reactivi. Metode de preparare a reactivilor auxiliari și a soluțiilor utilizate în analiză

GOST 6709-72 Apă distilată. Specificații

GOST 9293-74 Azot gazos și lichid. Specificații

GOST 12026-76 Hârtie de filtru de laborator. Specificații

GOST 13496.0-80 * Furaje compuse, materii prime. Metode de eșantionare
________________
* Documentul nu este valabil pe teritoriul Federației Ruse. GOST R ISO 6497-2011 este valabil, în continuare în text. - Nota producătorului bazei de date.

GOST 14919-83 Sobe electrice de uz casnic, sobe electrice și cuptoare. Specificații generale

GOST 16317-87 Aparate frigorifice electrice de uz casnic. Specificații generale

GOST 18300-87 Alcool etilic tehnic rectificat. Specificații

GOST 19627-74 Hidrochinonă (paradioxibenzen). Specificații

GOST 24363-80 Reactivi. hidroxid de potasiu. Specificații

GOST 25336-82 Sticla și echipamente de laborator. Tipuri, parametri de bază și dimensiuni

GOST 26809-86 Lapte și produse lactate. Reguli de acceptare, metode de prelevare și pregătire a probelor de canalizare

GOST 27025-86 Reactivi. Orientări generale pentru testare

GOST 28498-90 Termometre din sticlă lichidă. Cerințe tehnice generale. Metode de testare

GOST 29227-91 (ISO 835-1-81) Sticla de laborator. Pipete absolvite. Partea 1. Cerințe generale

Notă - Când utilizați acest standard, este recomandabil să verificați valabilitatea standardelor de referință în sistemul de informare publică - pe site-ul oficial al Agenției Federale pentru Reglementare Tehnică și Metrologie pe Internet sau conform indexului de informații publicat anual „Standarde naționale „, care a fost publicată la data de 1 ianuarie a anului în curs și conform indicatoarelor informative lunare corespunzătoare publicate în anul curent. Dacă standardul de referință este înlocuit (modificat), atunci când utilizați acest standard, trebuie să vă ghidați după standardul de înlocuire (modificat). Dacă standardul la care se face referire este anulat fără înlocuire, prevederea în care se face referire la acesta se aplică în măsura în care această referință nu este afectată.

3 Termeni și definiții

Acest standard folosește termenii conform GOST R 52349, precum și următorul termen cu definiția corespunzătoare:

4 Esența metodei

Determinarea vitaminei A din extractul obținut din proba analizată se realizează prin separare HPLC urmată de detecție fotometrică sau fluorimetrică. Dacă este necesar, extractul se obține după hidroliza alcalină a probei analizate.

Analiza cantitativă este efectuată prin metoda unui standard extern folosind aria sau înălțimea vârfurilor de retinol, acetat de retinol, palmitat de retinol.

5 Cerințe de siguranță

5.1 Condiții conduită în siguranță lucrări

La efectuarea testelor, este necesar să se respecte cerințele de siguranță la incendiu stabilite de GOST 12.1.004, siguranță electrică - GOST R 12.1.019, măsuri de siguranță atunci când se lucrează cu reactivi - GOST 12.1.007, precum și cerințele prevăzute în documentația tehnică pentru spectrofotometru, cromatograf și alte dispozitive și echipamente.

Camera în care se efectuează testele trebuie să fie echipată cu ventilație de alimentare și evacuare. Controlul asupra conținutului de substanțe nocive din aerul zonei de lucru trebuie efectuat în conformitate cu cerințele GOST 12.1.005.

Când lucrați cu butelii de gaz, trebuie să fiți ghidat.

5.2 Cerințe de calificare a operatorului

Persoanele cu studii superioare sau medii de specialitate în profesii au voie să efectueze teste și să prelucreze rezultatele: chimist, inginer chimist, tehnician, asistent de laborator, cu experiență într-un laborator chimic. Prima utilizare a metodei în laborator trebuie făcută sub supravegherea unui tehnician HPLC calificat.

6 Condiții de testare

6.1 Condiții generale

Testele se efectuează în condiții normale de laborator: temperatură mediu inconjurator- (25±5) °С; umiditate relativă- (65±15)%; Frecvența AC - (50±5) Hz; tensiunea rețelei - (220±10) V.

La pregătirea și depozitarea soluțiilor, trebuie respectate cerințele GOST 27025, GOST 4517.

Pentru a preveni distrugerea vitaminei A, analiza materialului de testat și a standardelor se efectuează în prezența unui antioxidant (acid ascorbic, hidrochinonă, pirogalol), protejând probele de lumina directă a soarelui.

6.2 Condiții pentru măsurători fotometrice

Condițiile pentru măsurători fotometrice sunt date în tabelul 1.


Tabelul 1 - Condiții pentru măsurători fotometrice

6.3 Condiții pentru analiza cromatografică

Temperatura coloanei cromatografice: 25 °C sau temperatura ambiantă.

Debitul fazei mobile: 0,7 cm/min (valoare ghid).

Volumul probei injectate: 50 10 cm.

Faza mobilă: un amestec de acetonitril, alcool metilic, clorură de metilen într-un raport de volum de 50:45:5.

Verificarea condițiilor optime de separare cromatografică se realizează prin analiza cromatografică a unei soluții mixte de retinol, acetat de retinol, palmitat de retinol cu ​​o concentrație de masă a fiecărei substanțe de cel puțin 0,4 μg/cm. Această soluție mixtă se prepară din soluții stoc de retinol, acetat de retinol, palmitat de retinol prin analogie cu procedura de preparare a soluțiilor de lucru conform 8.1.2. Eficiența separării cromatografice este considerată satisfăcătoare dacă factorul de separare al vârfurilor adiacente de retinol, acetat de retinol, palmitat de retinol este de cel puțin 1,3. În caz contrar, pentru a obține eficiența de separare necesară, se selectează experimental debitul fazei mobile sau se testează alte coloane.

7 Instrumente de măsurare, dispozitive auxiliare, reactivi și materiale

7.1 Pentru a determina conținutul fracției de masă a vitaminei A, se folosesc următoarele instrumente de măsurare, echipamente auxiliare și materiale:

- cântar în conformitate cu GOST R 53228, oferind precizie de cântărire cu limitele erorii absolute admisibile de ± 0,1 mg;

- un spectrofotometru cu un interval spectral de la 190 la 1100 nm, eroarea principală în măsurătorile de transmisie nu este mai mare de 1%;

- cuve de cuarț cu lungimea traseului optic de 1 cm;

- cromatograf lichid de inalta performanta, cuprinzand urmatoarele elemente: pompa; dispozitiv de prelevare de probe; detector fluorimetric (lungimi de undă, nm: excitație - 325 nm, emisie - 470 nm) sau detector spectrofotometric (lungime de undă de detecție - 325 nm) cu un nivel de zgomot de cel mult 10 unități de densitate optică și o eroare relativă de măsurare de cel mult 10 %; o coloană analitică pentru HPLC cu un diametru de 0,30-0,46 cm, o lungime de 10-25 cm, umplută cu octadecil silicagel cu o dimensiune a particulei de 5 μm; un dispozitiv de înregistrare - un integrator sau un înregistrator care permite măsurarea ariei (sau înălțimii) unui vârf cu o eroare de cel mult 1%; software pentru procesarea rezultatelor măsurătorilor obținute;

- filtre pentru filtrarea fazei mobile și a soluțiilor analizate (de exemplu, cu dimensiunea porilor de 0,45 μm);

- microseringă tip „Hamilton” cu o capacitate de 0,1 cm3 pentru introducerea probelor într-un cromatograf lichid;

- pipete gradate 1(2.3)-1(2)-1-0.5(1.2.5.10.25) conform GOST 29227 sau distribuitoare automate cu volume de doză similare sau variabile cu o eroare relativă de dozare de cel mult ± 1%;

- cilindri 1-50(100.250)-1(2) conform GOST 1770;

- baloane cotate 2-50(100,250,500,1000)-2 conform GOST 1770;

- tuburi de măsurare cu dopuri de pământ P-2-5(10.15.20.25)-0.1(0.2)XC conform GOST 1770;

- ochelari В(Н)-1-50(100,150,250)ТХС în conformitate cu GOST 25336;

- baloane cu fund rotund K-1-100(250.500)-29/32TS conform GOST 25336;

- pâlnii V-36(56)-80XC, V-75-110(140)XC, V-100-150XC conform GOST 25336;

- o riglă metalică cu un preț de diviziune de 1 mm în conformitate cu GOST 427;

- un agitator pentru baloane si eprubete cu o gama de frecvente a vibratiilor platformei de 100-150 vibratii pe minut;

- centrifuga, asigurand 4-6 mii rpm;

- o baie de apă cu un regulator de încălzire, menținând temperatura de la 40 ° la 100 ° C;

- o baie de laborator cu ultrasunete cu un volum de lucru de minim 2 dmc;

- evaporator rotativ cu interval de presiune de lucru de la 7 mm Hg. până la 760 mm Hg (de la 9 10 Pa la 10 10 Pa) sau pompă cu jet de apă conform GOST 25336;

- frigidere de laborator din sticlă în conformitate cu GOST 25336;

- termometru lichid de laborator cu un interval de temperatură de la 0 °C la 100 °C, cu o diviziune a scalei de 1 °C conform GOST 28498;

- un cilindru cu azot gazos în conformitate cu GOST 9293, grad de puritate special și în conformitate cu;

- hârtie de filtru de laborator conform GOST 12026;

- aragaz electric tip inchis conform GOST 14919;

- moara electrica de laborator;

- frigider de uz casnic conform GOST 16317.

7.2 La efectuarea măsurătorilor, se folosesc următorii reactivi și materiale:

- alcool etilic absolut () cu o fracție de masă a substanței principale de cel puțin 99,9%;

- alcool etilic rectificat () cu o fracție de masă a substanței principale de cel puțin 96% sau conform GOST R 51652, GOST 18300;

- alcool metilic () cu o fracție de masă a substanței principale de cel puțin 99,9%;

- acetonitril () fracția de masă a substanței principale nu este mai mică de 99,8%;

- clorură de metilen () fracția de masă a substanței principale nu este mai mică de 99,8%;

- fracția de masă n-hexan () a substanței principale nu este mai mică de 99%;

- etilacetan () fracția de masă a substanței principale nu este mai mică de 99% sau conform GOST 8981;

- fracția de masă propanol-2 () a substanței principale nu este mai mică de 99%;

- eter de petrol, distilat la temperatura de (50 ± 10) °C, purificat din peroxizi;

- dietil eter, purificat din peroxizi, care contine 0,1% pirogalol, conform;

- hidroxid de potasiu (KOH) conform GOST 24363, chimic pur sau grad analitic, soluție de KOH, fracție de masă 50%;

- sulfat de sodiu () fracțiunea de masă anhidră a substanței principale nu este mai mică de 99,5% sau conform GOST 4166, pur chimic;

- apă distilată conform GOST 6709;

- acid ascorbic () conform sau, chimic pur;

- hidrochinonă () cu o fracțiune de masă a substanței principale de cel puțin 99% sau conform GOST 19627;

- pirogalol () fracția de masă a substanței principale nu este mai mică de 99%;

- butilhidroxitoluen () fracția de masă a substanței principale nu este mai mică de 99%;

- retinol ()=286,5 g/mol, fracția de masă a substanței principale nu este mai mică de 90%;

- acetat de retinol () = 328,5 g/mol, fracția de masă a substanței principale nu este mai mică de 90% sau ;

- palmitat de retinol () = 524,9 g/mol, fracția de masă a substanței principale nu este mai mică de 90% sau .

7.3 Este permisă utilizarea altor instrumente de măsură, echipamente auxiliare care nu sunt inferioare celor de mai sus din punct de vedere metrologic și specificatii tehniceși oferind precizia necesară de măsurare, precum și reactivi și materiale de o calitate nu mai proastă decât cea de mai sus.

8 Pregătirea pentru a efectua măsurători

8.1 Prepararea soluțiilor

8.1.1 Soluții standard de bază

Se dizolvă aproximativ 50 mg de retinol (sau acetat de retinol sau palmitat de retinol) în 50 ml de alcool etilic absolut. Concentrația de masă de retinol (sau acetat de retinol sau palmitat de retinol) în soluție este de aproximativ 1,0 mg/cm2. Apoi, 2 ml dintr-o soluție de retinol (sau acetat de retinol, sau palmitat de retinol) se pun cu o pipetă într-un balon cotat de 50 ml și se aduce la semn cu alcool etilic absolut. Concentrația de masă a compușilor din soluțiile standard bazice obținute este de aproximativ 40 pg/cm.

8.1.2 Soluții de calibrare

Din principalele soluții standard, se prepară cel puțin patru soluții de calibrare de retinol (sau acetat de retinol sau palmitat de retinol) în intervalul de concentrație în masă de 0,4-4,0 µg/cm prin diluarea exactă a soluțiilor standard principale cu alcool etilic absolut într-un balon cotat cu o capacitate de 50 cm3.

Determinarea concentrației masice de retinol (sau acetat de retinol sau palmitat de retinol) (µg/cm) se efectuează după măsurarea densității optice a soluțiilor de calibrare într-o cuvă de cuarț cu o grosime a stratului absorbant de 1 cm pe un spectrofotometru la lungime de undă optimă și se calculează prin formula

unde este valoarea densității optice a soluției de calibrare;

- valoarea densității optice a soluției de calibrare în etanol absolut sau concentrația masică de 2-propanol de 1 g la 100 cm cu grosimea stratului absorbant de 1 cm, dată în tabelul 1;

10 - factor de conversie;

- coeficient care ține cont de absorbția componentelor aferente la măsurare, calculat prin formula

unde este aria de vârf a substanței standard în timpul analizei HPLC, mAU·s (AU·s);

- suma ariilor vârfurilor componentelor însoțitoare în timpul analizei HPLC a substanței standard, mAU·s (AU·s).

Toate soluțiile sunt protejate cu grijă de radiațiile ultraviolete în timpul preparării și analizei. Soluțiile de retinol se păstrează la temperaturi sub 4 °C timp de 2 luni. Soluțiile proaspăt preparate de acetat de retinol sau palmitat de retinol sunt folosite pentru măsurători timp de 2-3 ore la temperatura camerei.

8.2 Eșantionarea și pregătirea

8.2.1 Eșantionarea se efectuează în conformitate cu GOST 13496.0, GOST 26809, GOST R 52062, GOST R 52179.

8.2.2 Particulele grosiere dintr-o probă medie izolată prin sferturi dintr-o probă de laborator sunt zdrobite folosind un echipament adecvat (de exemplu, o moară de laborator) în așa stare încât tot produsul să treacă printr-o sită cu găuri cu diametrul de 1 mm. Proba măcinată este bine amestecată.

Probele analizate sunt omogenizate, evitându-se expunerea la temperaturi ridicate.

8.2.3 Alimente pe bază de grăsimi cu un conținut de apă de 1% sau mai puțin, îmbogățite cu acetat de retinol sau palmitat de retinol

2-5 g din proba analizată se transferă într-un balon cotat cu o capacitate de 25 ml, dizolvat în 10-15 ml de n-hexan, folosind o baie cu ultrasunete pentru a accelera dizolvarea. Soluția a fost adusă până la semn cu n-hexan. Dacă este necesar, soluția poate fi utilizată pentru diluarea ulterioară cu n-hexan. Apoi o parte alicotă din soluţia de hexan a fost evaporată într-un curent de azot, iar reziduul uscat a fost redizolvat în eluent.

8.2.4 Produse alimentare pe bază de ulei și grăsimi, cu maximum 20% apă, în masă, îmbogățite cu acetat de retinol sau palmitat de retinol

2-5 g din proba analizată se dizolvă cu agitare puternică în 10-15 ml de n-hexan, folosind o baie cu ultrasunete pentru a accelera dizolvarea. Îndepărtați excesul de apă prin adăugarea de sulfat de sodiu anhidru. Conținutul balonului este filtrat printr-un filtru de hârtie pentru a separa precipitatul insolubil. Balonul se spală de două ori cu 5 ml de n-hexan. Filtratele se colectează într-un balon cotat de 25 ml Soluția se aduce până la semn cu n-hexan. Apoi o parte alicotă din soluţia de hexan a fost evaporată într-un curent de azot, iar reziduul uscat a fost redizolvat în eluent.

8.2.5 Alte alimente îmbogățite cu acetat de retinol sau palmitat de retinol

Pentru efectuarea hidrolizei alcaline, 1-30 g din proba analizată de material uscat sau lichid se pun într-un balon cu fund rotund cu o capacitate de 100-500 ml în decurs de 5 min. Se adaugă apoi 50-150 cm 3 de alcool etilic rectificat (sau alcool metilic), 0,2-1,0 g de antioxidant (acid ascorbic, hidrochinonă, butilhidroxitoluen), 4-40 cm 3 de soluție de hidroxid de potasiu 50% și se încălzește timp de 15- 45 min într-o baie de apă sub reflux la o temperatură de 80 °C-100 °C.

Raporturile recomandate de material de testat și reactivi sunt prezentate în Tabelul 2.


Tabelul 2 - Raporturi recomandate de material de testat și reactivi

Când hidroliza alcalină este efectuată la temperatura camerei timp de cel puțin 16 ore, se folosesc rapoartele de mai sus de material și reactivi.

Dacă, după răcire, pe suprafața amestecului rămâne un strat de ulei sau grăsime, atunci se mărește volumul soluției de KOH adăugată și timpul de hidroliză alcalină.

După ce hidroliza este completă, conținutul balonului este răcit rapid la (20 ± 5) °C și transferat cantitativ într-o pâlnie de separare. Balonul se clătește cu apă, al cărei volum este egal cu volumul de alcool etilic (sau metil) adăugat, iar apa se toarnă în aceeași pâlnie. Vitamina A este extrasă cu eter dietil (sau de petrol), n-hexan, n-hexan cu adăugarea de eter dietil (sau de petrol) într-un raport de volum 1:1 timp de două minute. Pentru a ține seama de posibila extracție incompletă a vitaminei A, ar trebui utilizată metoda standard de adăugare.

Extracția se repetă de trei sau patru ori cu porțiuni de extractant de 50-100 cm.

Pentru a elimina apa, extractul este filtrat printr-un filtru cu 2-5 g sulfat de sodiu anhidru. Apoi, extractul este evaporat la sec folosind un evaporator rotativ la o temperatură care nu depășește 50 °C și apoi redizolvat în eluant. Dacă este necesar, soluția poate fi utilizată pentru diluarea ulterioară.

Soluția obținută conform 8.2.3 (8.2.4, 8.2.5) este analizată prin HPLC. Masa probei analizate și volumul solventului sunt selectate astfel încât concentrația analiților din soluția analizată să fie în intervalul de la 0,4 la 4,0 μg/cm.

8.3 Pregătirea cromatografului de lichid

Pregătirea cromatografului de lichid pentru funcționare se realizează în conformitate cu manualul de instrucțiuni al echipamentului. Înainte de începerea lucrului, coloana se spală cu eluent.

8.4 Construirea unei curbe de calibrare

Procedurile de construire a dependenței de calibrare sunt efectuate în conformitate cu manualul de utilizare a echipamentului. Se efectuează o analiză cromatografică a tuturor soluțiilor de calibrare preparate conform 8.1.2.

Graficul de calibrare este construit în coordonatele „semnal analitic” - „concentrația de masă a vitaminei în soluția de calibrare, µg/cm”. Pentru fiecare soluție de calibrare analizată se efectuează două măsurători paralele și se găsește valoarea medie aritmetică. Diferența dintre valorile măsurate ale semnalelor analitice și valorile timpului de retenție nu trebuie să depășească 5% din valorile medii. Segmentele liniare ale curbei de calibrare trebuie să corespundă întregului interval de concentrații de masă determinate de vitamina A.

Coeficientul curbei de calibrare, μg/cm/(mAU s) sau μg/cm/(AU s) este determinat ca medie aritmetică a coeficienților calculați prin formula

unde este concentrația de masă a substanțelor standard în soluția de etalonare a treia, µg/cm;

- aria (înălțimea) semnalului analitic în analiza soluției de calibrare, mAU s (AU s) sau înălțimea vârfului, mm.

Corectitudinea construcției dependenței de calibrare este controlată de valoarea unei aproximări fiabile de 0,997.

Calibrarea se efectuează în următoarele cazuri: în stadiul de însuşire a metodei, când se modifică condiţiile analizei cromatografice, sau când rezultatele controlului operaţional sau auditului intern nu îndeplinesc cerinţele metrologice.

9 Efectuarea măsurătorilor

Volume egale de soluții de testare și de calibrare sunt injectate succesiv în coloana cromatografului. Ca soluție de calibrare, este selectată o soluție a cărei înălțime de vârf este cel mai puțin diferită de înălțimea de vârf a soluției testate. Concentrația vitaminei A () din soluția utilizată pentru calibrare este specificată în ziua utilizării acesteia conform 8.1.2.

Pentru a identifica vârfurile, comparați timpul de retenție al retinolului (sau acetatului de retinol sau palmitatului de retinol) al soluției de testat și al soluției standard și, de asemenea, adăugați o soluție standard cu un conținut similar de vitamina A la soluția de testare.

10 Prelucrarea și prezentarea rezultatelor

Fracția de masă a vitaminei A, milion, este calculată prin formulele:

unde este coeficientul curbei de calibrare conform punctului 8.4;


- volum de diluție, cm;

- masa probei analizate, g.

Folosind o soluție de calibrare

unde este concentrația de masă a soluției de calibrare, µg/cm;

- volum de diluție, cm;

- media aritmetică a rezultatelor măsurării ariei (înălțimii) vârfului componentei analizate pentru două analize cromatografice paralele ale soluției de testat, mAU·s (AU·s) sau înălțimea vârfului, mm;

- masa probei analizate, g;

- media aritmetică a rezultatelor măsurării ariei (înălțimii) vârfului componentei analizate pentru două analize cromatografice paralele ale soluției de calibrare, mAU·s (AU·s) sau înălțimea vârfului, mm.

Rezultatul este calculat la a treia zecimală și rotunjit la a doua zecimală.

La analiza fiecărei probe se efectuează două determinări paralele, începând cu prelevarea unei probe din proba de testat.

Discrepanța dintre rezultatele a două măsurători repetate, (ca procent din valoarea medie), efectuate de un operator folosind reactivi și echipamente identice și în cel mai scurt timp posibil, nu trebuie să depășească (limita de repetabilitate este dată în tabelul 3) cu un nivel de încredere de 95%.

Dacă această condiție este îndeplinită, valoarea medie aritmetică este luată ca rezultat final al testului.

Limitele erorii relative în determinarea fracției de masă a vitaminei A (), ca procent din rezultatul testului, și cu un nivel de încredere de 95%, nu trebuie să depășească valorile specificate în tabelul 3.

Rezultatul determinării vitaminei A este prezentat sub următoarea formă:

Milioane la 95%, (6)

unde este media aritmetică a rezultatelor a două determinări paralele, milioane;

- valoarea limitei erorii absolute a definițiilor, milioane, calculată prin formula

Rezultatele testului sunt înregistrate în protocol, care indică:

- o referire la acest standard;

- tipul, originea și denumirea probei;

- metoda și data prelevării probei;

- data primirii si testarii probei;

- rezultatele cercetării;

- motivele abaterilor în procedura de determinare de la condiţiile stabilite.

Bohan Ivan

Oamenii știau din cele mai vechi timpuri că absența anumitor alimente în alimentație poate provoca boli.

Lipsa vitaminelor din alimente poate duce la tulburări severe în organism. Cea mai comună vitamina este vitamina C. Din cele mai vechi timpuri, oamenii au suferit de numeroase boli grave, ale căror cauze nu erau cunoscute. Una dintre aceste boli este scorbutul, care afectează de obicei oamenii din nordul îndepărtat. Se știe că aproximativ 60% dintre marinari au murit din cauza scorbutului în expediția lui Vasco da Gama, aceeași soartă a avut-o și navigatorul rus V. Bering și mulți membri ai echipajului său în 1741, exploratorul polar rus G.Ya. Sedov în 1914 și alții.În timpul existenței flotei de navigație, au murit mai mulți marinari de scorbut decât în ​​toate bătăliile navale la un loc. Și motivul pentru aceasta a fost lipsa sau hipovitaminoza vitaminei C.

Descarca:

Previzualizare:

Instituție de învățământ bugetar municipal

"In medie şcoală cuprinzătoare nr. 25"

Secția de istorie naturală

Determinarea conținutului de vitamina C în alimente

Completat de: Bohan Ivan

student 7B

Șef: Bokhan Vera Vasilievna, profesor de chimie

Abakan 2015

Introducere …………………………………………………………………………………….3

I. Partea teoretică………………………………………………………………………4

1. Istoria descoperirii și studiului vitaminei C………………………………………4
2. Valoarea biologică a vitaminei C………………………………………………..5
3. Necesarul zilnic de vitamina C…………………………………...5
4. Deficiență de vitamine - deficiență de vitamine………………………………………..6
5. Semne de hipervitaminoză…………………………………………………………….6
6. Prevenirea deficitului de vitamine………………………………………………....7
7. Surse de vitamina C………………………………………………………...8

II. Partea practică. cuantificarea conţinut

Vitamina C în alimente prin metoda iodometrică…………… 9

1. Prepararea soluțiilor de lucru pentru determinarea vitaminei C….….9

1. Soluții de testare pentru precizie………………………………………………………………10

1. Determinarea acidului ascorbic în produse……………..………10

1. Prelucrarea rezultatelor obținute ……………………..…………….10

Concluzie………………………………………………………………………………….11

Literatură………………………………………………………………………………….12

Aplicație………………………………………………………………………………13

Introducere

Oamenii știau din cele mai vechi timpuri că absența anumitor alimente în dietă poate provoca boli.

Lipsa vitaminelor din alimente poate duce la tulburări severe în organism. Cea mai comună vitamina este vitamina C. Din cele mai vechi timpuri, oamenii au suferit de numeroase boli grave, ale căror cauze nu erau cunoscute. Una dintre aceste boli este scorbutul, care afectează de obicei oamenii din nordul îndepărtat. Se știe că aproximativ 60% dintre marinari au murit din cauza scorbutului în expediția lui Vasco da Gama, aceeași soartă a avut-o și navigatorul rus V. Bering și mulți membri ai echipajului său în 1741, exploratorul polar rus G.Ya. Sedov în 1914 și alții.În timpul existenței flotei de navigație, au murit mai mulți marinari de scorbut decât în ​​toate bătăliile navale la un loc. Și motivul pentru aceasta a fost lipsa sau hipovitaminoza vitaminei C.

În prezent, de la an la an, ne este frică de infecțiile respiratorii acute sezoniere. Unul dintre agenții profilactici este vitamina C. „Potrivit cercetătorilor autohtoni, lipsa acidului ascorbic la școlari reduce capacitatea leucocitelor de a distruge microbii patogeni care au intrat în organism de 2 ori, ca urmare a frecvenței respiratorii acute. bolile crește cu 26–40% și invers, luarea de vitamine reduce semnificativ frecvența infecțiilor respiratorii acute ”Am văzut că acest subiect este încă relevant astăzi. Acest lucru mi-a dat ideea să investighez această substanță foarte importantă pentru omenire.

scop Această lucrare este de a studia sursele de vitamina C și importanța pentru organismul uman.

Pentru a atinge acest obiectiv, este necesar să rezolvăm următoarele sarcini:

1. Analizați literatura de specialitate pe această temă
2. Pentru a studia sursele de vitamine și funcțiile acestora în organism
3. Investigați conținutul de vitamina C în unele Produse alimentare

Obiect de studiu: alimente.

Subiect de studiu:procese pentru detectarea vitaminei C în alimente.

Metode de cercetare:analiza literaturii, experiment, observare.

Ipoteză: conținutul de vitamina C poate fi determinat acasă.

I. Partea teoretică

1. Istoria descoperirii și studiului vitaminei C

Vitamina C sau acidul ascorbic este un cristal alb, solubil în apă și are gust de suc de lămâie.

Istoria descoperirii vitaminei C este asociată cu scorbutul. În acele vremuri îndepărtate, această boală i-a afectat în special pe marinari. Marinarii puternici și curajoși erau neputincioși în fața scorbutului, ceea ce, în plus, ducea adesea la rezultat letal. Boala s-a manifestat slăbiciune generală, sângerări ale gingiilor, în urma cărora au căzut dinții, a apărut o erupție cutanată, hemoragii pe piele. S-a găsit însă un leac. Așadar, marinarii, după exemplul indienilor, au început să bea un extract apos de ace de pin, care este un depozit de vitamina C. În secolul al XVIII-lea, chirurgul flotei britanice J. Lind a arătat că boala marinarilor ar putea să fie vindecați adăugând legume și fructe proaspete în dieta lor. Un alt fapt interesant este că Albert von Szent-György, descoperitorul vitaminei C, a descoperit de fapt un întreg complex de vitamine.

Un merit uriaș în studiul proprietăților sale îi aparține lui Linus Pauling. Linus Carl Pauling este unul dintre puținii oameni de știință care de două ori în viață a primit cel mai înalt premiu mondial pentru serviciile aduse umanității - Premiul Nobel. Linus Pauling este unul dintre fondatorii chimiei moderne și ai biologiei moleculare.

De remarcat că este singura persoană care a primit premii atât de mari de unul singur, fără să le împărtășească nimănui. Omul de știință a început cercetările la mijlocul anilor '60. Prima sa lucrare s-a numit Vitamina C și răceala. Dar ce val de indignare și respingere din partea comunității farmaceutice și medicale a trebuit să reziste omului de știință, care a susținut că vitamina C ar trebui luată în doze de 200 de ori mai mari decât cele general acceptate! Între timp, Pauling, bazat, ca întotdeauna, pe date științifice stricte, i-a îndemnat pe oponenți să apeleze la lucrările lui Irving Stone, care a demonstrat că ficatul majorității mamiferelor, cu excepția oamenilor și a maimuțelor, sintetizează vitamina C într-o cantitate proporțională cu greutatea corporală a animalului. După ce a făcut o proporție pentru o persoană, Pauling a ajuns la cifra menționată - doza de vitamina C, necesar pentru om pentru a crește rezistența organismului, ar trebui să fie de 200 de ori mai mare decât cantitatea care vine cu mâncarea obișnuită.

Pauling și-a continuat cercetările, studiind efectul vitaminei C asupra dezvoltării boli oncologice. O adevărată explozie în medicina americană a fost provocată de cartea sa „Cancer și vitamina C”, care demonstrează posibilitățile fantastice ale acidului ascorbic. În acest moment, Linus Pauling a fost supranumit Omul Vitaminei C. Dar, în ciuda ridicolului presei, a rezistenței medicilor și farmaciștilor, omul de știință a continuat să lucreze. Timpul i-a confirmat convingerile.

2. Valoarea biologică a vitaminei C

Vitamina C este un antioxidant puternic. Joacă un rol important în reglarea proceselor redox, participă la sinteza de colagen și procolagen, metabolism acid folic s și fier, precum și sinteza hormonilor steroizi și catecolaminelor. De asemenea, acidul ascorbic reglează coagularea sângelui, normalizează permeabilitatea capilară, este necesar pentru hematopoieză și are efecte antiinflamatorii și antialergice.

Vitamina C este un factor de apărare a organismului împotriva efectelor stresului. Întărește procesele, crește rezistența la infecții. Reduce efectele expunerii la diverși alergeni. Există multe medii teoretice și experimentale pentru utilizarea vitaminei C în prevenirea cancerului. Se știe că la pacienții oncologici, din cauza epuizării rezervelor sale în țesuturi, se dezvoltă adesea simptome de deficit de vitamine, ceea ce necesită administrarea lor suplimentară.

Există date care arată rolul preventiv al vitaminei C în raport cu cancerul de colon, esofag, Vezicăși endometru (Block G., Epidemiology, 1992, 3(3), 189–191).

Vitamina C îmbunătățește capacitatea organismului de a absorbi calciul și fierul și de a elimina cuprul, plumbul și mercurul toxic.

Este important ca în prezența unor cantități adecvate de vitamina C, stabilitatea vitaminelor B să fie semnificativ crescută. 1, B 2 , A, E, acizi pantotenic și folic. Vitamina C protejează colesterolul cu lipoproteine ​​cu densitate joasă de oxidare și, în consecință, pereții vaselor de sânge de depunerea formelor oxidate de colesterol.

Corpul nostru nu poate stoca vitamina C, așa că trebuie să o obținem în mod constant în plus. Deoarece este solubil în apă și supus acțiunii temperaturii, gătitul cu tratament termic îl distruge.

3. Necesarul zilnic de vitamina C

Necesarul uman zilnic de vitamina C depinde de o serie de motive: vârsta, sexul, munca prestată, sarcina sau alăptarea, condițiile climatice, obiceiurile proaste.

Boala, stresul, febra și expunerea la efecte toxice (cum ar fi fumul de țigară) cresc nevoia de vitamina C.

Într-un climat cald și în nordul îndepărtat, necesarul de vitamina C crește cu 30-50 la sută. Corpul tânăr absoarbe vitamina C mai bine decât vârstnicii, astfel încât nevoia de vitamina C este ușor crescută la vârstnici.

Rata medie ponderată a nevoilor fiziologice este de 60-100 mg pe zi. Doza terapeutică uzuală este de 500-1500 mg zilnic.[]

Pentru copii:

0-6 luni - 30 mg

6 luni până la un an - 35 mg

1-3 ani - 40 mg

4-6 ani - 45 mg

7-10 ani - 45 mg

11-14 ani - 50 mg

Pentru bărbați și femei de la 15 ani până la 50 de ani, necesarul zilnic este de aproximativ 70 mg.

4. Deficit de vitamine – beriberi

Lipsa aprovizionării cu vitamine a organismului duce la slăbirea acestuia, o lipsă accentuată de vitamine - la distrugerea metabolismului și a bolilor - beriberi, care se poate termina cu moartea organismului. Avitaminoza poate apărea nu numai din aportul insuficient de vitamine, ci și din încălcarea proceselor de asimilare și utilizare a acestora în organism.

Potrivit șefului laboratorului de vitamine și minerale al Institutului de Nutriție al Academiei Ruse de Științe Medicale, prof. V.B. Spiricheva, rezultatele sondajelor din diferite regiuni ale Rusiei arată că marea majoritate a copiilor de vârstă preșcolară și școlară nu dispun de vitaminele necesare creșterii și dezvoltării lor normale.

Deosebit de nefavorabilă este situația cu vitamina C, a cărei lipsă a fost dezvăluită la 80-90% dintre copiii examinați.

La examinarea copiilor din spitalele din Moscova, Ekaterinburg, Nijni Novgorod și alte orașe, deficiența de vitamina C se găsește la 60-70%.

Profunzimea acestei deficiențe crește în perioada iarnă-primăvară, totuși, la mulți copii, aprovizionarea insuficientă cu vitamine persistă chiar și în lunile mai favorabile de vară și toamnă.

Dar aportul insuficient de vitamine reduce semnificativ activitatea sistemului imunitar, crește frecvența și severitatea respiratorii și boli gastrointestinale. Deficiența poate fi exogenă (din cauza lipsei de acid ascorbic din alimente) și endogenă (din cauza deteriorării absorbției și absorbției vitaminei C în organismul uman).

Cu un aport insuficient de vitamină pentru o lungă perioadă de timp, se poate dezvolta hipovitaminoză.

5. Semne de hipervitaminoză

Vitamina C este bine tolerată chiar și în doze mari.

Dar:

· Se poate dezvolta diaree dacă doza este prea mare.

· Doze mari poate provoca hemoliză (distrugerea globulelor roșii) la persoanele cărora le lipsește enzima specifică glucozo-6-fosfat dehidrogenază. Prin urmare, persoanele cu această tulburare ar trebui să ia doze mai mari de vitamina C numai sub stricta supraveghere a unui medic.

Dacă acidul ascorbic este administrat în doze mari concomitent cu aspirina, poate apărea iritația stomacului, în urma căreia se va dezvolta un ulcer (acidul ascorbic sub formă de ascorbat de calciu are o reacție neutră și este mai puțin agresiv față de mucoasa). tract gastrointestinal).

· La folosirea vitaminei C cu aspirină, trebuie amintit, de asemenea, că dozele mari de aspirină pot duce la o excreție crescută a vitaminei C prin rinichi și la pierderea acesteia în urină și, deci, după un timp, la deficit de vitamine.

Mestecurile și gumele de mestecat cu vitamina C pot deteriora smalțul dinților, ar trebui să vă clătiți gura sau să vă periați dinții după ce le-ați luat.

6. Prevenirea beriberiului

Comitetul de experți al OMS a introdus conceptul de necondiționat doza zilnica vitamina C, care nu depășește 2,5 mg / kg greutate corporală, și doza zilnică permisă condiționat de vitamina C, care este de 7,5 mg / kg (Shilov P.I., Yakovlev T.N., 1974)

Prevenirea carentei de vitamine consta in producerea de produse alimentare bogate in vitamine, in consumul suficient de legume si fructe, in depozitarea corespunzatoare a produselor alimentare si in prelucrarea tehnologica rationala a acestora la intreprinderi. Industria alimentară, catering si acasa. Cu o lipsă de vitamine - îmbogățirea suplimentară a nutriției cu preparate vitaminice, produse alimentare fortificate de consum în masă.

Vitamina C este prescrisă pentru scorbut, anumite boli ale tractului gastrointestinal, sângerări, alergii, colagenoze, ateroscleroză, boli infecțioase, intoxicații preventive.

Cercetările au arătat că doze mari vitamina C contribuie la prelungirea vieții și la îmbunătățirea stării pacienților cu anumite tipuri de cancer. Există dovezi că dozele foarte mari de acid ascorbic pot interfera cu fertilizarea normală, pot provoca avorturi spontane, pot crește coagularea sângelui și pot avea un efect advers asupra funcției renale și pancreatice. Cu toate acestea, pericolul unei supradoze de acid ascorbic este exagerat. Rezultatele a numeroase studii au făcut posibil să se considere că hipervitaminoza C practic nu se manifestă.

Aportul sistematic de doze mari de vitamina C reduce riscul de cancer de cavitate bucala, esofag, laringe, stomac, san, creier. Dozele mari de vitamina C (aproximativ 1 g pe zi) elimină oarecum efectele extrem de periculoase ale fumului de tutun asupra organismului fumătorului.

Pe lângă preparatele cu vitamine, măcesele sunt folosite pentru a preveni hipovitaminoza. Măceșele diferă în ceea ce privește continut ridicat acid ascorbic (nu mai puțin de 0,2%) și sunt utilizate pe scară largă ca sursă de vitamina C. Se folosesc fructele diferitelor tipuri de măceșe colectate în perioada de coacere și uscate. Acestea conțin, pe lângă vitamina C, vitaminele K, P, zaharuri, organice, inclusiv taninuri, și alte substanțe. Folosit sub formă de infuzii, extracte, siropuri, pastile, dulciuri, drajeuri.

O infuzie de măceșe se prepară astfel: 10 g (1 lingură) de fructe se pun într-un vas emailat, se toarnă în 200 ml (1 pahar) de apă fierbinte, acoperită cu un capac și încălzită într-o baie de apă ( în apă clocotită) timp de 15 minute, apoi răcit la temperatura camerei timp de cel puțin 45 de minute, se filtrează. Materia primă rămasă este stoarsă și volumul infuziei rezultată este ajustat cu apă fiartă la 200 ml. Luați 1/2 cană de 2 ori pe zi după mese. Copiilor li se oferă 1/3 cană pe recepție. Pentru a îmbunătăți gustul, puteți adăuga zahăr sau sirop de fructe la infuzie.

Siropul de măceș se prepară din sucul diferitelor tipuri de măceșe și extract de fructe de pădure (frasin roșu de munte, aronia neagră, viburnum, păducel, merișor etc.) cu adaos de zahăr și acid ascorbic. Conține în 1 ml aproximativ 4 mg acid ascorbic, precum și vitamina P și alte substanțe. Atribuiți copiilor (în scopuri preventive) 1/2 lingurita sau 1 lingura de desert (in functie de varsta) de 2-3 ori pe zi, spalate cu apa.

7. Surse de vitamina C

Plantele sunt sursa principală de vitamine. În corpul uman, acidul ascorbic nu se formează și nu există acumulări ale acestuia. Oamenii și animalele primesc vitamine direct din alimente vegetale și indirect prin produse de origine animală. În produsele de origine animală, vitamina C este puțin reprezentată (ficat, glande suprarenale, rinichi). O cantitate semnificativă de acid ascorbic se găsește în alimente origine vegetală de exemplu citrice, legume cu frunze verzi, pepene galben, broccoli, varza de Bruxelles, conopida si varza, coacaze negre, ardei grasi, capsuni, rosii, mere, caise, piersici, curmale, catina, macese, frasin de munte, cartofi copti. Ierburi bogate în vitamina C: lucernă, mullein, rădăcină de brusture, gerbil, eyebright, semințe de fenicul, schinduf, hamei, coada-calului, varec, mentă, urzică, ovăz, ardei cayenne, boia de ardei, pătrunjel, ace de pin, șoricel, psyllium, frunze de zmeură , trifoi roșu, măceșe, calotă, frunze de violetă, măcriș. Vezi Anexa 1 pentru normele privind conținutul de vitamina C din unele alimente (în mg la 100 g).

Conținutul de vitamina C din alimente este influențat semnificativ de depozitarea produselor și de prelucrarea lor culinară. Vitamina C este distrusă rapid în legumele decojite, chiar și atunci când sunt scufundate în apă. Sărarea și muratul distrug vitamina C. Gătitul tinde să reducă conținutul de acid ascorbic al produsului. Vitamina C este mai bine conservată într-un mediu acid.

Acidul ascorbic poate fi obținut și pe cale sintetică, este produs sub formă de pulbere, drajeuri, tablete de glucoză etc. Acidul ascorbic face parte din diverse preparate multivitamine.

Amintiți-vă că doar puțini oameni, și mai ales copiii, mănâncă suficiente fructe și legume, care sunt principalele surse de hrana vitamina A. Chiar și mai mult este ars în organism sub influența stresului, fumatului și a altor surse de deteriorare a celulelor, cum ar fi fumul și smogul. Medicamentele utilizate în mod obișnuit, cum ar fi aspirina, ne privează corpul de cantitățile de vitamina pe care încă am reușit să le obținem într-o măsură uriașă.

II. Partea practică.Determinarea cantitativă a conținutului de vitamina C din alimente prin metoda iodometrică

Acidul ascorbic are o proprietate pe care toți ceilalți acizi nu o au: o reacție rapidă cu iodul. Prin urmare, obișnuiamdeterminarea cantitativă a conţinutului de vitamina C din produsele alimentare prin metoda iodometrică.

O moleculă de acid ascorbic - C 6H8O6 , reacționează cu o moleculă de iod - I 2 .

1. Prepararea soluțiilor de lucru pentru determinarea vitaminei C

Pentru a determina vitamina C în sucuri și alte produse, este necesar să luați o tinctură de iod de farmacie cu o concentrație de iod de 5%, adică. 5 g în 100 ml. Cu toate acestea, acidul ascorbic din unele sucuri poate fi atât de mic încât este nevoie de doar 1-2 picături de tinctură de iod pentru a titra un anumit volum de suc (de exemplu, 20 ml). În acest caz, eroarea de analiză este foarte mare. Pentru a face rezultatul mai precis, trebuie să luați mult suc sau să diluați tinctura de iod. În ambele cazuri, numărul de picături de iod folosite pentru titrare crește, iar analiza va fi mai precisă.

Pentru analiza sucurilor de fructe, este convenabil să adăugați apă fiartă la 1 ml de tinctură de iod la un volum total de 40 ml, adică diluați tinctura de 40 de ori și 1 ml din aceasta corespunde la 0,88 mg de acid ascorbic.

Pentru a afla cât se va cheltui pentru titrarea tincturii de iod, trebuie mai întâi să determinați volumul unei picături: folosind o seringă, măsurați 1 ml de soluție diluată de iod și calculați câte picături dintr-o pipetă obișnuită sunt conținute în acest volum. . Un capac conține 0,02 ml.

Apoi, pregătiți pasta de amidon: pentru aceasta, fierbeți ½ cană de apă, în timp ce apa se încălzește, amestecați 1/4 linguriță de amidon cu o lingură de apă rece, astfel încât să nu rămână cocoloașe. Se toarnă în apă clocotită și se răcește.

2. Soluții de testare pentru acuratețe.

Înainte de a continua cu analiza produselor, vom testa soluția noastră pentru acuratețe. Pentru a face acest lucru, luați 1 tabletă de vitamina pură, 0,1 g, dizolvați-o în 0,5 litri de apă fiartă. Luați pentru experiment 25 ml, ceea ce corespunde conținutului de vitamine de 20 de ori mai puțin decât într-o tabletă. Adăugați 1/2 linguriță de pastă de amidon în această soluție și picătură cu picătură, adăugați soluție de iod până la albastru. Determinăm numărul de picături și, în consecință, volumul soluției de iod consumate, calculăm conținutul de vitamina din soluție după formula: 0,88 * V = A mg, unde V este volumul soluției de iod. În tableta originală A - de 20 de ori mai mult, apoi A * 20 = conținutul de acid ascorbic din tabletă. Rezultatele au arătat că titrarea a luat 6 ml de soluție, ceea ce corespunde la 5,28 mg de vitamină, înmulțind cu 20 găsim numărul 105,6. Aceasta înseamnă că acuratețea analizei noastre este destul de suficientă.

3. Determinarea acidului ascorbic în produse

Am luat 25 ml de produs de testat și am adăugat amidon. Apoi, lichidul de testat a fost titrat cu o soluție de iod până când a apărut o culoare albastră stabilă a amidonului, ceea ce indică faptul că tot acidul ascorbic a fost oxidat (vezi Anexa 2). S-a înregistrat cantitatea de soluție de iod folosită pentru titrare și s-a făcut calculul. Pentru a face acest lucru, am făcut o proporție, știind că 1 ml dintr-o soluție de iod 0,125% oxidează 0,875 mg de acid ascorbic.

4. Prelucrarea rezultatelor obţinute

Titrarea a 25 ml de suc de lămâie a luat 7,1 ml de soluție de iod. Stabiliți o proporție:

1 ml soluție de iod - 0,875 mg acid ascorbic

7,1 ml - X

X= 7,1 * 0,875/1=6,25 (mg)

Deci, 25 ml de suc conțin 6,25 mg de acid ascorbic. Apoi 100 ml suc contin 6,25*100/25=25 mg

În mod similar, am calculat conținutul de vitamina C din alte produse. Datele obținute au fost introduse în tabelul 1

Tabelul 1. Rezultatele cercetării

Astfel, în cursul lucrării, am ajuns la concluzia practică că vitamina C, care este necesară pentru întărirea sistemului imunitar al corpului uman, este cea mai bogată în alimente - bulion de măceșe, ardei roșu, varză și lămâie. Noi am recomandacel mai simplu este sa pregatesti o infuzie de macese. Este foarte gustoasa, mai ales cu miere sau sirop de fructe, asa ca il poti bea cu placere.

De asemenea, puteți prepara sirop din măceșe adăugând roșu și aronia, viburnum, merișor, păducel. Un astfel de sirop poate fi consumat în 1 lingură. De 3 ori pe zi și dați copiilor mici 0,5-1 linguriță. Acest lucru va preveni multe boli.

Concluzie

Pe baza literaturii cercetate și a muncii depuse se pot trage următoarele concluzii:

• Vitaminele sunt cea mai importantă clasă de nutrienți esențiali. Apropo de vitamine, putem spune că toate sunt importante, darvitamina C - acid ascorbic, considerată de majoritatea biochimiștilor drept una dintre cele mai mari minuni ale naturii. Molecula de acid ascorbic este atât de simplă, activă și mobilă încât poate depăși cu ușurință multe obstacole, participând la diferite procese de viață.
• Pentru ca organismul să obțină suficientă vitamina C, este necesar să mănânci fie legume locale, fie acid ascorbic obținut sintetic.
• Vitamina C este unul dintre cei mai puternici antioxidanți și a fost pentru prima dată izolată din sucul de lămâie. Se dizolvă perfect în apă, iar acest lucru îi oferă o serie de avantaje - de exemplu, datorită acestei proprietăți, vitamina C poate pătrunde ușor și rapid acolo unde este nevoie, ajută sistemul imunitar să elimine defecțiunile din organism și poate începe procesele necesare. pentru sănătatea și viața omului. Cu toate acestea, aceeași proprietate îl face vulnerabil - acidul ascorbic este distrus în timpul tratamentului termic al produselor.
• Este posibil să studiem conținutul de vitamina C din produsele alimentare fără a apela la ajutorul unui laborator special, ci să o facem acasă, ceea ce ne confirmă ipoteza.
• Vitamina C - acid ascorbic, care se găsește în fructe și legume cu o soluție de iod.
• Cea mai mare cantitate de vitamina C se găsește în legume proaspete si fructe, in special in macese, ardei rosu, lamaie.

Literatură

1. Dudkin M.S., Shchelkunov L.F. Produse alimentare noi. - M.: Nauka, 1998.
2. Leenson I. Chimie distractivă, - M.: Rosmen, 1999.
3. Skurikhin I.M., Nechaev A.P. Totul despre alimente din punctul de vedere al unui chimist. ‒ M.: Mai sus

scoala, 1991.

1. Smirnov M.I. „Vitamine”, M.: „Medicina” 1974.
2. Tyurenkova I.N. „Surse vegetale de vitamine”, Volgograd 1999.
3. Compoziție chimică produse alimentare / Ed. I. M. Skurikhina, M. N. Volgareva. ‒ M.: Agropromizdat, 1987.
4. . http://vitamini.solvay-pharma.ru/encyclopedia/info.aspx?id=13
5. .http://kref.ru/infohim/138679/3.html
6. „Dicționar enciclopedic al unui tânăr chimist” - Moscova 1990 Pedagogie, anii 650.
7. http://vitamini.solvay-pharma.ru/encyclopedia/info.aspx?id=13

Atasamentul 1

Anexa 2

Examinarea sucului cu o soluție de iod pentru conținutul de vitamina C

Substanțele alimentare esențiale, unite sub denumirea generală „vitamine”, aparțin unor clase diferite de compuși chimici, ceea ce exclude în sine posibilitatea utilizării unei singure metode pentru determinarea lor cantitativă. Toate metodele analitice cunoscute pentru vitamine se bazează fie pe determinarea proprietăților biologice specifice ale acestor substanțe (biologice, microbiologice, enzimatice), fie pe utilizarea caracteristicilor lor fizico-chimice (metode fluorescente, cromatografice și spectrofotometrice), fie pe capacitatea de unele vitamine să reacţioneze cu unii reactivi pentru a forma compuşi coloraţi (metode colorimetrice).

În ciuda progreselor înregistrate în domeniul chimiei analitice și aplicate, metodele de determinare a vitaminelor din produsele alimentare sunt încă laborioase și consumatoare de timp. Acest lucru se datorează mai multor motive obiective, dintre care principalele sunt următoarele.

1. Determinarea unui număr de vitamine este adesea complicată de faptul că multe dintre ele se găsesc în natură în stare legată sub formă de complexe cu proteine ​​sau peptide, precum și sub formă de esteri de fosfor. Pentru determinarea cantitativă este necesară distrugerea acestor complexe și izolarea vitaminelor într-o formă liberă, disponibilă pentru analiză fizico-chimică sau microbiologică. Acest lucru se realizează de obicei prin utilizarea unor condiții speciale de prelucrare (hidroliză acidă, alcalină sau enzimatică, autoclavare).

2. Aproape toate vitaminele sunt compuși extrem de instabili, ușor supuși oxidării, izomerizării și distrugerii complete sub influența temperaturii ridicate, a oxigenului atmosferic, a luminii și a altor factori. Trebuie respectate măsurile de precauție: minimizați timpul de pregătire preliminară a produsului, evitați căldura puternică și expunerea la lumină, folosiți antioxidanți etc.

3. În produsele alimentare, de regulă, trebuie să avem de-a face cu un grup de compuși care au o mare similitudine chimică și, în același timp, diferă în activitatea biologică. De exemplu, vitamina E include 8 tocoferoli, similari în proprietăți chimice, dar diferită în acțiunea biologică; Grupul de caroteni și pigmenți carotenoizi include până la 80 de compuși, dintre care doar 10 au proprietăți vitaminice într-un grad sau altul.

4. Vitaminele aparțin diferitelor clase de compuși organici. Prin urmare, reacții comune de grup nu pot exista pentru ei și metode comune cercetare.

5. În plus, analiza complică prezența substanțelor concomitente în proba de testat, a căror cantitate poate depăși de multe ori conținutul vitaminei determinate (de exemplu, steroli și vitamina D). Pentru a elimina eventualele erori în determinarea vitaminelor din produsele alimentare, extractele sunt de obicei complet purificate din compușii înrudiți și vitamina este concentrată. Pentru aceasta se folosesc diverse metode: precipitarea substanțelor care interferează cu analiza, metode de adsorbție, cromatografia de schimb ionic sau de partiție, extracția selectivă a analitului etc.

În ultimii ani, HPLC a fost folosită cu succes pentru determinarea vitaminelor din produsele alimentare. Această metodă este cea mai promițătoare, deoarece vă permite să separați, identificați și cuantificați simultan diverse vitamine și formele lor biologic active, ceea ce reduce timpul de analiză.

Metode fizico-chimice pentru studiul vitaminelor. Metodele se bazează pe utilizarea caracteristicilor fizico-chimice ale vitaminelor (capacitatea lor de fluorescență, absorbție a luminii, reacții redox etc.). Datorită dezvoltării chimiei analitice și a instrumentației, metodele fizico-chimice au înlocuit aproape complet metodele biologice costisitoare și consumatoare de timp.

Determinarea vitaminei C. Vitamina C (acidul ascorbic) poate fi prezentă în alimente atât sub formă redusă, cât și în formă oxidată. Acidul dehidroascorbic (DAC) se poate forma în timpul procesării și depozitării produselor alimentare ca urmare a oxidării, ceea ce face necesară determinarea acestuia. La determinarea vitaminei C în produsele alimentare se folosesc diverse metode: metode de analiză colorimetrică, fluorescentă, volumetrică bazate pe proprietățile redox ale AA și HPLC.

Punctul crucial în determinarea cantitativă a AA este prepararea extractului de probă. Extragerea trebuie să fie completă. Cel mai bun extractant este o soluție de 6% de acid metafosforic, care are capacitatea de a precipita proteinele. Se folosesc de asemenea acizii acetic, oxalic și clorhidric, precum și amestecurile acestora.

1. Pentru determinarea totală și separată a formelor oxidate și reduse de AA, metoda Rohe este adesea utilizată folosind un reactiv 2,4-dinitrofenilhidrazină. AA (acidul gulonic) sub acțiunea agenților oxidanți trece în DAK, iar apoi în acid 2,3-diketogulonic, care formează compuși cu culoare portocalie cu 2,4-dinitrofenilhidrazină. 2,4-dinitrofenilhidrazina în sine este o bază care nu poate exista sub formă aci. Cu toate acestea, hidrazonele corespunzătoare sub influența alcalinelor sunt transformate în aci-săruri intens colorate. La determinarea vitaminei C, această metodă interferează cu prezența agenților reducători (glucoză, fructoză etc.). Prin urmare, când conținut grozav zaharurile din produsul testat folosesc cromatografia, ceea ce complică determinarea.

2. Recent, a fost recunoscută o metodă fluorescentă foarte sensibilă și precisă pentru determinarea conținutului total de vitamina C (suma AA și DAA). DAK, condensând cu o-fenilendiamină, formează un compus fluorescent, chinoxalina, care are fluorescență maximă la o lungime de undă de excitare de 350 nm.

Intensitatea fluorescenței chinoxalinei într-un mediu neutru la temperatura camerei este direct proporțională cu concentrația de DAA. Pentru determinarea cantitativă a AA, se oxidează preliminar în DAA. Dezavantajul acestei metode este echipamentul destul de scump.

Metode bazate pe proprietățile redox ale AA.

3. Dintre metodele bazate pe proprietățile redox ale AA, metoda de titrare cu o soluție de 2,6-diclorfenolindofenol, care are o culoare albastră, a găsit cea mai mare aplicație. Produsul interacțiunii AA cu reactivul este incolor. Metoda poate fi utilizată în analiza tuturor tipurilor de produse. La analizarea produselor care nu conțin pigmenți naturali în cartofi, lapte, se folosește titrarea vizuală. În cazul prezenței coloranților naturali se folosește titrarea potențiometrică sau metoda de extracție cu indofenol-xilen. Această din urmă metodă se bazează pe decolorarea cantitativă a 2,6-diclorfenolindofenolului cu acid ascorbic. Excesul de colorant este extras cu xilen și densitatea optică a extractului este măsurată la 500 nm.

Doar AK reacționează. DAK este pre-redus cu cisteină. Pentru a separa AA de agenții reducători prezenți în alimentele tratate termic sau extractele depozitate pe termen lung, aceștia sunt tratați cu formaldehidă. Formaldehida, în funcție de pH-ul mediului, interacționează selectiv cu AA și impuritățile străine ale agenților reducători (pH = 0). Metoda specificată determină cantitatea de AK și DAK.

2,6-diclorfenolindofenolul poate fi, de asemenea, utilizat pentru determinarea fotometrică a AA. Soluția de reactiv are o culoare albastră, iar produsul de interacțiune cu AA este incolor, adică. ca urmare a reacţiei, intensitatea culorii albastre scade. Densitatea optică este măsurată la 605 nm (pH = 3,6).

4. O altă metodă bazată pe proprietățile reducătoare ale AA este metoda colorimetrică, care folosește capacitatea AA de a reduce Fe(3+) la Fe(2+) și capacitatea acestuia din urmă de a forma săruri roșii intense cu 2,2'- dipiridil. Reacția se efectuează la pH 3,6 și la o temperatură de 70ºС. Absorbanța soluției este măsurată la 510 nm.

5. Metoda fotometrică bazată pe interacțiunea AA cu reactivul Folin. Reactivul Folin este un amestec de acizi fosfomolibdic și fosfotungstic, adică. aceasta este o metodă cunoscută bazată pe formarea de albastru de molibden care se absoarbe la 640–700 nm.

6. Metoda HPLC foarte sensibilă și specifică poate fi utilizată cu succes pentru determinarea vitaminei C în toate produsele alimentare. Analiza este destul de simplă, doar atunci când analizați produse bogate în proteine, trebuie mai întâi să le eliminați. Detectarea se realizează prin fluorescență.

Pe lângă metodele de mai sus pentru determinarea vitaminei C, există o serie de metode, de exemplu, oxidarea cu clorură de aur și formarea acizilor hidroxamici, dar aceste metode nu au importanță practică.

Determinarea tiaminei (B 1 ). În majoritatea produselor naturale, tiamina apare sub formă de ester difosforic - cocarboxilază. Acesta din urmă, fiind grupul activ al unui număr de enzime ale metabolismului glucidic, se află în anumite legături cu proteina. Pentru determinarea cantitativă a tiaminei este necesară distrugerea complexelor și izolarea vitaminei studiate într-o formă liberă, disponibilă pentru analiză fizico-chimică. În acest scop, se efectuează hidroliza acidă sau hidroliza sub influența enzimelor. Obiectele bogate în proteine ​​sunt tratate cu enzime proteolitice (pepsină) într-un mediu de acid clorhidric. Obiectele cu un continut mare de grasimi (carne de porc, branzeturi) sunt tratate cu eter pentru a-l indeparta (tiamina este practic insolubila in eter).

1. Pentru determinarea tiaminei în produsele alimentare, de regulă, se utilizează o metodă fluorescentă, bazată pe oxidarea tiaminei într-un mediu alcalin cu hexacianoferat de potasiu (3+) pentru a forma un compus tiocrom care este foarte fluorescent în lumina ultravioletă. Intensitatea fluorescenței sale este direct proporțională cu conținutul de tiamină (lungimea de undă a luminii excitante este de 365 nm, lungimea de undă a luminii emise este de 460-470 nm (fluorescență albastră)). Când se utilizează această metodă, apar dificultăți din cauza prezenței compușilor fluorescenți într-un număr de obiecte. Ele sunt îndepărtate prin purificare pe coloane cu rășini schimbătoare de ioni. Când se analizează carnea, laptele, cartofii, pâinea de grâu și unele legume, nu este necesară purificarea.

2. Tiamina se caracterizează prin propria sa absorbție în regiunea UV (240 nm în soluție apoasă, 235 nm în etanol), ceea ce înseamnă că poate fi determinată prin spectrofotometrie directă.

3. Pentru determinarea simultană a tiaminei și riboflavinei se utilizează HPLC.

Determinarea riboflavinei (B 2 ). În alimente, riboflavina este prezentă în principal ca esteri de fosfor legați de proteine ​​și, prin urmare, nu poate fi determinată fără o digestie proteolitică prealabilă. Riboflavina liberă se găsește în cantități semnificative în lapte.

La determinarea riboflavinei, cele mai utilizate metode de analiză microbiologice și fizico-chimice (fluorescente). Metoda microbiologică este specifică, foarte sensibilă și precisă; aplicabil tuturor produselor, dar de lungă durată și necesită condiții speciale.

Metoda fizico-chimică a fost dezvoltată în două versiuni, care diferă prin metoda de evaluare a substanțelor fluorescente:

varianta fluorescenței directe (determinarea intensității fluorescenței riboflavinei) și

Varianta Lumiflavină.

1. Riboflavina liberă și esterii săi fosfat prezintă o fluorescență galben-verde caracteristică la o lungime de undă de excitație de 440-500 nm. Această proprietate stă la baza celei mai utilizate metode fluorescente pentru determinarea riboflavinei. Riboflavina și esterii săi dau spectre de fluorescență foarte asemănătoare cu un maxim la 530 nm. Poziția maximului nu depinde de pH. Intensitatea fluorescenței depinde semnificativ de pH și de solvent (diferit pentru riboflavină și esterii săi), astfel că esterii sunt distruși preliminar și se analizează riboflavina liberă. Pentru aceasta, se utilizează hidroliza cu acizi clorhidric și tricloroacetic, autoclavarea și tratamentul cu preparate enzimatice.

Intensitatea fluorescenței galben-verzui a riboflavinei în lumina UV depinde nu numai de concentrația acesteia, ci și de valoarea pH-ului soluției. Intensitatea maximă se atinge la pH=6-7. Cu toate acestea, măsurarea se efectuează la pH de la 3 la 5, deoarece în acest interval intensitatea fluorescenței este determinată numai de concentrația de riboflavină și nu depinde de alți factori - valoarea pH-ului, concentrația de săruri, fier, impurități organice. , etc.

Riboflavina se distruge cu ușurință la lumină, determinarea se efectuează într-un loc ferit de lumină și la pH nu mai mare de 7. Trebuie menționat că metoda fluorescenței directe nu este aplicabilă produselor cu conținut scăzut de riboflavină.

2. Varianta de luminflavină se bazează pe utilizarea proprietății riboflavinei la iradiere într-un mediu alcalin, de a se transforma în lumiflavină, a cărei intensitate a fluorescenței se măsoară după extracția sa cu cloroform (fluorescență albastră, 460–470 nm). Deoarece în anumite condiții 60-70% din riboflavina totală trece în lumiflavină, în timpul analizei este necesar să se respecte condiții constante de iradiere, aceleași pentru soluția de test și standard.

Determinarea vitaminei B 6 . Pentru determinarea vitaminei pot fi utilizate următoarele metode:

1. Spectrofotometrie directă. Clorhidratul de piridoxină se caracterizează prin propria sa absorbție la 292 nm (e = 4,4 10 3) la pH = 5.

2. metoda Kjeldahl. Determinarea este efectuată de amoniac, care se formează în timpul oxidării vitaminei.

3. Metoda fotometrică bazată pe reacția cu 2,6-diclorochinonă clorimină (reactiv Gibbs) la pH 8-10, care are ca rezultat formarea de indofenoli albaștri. Indofenolii sunt extrași cu metil etil cetonă și densitatea optică a extractului este măsurată la 660–690 nm (reacția Gibbs dă fenoli cu o poziție para liberă).

4. O metodă fluorescentă bazată pe faptul că, la iradierea cu piridoxină și piridoxamină, se observă fluorescență albastră, iar cu piridoxal, fluorescență albastră.

Determinarea vitaminei B 9 . Determinarea folaților din alimente în țesuturi și fluide corporale prezintă dificultăți semnificative, deoarece în aceste obiecte sunt prezente de obicei sub formă legată (sub formă de poliglutamați); în plus, majoritatea formelor sunt sensibile la efectele oxigenului atmosferic, luminii și temperaturii. Pentru a proteja folații de hidroliză, se recomandă hidroliza în prezența acidului ascorbic.

În alimente, folații pot fi determinați prin metode fizice, chimice și microbiologice. Metoda colorimetrică se bazează pe scindarea acidului pteroilglutamic cu formarea acidului p-aminobenzoic și a substanțelor înrudite și transformarea lor ulterioară în compuși colorați. Cu toate acestea, din cauza lipsei de specificitate, această metodă este utilizată în principal pentru analiza produselor farmaceutice.

Pentru separarea, purificarea și identificarea folaților s-au dezvoltat și metode de cromatografie pe coloane, hârtie și într-un strat subțire de adsorbant.

Determinarea vitaminei PP. În produsele alimentare, acidul nicotinic și amida acestuia sunt atât sub formă liberă, cât și legată, făcând parte din coenzime. Metodele chimice și microbiologice pentru determinarea cantitativă a niacinei sugerează cea mai completă izolare și conversie a acesteia forme aferente, care fac parte din materia organică complexă a celulelor, în acid nicotinic liber. Formele legate de niacină sunt eliberate prin expunerea la soluții acide sau hidroxid de calciu atunci când sunt încălzite. Hidroliza cu soluție de acid sulfuric 1 M într-o autoclavă timp de 30 de minute la o presiune de 0,1 MPa duce la eliberarea completă a formelor legate de niacină și conversia nicotinamidei în acid nicotinic. S-a stabilit că această metodă de prelucrare dă hidrolizate mai puțin colorate și poate fi utilizată în analiza produselor din carne și pește. Hidroliza cu hidroxid de calciu este preferată în determinarea niacinei în făină, cereale, produse de patiserie, brânzeturi, concentrate alimentare, legume, fructe de pădure și fructe. Ca(OH) 2 formează compuși cu zaharuri și polizaharide, peptide și glicopeptide care sunt aproape complet insolubile în soluții răcite. Ca urmare, hidrolizatul obţinut prin tratarea cu Ca(OH)2 conţine mai puţine substanţe care interferează cu determinarea chimică decât hidrolizatul acid.

1. Baza metodei chimice pentru determinarea niacinei este reacția Koenig, care se desfășoară în două etape. Prima etapă este reacția de interacțiune a inelului piridinic Acid nicotinic cu bromură de cianogen, al doilea este formarea unui derivat colorat al aldehidei glutaconice ca urmare a interacțiunii cu aminele aromatice. (Imediat după adăugarea bromurii de cianogen la acidul nicotinic apare o culoare galbenă a glutaconaldehidei. Ca urmare a interacțiunii acesteia cu aminele aromatice introduse în amestecul de reacție se formează dianili care sunt intens colorați în galben, portocaliu sau roșu, în funcție de amina (benzidină - roșu, acid sulfanilic - galben).Reacția Koenig este utilizată pentru determinarea fotometrică a piridinei și a derivaților săi cu poziție a liberă. Dezavantajul metodei este durata acesteia, deoarece viteza de reacție este scăzută.

Obținerea CNBr este posibilă în două moduri:

1. CN - + Br 2 = CNBr + Br -

2. SCN – + Br 2 + 4H 2 O = CNBr + SO 4 2– + 8H + + Br –

Există multe modificări ale acestei reacții, în funcție de temperatură, pH, sursa de amine aromatice. pH-ul și amina afectează semnificativ intensitatea și stabilitatea culorii în curs de dezvoltare. Culoarea cea mai stabilă este dată de produșii de reacție ai acidului nicotinic cu reactivul bromrodan (bromociano) și acidul sulfanilic sau metol (sulfat de para-metilaminofenol).

2. Acidul nicotinic și amida acestuia pot fi de asemenea determinate spectrofotometric datorită propriei absorbții în regiunea UV. Acidul nicotinic este caracterizat printr-un maxim de absorbție la 262 nm (E = 4,4 10 3), și nicotinamidă la 215 nm, (E = 9 10 3).

3. Metoda microbiologică este utilizată pe scară largă pentru determinarea cantitativă a niacinei. Este simplu, specific, dar mai lung decât chimic. Metoda microbiologică vă permite să determinați conținutul de niacină în obiectele în care este imposibil să faceți acest lucru chimic (alimente cu un conținut ridicat de zahăr și un nivel scăzut de niacină).

Determinarea b-carotenului. Într-o serie de produse alimentare, în special de origine vegetală, sunt prezenți așa-numitele carotenoide. Carotenoizi (din lat. carota- morcovi) - pigmenți naturali de la galben la roșu-portocaliu; compuși polinesaturați care conțin cicluri ciclohexan; în majoritatea cazurilor conțin 40 de atomi de carbon în moleculă.) Unii dintre ei (a, b-caroten, criptoxantina etc.) sunt provitamine (precursori) ai vitaminei A, deoarece la oameni și animale pot fi transformate în vitamina A. Aproximativ zece sunt cunoscute provitamina A, dar cea mai activă dintre ele este b-carotenul.

Atunci când se analizează produsele alimentare, este necesară tratarea prealabilă a probei pentru extragerea, concentrarea carotenului și purificarea acestuia din compușii înrudiți. În acest scop, sunt utilizate pe scară largă extracția (eter de petrol, hexan, acetonă și amestecuri ale acestora), saponificarea și cromatografia. La determinarea b-carotenului, încălzirea trebuie evitată. Dar, în unele cazuri, saponificarea la cald este necesară, de exemplu, atunci când raportul dintre grăsime și b-caroten este mai mare de 1000:1 (produse lactate, grăsimi animale, margarină, ouă, ficat). Saponificarea se realizează în prezența unui antioxidant. Excesul de alcali duce la distrugerea b-carotenului. Pentru a separa b-carotenul de pigmenții însoțitori, se utilizează pe scară largă cromatografia de adsorbție pe coloane cu oxid de aluminiu, oxid de magneziu.

1. Cele mai multe metode fizico-chimice utilizate în prezent pentru determinarea b-carotenului în produsele alimentare se bazează pe măsurarea intensității de absorbție a luminii a soluțiilor sale. Ca compuși cu duble legături conjugate, carotenoizii au spectre de absorbție UV și vizibile caracteristice. Poziția benzii de absorbție depinde de numărul de duble legături conjugate din molecula de carotenoid și de solventul utilizat. Absorbția maximă a b-carotenului se observă în benzen la 464–465 nm, în hexan și eter de petrol la 450–451 nm.

2. Recent, metoda HPLC a fost folosită mai frecvent pentru a determina b-carotenul și alți carotenoizi. Metoda permite reducerea timpului de analiză și, prin urmare, probabilitatea distrugerii lor sub acțiunea luminii și a oxigenului atmosferic. Metoda HPLC a carotenoizilor este un exemplu clasic de demonstrare a capacității metodei de a separa și cuantifica izomerii spațiali ai a- și b-carotenului din legume.

Metodele chimice pot fi, de asemenea, utilizate pentru determinarea b-carotenului, de exemplu, pe baza reacției cu clorura de antimoniu (3+) în cloroform (albastru, 590 nm), similar cu vitamina A, și cu reactivul Folin (albastru, 640–700). nm). Cu toate acestea, din cauza nespecificității acestor reacții, ele nu au găsit o aplicare largă.

Determinarea vitaminei A. Cei mai importanți reprezentanți ai vitaminei sunt, după cum sa menționat deja, retinolul (A 1 -alcool), rentinal (A 1 -aldehida), acidul retinoic (A 2).

În determinarea cantitativă a vitaminei A în produsele alimentare se folosesc diverse metode: colorimetrică, fluorescentă, spectroscopie directă și HPLC. Alegerea metodei este determinată de disponibilitatea unuia sau altuia echipament, scopul studiului, proprietățile materialului analizat, conținutul așteptat de vitamina A și natura impurităților însoțitoare.

Izolarea vitaminei se realizează prin fierbere cu o soluție alcoolică de KOH într-un mediu cu azot; și extracția ulterioară cu eter de petrol.

1. Pentru determinarea cantitativă a substanțelor cu activitate de vitamina A se poate folosi spectrofotometria directă, bazată pe capacitatea acestor compuși de a absorbi selectiv lumina la diferite lungimi de undă în regiunea UV a spectrului. Absorbția este proporțională cu concentrația unei substanțe atunci când este măsurată la acele lungimi de undă la care caracteristica maximă de absorbție a unui anumit compus este observată în solventul utilizat. Metoda este cea mai simplă, cea mai rapidă și destul de specifică. Oferă rezultate fiabile în determinarea vitaminei A în obiectele care nu conțin impurități cu absorbție în aceeași regiune spectrală. În prezența unor astfel de impurități, metoda poate fi utilizată în combinație cu o etapă de separare cromatografică.

2. O metodă promițătoare este metoda fluorescentă bazată pe capacitatea retinolului de a fluoresce sub acțiunea razelor UV (lungimea de undă a luminii excitante 330–360 nm). Maximul de fluorescență este observat în regiunea de 480 nm. Determinarea vitaminei A prin această metodă este interferată de carotenoizi și vitamina D. Pentru a elimina efectul de interferență, se folosește cromatografia pe alumină. Dezavantajul metodei fluorescente este echipamentul scump.

3. Anterior, cea mai comună era metoda colorimetrică pentru determinarea vitaminei A prin reacția cu clorura de antimoniu. Utilizați o soluție de clorură de antimoniu în cloroform (reactiv Carr-Price). Mecanismul de reacție nu a fost stabilit cu precizie și se presupune că o impuritate de SbCL 5 în SbCl 3 intră în reacție. Compusul format în reacție este colorat în albastru. Măsurarea densității optice este efectuată la o lungime de undă de 620 nm timp de 3-5 secunde. Un dezavantaj semnificativ al metodei este instabilitatea culorii în curs de dezvoltare, precum și hidrolizabilitatea ridicată a SbCl3. Este de așteptat ca reacția să decurgă după cum urmează:

Această reacție nu este specifică pentru vitamina A; carotenoizii dau o culoare similară, dar separarea cromatografică a acestor compuși face posibilă eliminarea efectului lor de interferență.

Determinarea vitaminei A prin metodele enumerate, de regulă, este precedată de o etapă pregătitoare, care include hidroliza alcalină a substanțelor asemănătoare grăsimii și extragerea reziduului nesaponificabil cu un solvent organic. Adesea este necesar să se efectueze o separare cromatografică a extractului.

4. Recent, în locul cromatografia pe coloană, s-a folosit tot mai mult HPLC, care vă permite să separați vitaminele liposolubile (A, D, E, K), prezente de obicei simultan în produsele alimentare, și să le cuantificați cu mare precizie. HPLC facilitează determinarea diferitelor forme de vitamine (vitamina A-alcool, izomerii săi, esterii de retinol), ceea ce este necesar în special atunci când se controlează introducerea vitaminelor în produsele alimentare.

Determinarea vitaminei E. Grupul de substanțe unite prin denumirea comună „vitamina E” include derivați ai tocolului și trienolului, care au activitatea biologică a a-tocoferolului. Pe lângă a-tocoferol, sunt cunoscuți încă șapte compuși înrudiți cu activitate biologică. Toate pot fi găsite în produse. În consecință, principala dificultate în analiza vitaminei E este că în multe cazuri este necesar să se ia în considerare un grup de compuși care au o mare asemănare chimică, dar în același timp diferă în activitatea biologică, care poate fi evaluată doar printr-o metodă biologică. . Este dificil și costisitor, așa că metodele fizico-chimice au înlocuit aproape complet metodele biologice.

Etapele principale în determinarea vitaminei E: prepararea probei, hidroliza alcalină (saponificarea), extracția reziduului nesaponificabil cu un solvent organic, separarea vitaminei E de substanțele care interferează cu analiza și separarea tocoferolilor folosind diferite tipuri de cromatografie, cantitative. determinare. Tocoferolii sunt foarte sensibili la oxidare în mediu alcalin; prin urmare, saponificarea și extracția se efectuează în atmosferă de azot și în prezența unui antioxidant (acid ascorbic). La saponificare, formele nesaturate (tocotrienoli) pot fi distruse. Prin urmare, dacă este necesar să se determine toate formele de vitamina E conținute în produs, saponificarea este înlocuită cu alte tipuri de procesare, de exemplu, cristalizarea la temperaturi scăzute.

1. Majoritatea metodelor fizico-chimice pentru determinarea vitaminei E se bazează pe utilizarea proprietăților redox ale tocoferolilor. Pentru a determina cantitatea de tocoferoli din produsele alimentare, reacția de reducere a fierului feric la fier feros cu tocoferoli este cel mai adesea folosită pentru a forma un complex Fe(2+) colorat cu reactivi organici. Cel mai frecvent utilizat este 2,2’-dipiridil, cu care Fe(2+) dă un complex de culoare roșie (λ max = 500 nm). Reacția nu este specifică. În el intră și carotenii, stirenii, vitamina A etc.. În plus, intensitatea culorii depinde în mod semnificativ de timp, temperatură și iluminare. Prin urmare, pentru a îmbunătăți acuratețea analizei, tocoferolii sunt separați preliminar de compușii care interferează cu determinarea prin coloană, cromatografie gaz-lichid, HPLC. La determinarea valorii vitaminei E a produselor în care a-tocoferol reprezintă mai mult de 80% din conținutul total de tocoferol (carne, produse lactate, pește etc.), se limitează adesea la determinarea cantității de tocoferoli. Atunci când alți tocoferoli (uleiuri vegetale, cereale, produse de panificație, nuci) sunt prezenți în cantități semnificative, se folosește cromatografia pe coloană pentru a le separa.

2. Metoda fluorescentă poate fi folosită și pentru a determina cantitatea de tocoferoli. Extractele cu hexan au o fluorescență maximă la 325 nm la o lungime de undă de excitație de 292 nm.

3. Pentru determinarea tocoferolilor individuali, metoda HPLC prezintă un interes indubitabil, oferind atât separarea, cât și analiza cantitativă într-un singur proces. Metoda se caracterizează, de asemenea, prin sensibilitate și precizie ridicate. Detectarea se realizează prin absorbție sau prin fluorescență.

Determinarea vitaminei D. Cuantificarea vitaminei în alimente este extrem de dificilă din cauza conținutului său scăzut, a lipsei reacțiilor specifice sensibile la vitamina D și a dificultății de separare a acesteia de substanțele înrudite. Până de curând s-au folosit studii biologice pe șobolani sau găini. Metodele biologice se bazează pe stabilirea cantității minime de produs de testat care vindecă sau previne rahitismul la șobolani (găini) cu dietă rahitogenă. Se apreciază radiografic gradul de rahitism. Aceasta este o metodă destul de specifică și precisă care vă permite să determinați vitamina D la o concentrație de 0,01–0,2 µg%.

1. În studiul produselor cu un conținut de vitamina D mai mare de 1 μg%, se poate folosi o metodă fotometrică bazată pe reacția calciferolului cu clorura de antimoniu (se formează un produs de culoare roz). Metoda permite determinarea atât a colecalciferolului (D 3) cât și a ergocalciferolului (D 2). Analiza constă în următoarele operații: saponificare (hidroliza alcalină), precipitarea sterolilor, cromatografie (coloană sau partiție) și reacție fotometrică cu clorură de antimoniu. Metoda este potrivită pentru determinarea conținutului de vitamina D în ulei de pește, ouă, ficat de cod, caviar, unt, alimente fortificate cu vitamine. Metoda descrisă este laborioasă și consumatoare de timp.

Vitamina D 2 trebuie protejată de lumină și aer, altfel are loc izomerizarea. D 3 - mai stabil.

2. Mai rapidă, mai fiabilă și mai precisă este metoda HPLC din ce în ce mai utilizată, care a fost folosită cu succes în analiza copiilor și produse dieteticeîmbogățit cu vitamina D.

3. Calciferolii sunt caracterizați prin absorbția UV intrinsecă și pot fi determinați prin spectrofotometrie directă.

În ultimii ani, metodele de separare cromatografică, în special cromatografia în strat subțire și cromatografia gaz-lichid, au fost utilizate cu succes pentru a determina vitamina D. În studiile experimentale pentru a studia metabolismul vitaminei D la animale și la oameni, metodele radiochimice sunt utilizate pe scară largă în combinație cu cromatografia în strat subțire sau pe coloană pe silicagel sau oxid de aluminiu.

Determinarea vitaminei K. Pentru determinarea vitaminei K se folosesc metode fizice, chimice, biologice, precum și metode spectrografice bazate pe sensibilitatea vitaminei K la radiațiile UV.

Pentru determinarea 2-metil-1,4-naftochinonelor s-au propus multe metode colorimetrice bazate pe reacțiile de culoare pe care acestea le dau cu un număr de reactivi: 2,4-dinitrofenilhidrazină, N,N-dietilditiocarbamat de sodiu, săruri de tetrazoliu etc. Dar toate aceste metode și o serie de alte metode fizice și chimice nu sunt suficient de specifice și rezultatele obținute cu ajutorul lor sunt de o valoare foarte relativă pentru determinarea conținutului de vitamina K în produsele alimentare, organele și țesuturile oamenilor și animalelor. Rezultate satisfăcătoare se obțin prin metode colorimetrice și spectrofotometrice în combinație cu cromatografia, purificarea și separarea vitaminelor K pe coloane, pe hârtie sau într-un strat subțire de adsorbant.

Introducere…………………………………………………………………2

1. Prezentare generală a metodelor de determinare a vitaminelor…………3

2. Metode cromatografice pentru determinarea vitaminelor…………5

3. Metode electrochimice pentru determinarea vitaminelor…………10

4. Metoda voltametrică de stripare pentru determinare

vitaminele B 1 B 2 solubile în apă din alimente………..13

Concluzie…………………………………………………………………….18

Introducere

În prezent, pe piață au apărut un număr imens de produse alimentare fortificate pentru oameni și hrană pentru animale, care sunt amestecuri uscate multicomponente. Gama de astfel de produse este prezentată destul de larg. Acestea sunt, în primul rând, suplimente alimentare biologic active, premixuri, furaje combinate pentru animale și păsări, preparate multivitamine. Criteriul pentru calitatea unor astfel de produse poate fi analiza acestora pentru conținutul de vitamine și, în special, de cele vitale precum vitaminele hidrosolubile și liposolubile, a căror cantitate este reglementată prin documente de reglementare și standarde sanitare de calitate.

Pentru determinarea vitaminelor se folosesc diferite metode. Metodele optice de analiză utilizate pe scară largă sunt laborioase, consumatoare de timp și necesită reactivi scumpi; utilizarea metodelor cromatografice este complicată de utilizarea echipamentelor costisitoare. În fiecare an sortimentul se extinde și producția de produse alimentare crește, rețeta este îmbunătățită. mancare de bebeluși. Aceasta, la rândul său, impune cerințe sporite asupra controlului calității produselor și îmbunătățirii metodelor de determinare a vitaminelor. Cerințele biomedicale și standardele sanitare pentru calitatea materiilor prime alimentare și a produselor alimentare caracterizează valoarea nutritivă a majorității tipurilor și grupelor de produse alimentare pentru copii pentru diverse scopuri.

1. Prezentare generală a metodelor de determinare a vitaminelor

Aproape toate vitaminele sunt ușor oxidate, izomerizate și distruse sub influența temperaturii ridicate, a luminii, a oxigenului atmosferic, a umidității și a altor factori.

Dintre metodele existente pentru determinarea vitaminei C (acid ascorbic), cea mai utilizată metodă este titrarea vizuală și potențiometrică cu o soluție de 2,6-diclorofenolindofenol conform GOST 24556-81, bazată pe proprietățile reducătoare ale acidului ascorbic și capacitatea sa. pentru a reduce 2,6-DCPIP. Culoarea albastru închis a acestui indicator devine incoloră atunci când se adaugă acid ascorbic. Prepararea unui extract din produsul testat este importantă. Cel mai bun extractant este o soluție de 6% de acid metafosforic, care inactivează ascorbat oxidaza și precipită proteinele.

Carotenul din materii prime vegetale, concentrate și băuturi răcoritoare este controlat prin metoda fizico-chimică conform GOST 8756.22-80. Metoda se bazează pe determinarea fotometrică a fracției de masă a carotenului într-o soluție obținută în procesul de extracție din produse cu solvent organic. Soluția se purifică preliminar din substanțele colorante însoțitoare folosind cromatografia pe coloană. Carotenul se dizolvă ușor în solvenți organici (eter, benzină etc.) și le conferă o culoare galbenă. Pentru determinarea cantitativă a carotenului se folosește cromatografia de adsorbție pe coloane cu oxid de aluminiu și oxid de magneziu. O astfel de determinare a pigmenților pe o coloană depinde de activitatea adsorbantului, de cantitatea de pigmenți și de prezența altor componente în amestecul de separat. Un amestec uscat de oxid de aluminiu reține carotenul, în timp ce un amestec umed permite altor coloranți să treacă în soluție.

Tiamina se află în principal în stare legată sub formă de ester difosforic - cocarboxilază, care este grupul activ al unui număr de enzime. Cu ajutorul hidrolizei acide și sub influența enzimelor, tiamina este eliberată din starea legată. Această metodă determină cantitatea de tiamină. Pentru a calcula conținutul de vitamina B1, se utilizează o metodă fluorometrică, care este utilizată pentru a determina tiamina în produsele alimentare. Se bazează pe capacitatea tiaminei de a forma tiocrom într-un mediu alcalin cu fericianura de calciu, care dă fluorescență intensă în alcool butilic. Intensitatea procesului este controlată cu fluorometrul EF-ZM.

În alimente și băuturi, riboflavina este prezentă într-o stare legată, adică sub formă de esteri de fosfor asociați cu o proteină. Pentru a determina cantitatea de riboflavină din produse, este necesar să se elibereze din starea sa legată prin hidroliză acidă și tratament cu preparate enzimatice. Vitamina B1 din băuturile răcoritoare este calculată folosind o metodă chimică pentru a determina cantitatea de forme de riboflavină ușor hidrolizabile și strâns legate în țesuturi. Metoda se bazează pe capacitatea riboflavinei de a fluoresce înainte și după reducerea acesteia cu hiposulfit de sodiu. Determinarea conținutului total de compuși fenolici. Pentru aceasta se folosește metoda colorimetrică Folin-Denis, care se bazează pe formarea de complexe albastre în timpul reducerii acidului tungstic sub acțiunea polifenolilor cu un reactiv în mediu alcalin. Compușii fenolici sunt determinați prin acid clorogenic prin fotometrie cu flacără pe un instrument EKF-2.

2. Metode cromatografice de determinare a vitaminelor

Recent, metoda cromatografiei lichide de înaltă performanță s-a dezvoltat rapid în străinătate. Acest lucru se datorează, în primul rând, apariției cromatografelor lichide de precizie și îmbunătățirii tehnicilor de analiză. Utilizarea pe scară largă a metodei HPLC în determinarea vitaminelor sa reflectat și în numărul de publicații. Până în prezent, mai mult de jumătate din toate lucrările publicate privind analiza vitaminelor solubile în apă și în grăsimi sunt dedicate utilizării acestei metode.Diferitele tipuri de cromatografie au devenit larg răspândite în determinarea vitaminelor.

Pentru purificarea tocoferolului de impurități se folosește cromatografia în strat subțire.În combinație cu metodele spectrofotometrice și fluorimetrice, prin această metodă se determină și vitamina E cantitativ.La separare se folosesc plăci cu silufol, kieselgel.

Analiza izomerilor de tocoferol din uleiul de măsline se realizează prin cromatografie gaz-lichid. Metodele de analiză GC și GLC necesită prepararea derivaților volatili, ceea ce este extrem de dificil în analiza vitaminelor liposolubile. Din acest motiv, aceste metode de determinare nu sunt utilizate pe scară largă. Determinarea vitaminei E în produsele alimentare, farmaceutice și obiectele biologice se realizează în moduri gradient și izocratice, atât în ​​fază normală, cât și în condiții de fază inversă. Ca adsorbanți sunt utilizați silicagel (SG), pământ de diatomee, silasorb, ODS-Hypersil și alți purtători. Pentru monitorizarea continuă a compoziției eluatului în cromatografie lichidă la analiza vitaminelor și creșterea sensibilității determinării, UV (A, = 292 nm), spectrofotometric (X = 295 nm), fluorescent (X, = 280/325 nm) detectoare electrochimice, PMR și spectroscopice de masă.

Majoritatea cercetătorilor preferă să folosească cromatografia de adsorbție pentru a separa amestecurile tuturor celor opt izomeri de tocoferoli și acetații acestora. În aceste cazuri, faza mobilă este de obicei hidrocarburi care conțin cantități minore de orice eter simplu. Metodele enumerate pentru determinarea vitaminei E, de regulă, nu prevăd saponificarea preliminară a probelor, ceea ce reduce semnificativ timpul de analiză.

Separarea cu determinarea cantitativă simultană a conținutului de vitamine liposolubile (A, D, E, K) în prezența lor comună în preparatele multivitaminice se realizează atât în ​​faza directă, cât și în faza inversă. În acest caz, majoritatea cercetătorilor preferă să folosească versiunea în fază inversă a HPLC. Metoda HPLC vă permite să analizați vitaminele B1 și B2 solubile în apă atât simultan, cât și separat. Pentru a separa vitaminele, se folosesc versiuni HPLC în fază inversă, perechi de ioni și schimbătoare de ioni. Aplicați ambele moduri de cromatografie izocratică și gradient. Separarea preliminară a analiților din matrice se realizează prin hidroliza enzimatică și acidă a probei.

Avantajele metodei de cromatografie lichidă:

Definirea mai multor componente simultan

Eliminarea influenței componentelor interferente

Complexul poate fi reconfigurat rapid pentru a efectua alte analize.

Compoziția și caracteristicile echipamentelor și software-ului pentru cromatograf lichid „Chromos ZhKh-301”:

tabelul 1

Avantajele cromatografului „Chromos ZhKh-301”:

Stabilitatea ridicată și precizia menținerii debitului de eluant este asigurată de proiectarea pompelor de înaltă presiune.

Accesul ușor la coloane este asigurat de designul dispozitivului.

Eficiența separării este asigurată prin utilizarea coloanelor cromatografice de înaltă performanță.

O gamă liniară largă a semnalului de măsurare al detectorilor fără a comuta limita de măsurare, ceea ce face posibilă măsurarea vârfurilor atât la concentrații mari, cât și la cele scăzute cu o precizie ridicată.

Analiza cromatogramă a vitaminelor solubile în apă:

1 acid ascorbic (C),
2 acid nicotinic (niacina),
3 piridoxină (B6),
4 tiamină (B1),
5 nicotinamidă (B3),
6 acid folic (M),
7 cianocobalamină (B12),
8 riboflavină (B2).

Analiza cromatogramă a vitaminelor liposolubile:

1. Vitamina A
2. tokol
3. y-tocoferol
4. a-tocoferol (vitamina E)
5. luteină
6. zeaxantina
7. criptoxantina

8. a-caroten

În ciuda sensibilității ridicate a metodei HPLC, costul ridicat al instrumentelor, precum și durata analizei, ținând cont de timpul de pregătire a probei, limitează semnificativ utilizarea acesteia în laboratoarele analitice din țara noastră.

Cu un studiu profund al proceselor de producere a concentratului alimentar și de uscare a legumelor, la stabilirea valorii nutritive a produselor finite, precum și la controlul producției de produse fortificate, se determină conținutul următoarelor vitamine: vitamina C (acid ascorbic) , B1 (tiamina), B2 (riboflavina), PP (acid nicotinic), acid), caroten (provitamina A).

Pregătirea probelor pentru determinarea vitaminelor. Probele din produsele investigate sunt pregătite imediat înainte de analiză. La analizarea fructelor și legumelor proaspete, probele sunt tăiate din specimene individuale cu un cuțit din oțel inoxidabil sub formă de segmente longitudinale, care sunt tăiate rapid cu un cuțit (varză, ceapă) sau pe răzătoare (cartofi, rădăcinoase), amestecate bine. iar din masa omogenă rezultată se prelevează o probă de minimum 200 de probe.d, care se trimite imediat spre cercetare.

Boabele proaspete și mici fructe suculente nu pre-zdrobit; din proba medie se ia într-un borcan din locuri diferite mai multe fructe de pădure, fructe, amestecați-le și luați o probă pentru analiză. Oasele sunt îndepărtate din fructe și fructe de pădure cu sâmburi și apoi procedați așa cum este descris mai sus.

Fructele și legumele uscate de cel puțin 50 g se zdrobesc într-o moară de laborator sau cu foarfece, iar materialul zdrobit rezultat se toarnă într-un borcan cu dop măcinat. Se prelevează o probă din masa bine amestecată pentru analiză de laborator.

Concentratele alimentare în cantitate de cel puțin 200 g se zdrobesc într-o moară de laborator, se amestecă și se prelevează o probă pentru analiză.

Concentratele alimentare din lapte vitaminat (sub formă de brichete) de cel puțin 100 g se zdrobesc și se macină într-un mojar, se amestecă bine și se prelevează o probă pentru analiză.

Produsele sub formă de pulbere în cantitate de cel puțin 50 g sunt bine amestecate înainte de prelevarea probelor pentru cercetare.

În studiul produselor lichide, piure și paste, se prelevează probe pentru analiză după amestecarea temeinică a probei.

Determinarea vitaminei C

Vitamina C, acid l-ascorbic (C6H8O6), poate fi găsită în alimente sub două forme: redusă și oxidată (acid dehidroascorbic).

Metodele chimice cantitative pentru determinarea acidului ascorbic se bazează pe proprietățile sale reducătoare. Principalele metode de determinare a conținutului de acid ascorbic în medicamente și produse alimentare este titrarea indofenolului sau iodometrică. Reactivul indofenol utilizat - 2,6-diclorofenolindofenol, albastru, este redus în timpul titrarii acidului ascorbic și se transformă într-un compus leuco incolor. Sfârșitul reacției se apreciază după culoarea soluției de testat în roz, cauzată de un exces de indicator, care într-un mediu acid are o culoare roz. Conținutul de vitamina C din produs este determinat de cantitatea de indofenol utilizată pentru titrare. În titrarea iodometrică, se folosește o soluție de iodat de potasiu, amidonul servește ca indicator.

La determinarea vitaminei C în produsele alimentare se folosesc metode de titrare a indofenolului: arbitraj, folosind hidrogen sulfurat și control (simplificat). Alegerea metodei depinde de proprietățile produsului de testat și de scopul analizei.

Metoda de arbitrare (indofenolică folosind hidrogen sulfurat)

S-au cântărit 10-50 g de produs testat, în funcție de conținutul așteptat de vitamina C, luat cu o precizie de 0,01 g, cantitativ folosind o soluție 5% acid acetic se transferă într-un balon cotat (sau cilindru) și conținutul balonului este ajustat la un volum de 50-100 ml cu același acid. La analiza concentratelor și a legumelor și fructelor uscate, o porție de testare de 5–10 g este măcinată într-un mojar cu 5–10 g de pulbere de sticlă sau nisip de cuarț (prealabil curățat de impurități de fier, spălat și calcinat) și cu o cantitate de trei ori de o soluţie de 5% în raport cu porţiunea de testat.acid acetic. La măcinare, produsul analizat trebuie acoperit complet cu acid acetic. Amestecul măcinat cu grijă se lasă într-un mortar la infuzat timp de 10 minute, după care conținutul mortarului este turnat într-un balon cotat (sau cilindru) printr-o pâlnie, încercând să nu transfere sedimentul. Mortarul, pâlnia și bastonul se clătesc de câteva ori cu o soluție de acid acetic 5%, lăsând de fiecare dată sedimentul să se depună. Lichidele de spălare se toarnă în soluția de testare într-un balon cotat (sau cilindru) și se ajustează la un volum de 50-100 ml, în funcție de dimensiunea probei prelevate și de conținutul așteptat de vitamina C. Conținutul balonului cotat. sau cilindrul sunt bine amestecate și centrifugate sau filtrate rapid printr-un strat de vată.

10 ml din extractul de acid acetic rezultat se transferă cu o pipetă într-un balon, pahar sau tub de centrifugă cu o capacitate de 60-80 ml și se adaugă acolo 0,4 g de carbonat de calciu și 5 ml de soluție 5% pentru a crea pH-ul necesar și clarifică soluția.acetat de plumb, preparat într-o soluție de acid acetic 5%. Această operațiune trebuie efectuată cu atenție, deoarece adăugarea de carbonat de calciu este însoțită de spumare. Soluția este centrifugată rapid sau filtrată într-un balon uscat printr-un filtru mic pliat pregătit în prealabil.

Dacă filtratul este tulbure, atunci limpezirea se repetă pe o altă porțiune din extractul acetic al produsului analizat. Se adaugă la acesta mărită de 2, 3 sau 4 ori cantitatea de carbonat de calciu și soluție 5% de acetat de plumb, apoi se filtrează sau se centrifugează, așa cum este indicat mai sus. Un curent de hidrogen sulfurat obținut din aparatul Kipp prin acțiunea acidului clorhidric (1:1) sau sulfuric (1:3) diluat asupra sulfurei de fier este trecut printr-un filtrat transparent timp de 5-15 minute. Pentru precipitarea rapidă și completă a sulfurei de plumb, soluția se agită energic la începutul trecerii hidrogenului sulfurat. Trecerea hidrogenului sulfurat este finalizată atunci când stratul lichid de deasupra precipitatului negru de sulfură de plumb devine transparent. Soluția este filtrată printr-un filtru mic, uscat, fără cenușă, într-un balon uscat, iar hidrogenul sulfurat este îndepărtat complet din filtratul transparent printr-un curent de dioxid de carbon dintr-un cilindru Kipp sau un aparat încărcat cu marmură și acid clorhidric diluat (1: 1). Dioxidul de carbon poate fi înlocuit cu azot. Controlul pentru eliminarea completă a hidrogenului sulfurat se efectuează folosind hârtie de filtru umezită cu o soluție de acetat de plumb, care este adusă la gâtul conului, în absența hidrogenului sulfurat hârtia rămâne incoloră, aspectul unui pete galben-negru pe ea indică prezența hidrogenului sulfurat. Trecerea hidrogenului sulfurat și a gazului inert trebuie efectuată într-o hotă.

5 ml dintr-o soluție de acid acetic 80% și atât de multă apă distilată se toarnă mai întâi în balon cu o pipetă, astfel încât volumul total de lichid cu soluția de testat să fie de 15 ml. Apoi se pipetează 1 până la 10 ml din soluția limpezită de testare obținută după îndepărtarea hidrogenului sulfurat și se titratează dintr-o microbiuretă sau micropipetă cu 0,001 N. o soluție de 2,6-diclorfenolindofenol până când apare o culoare roz, care nu dispare în 30-60 de secunde. Titrarea se efectuează în picături cu agitare ușoară continuă a soluției titrate. Titrarea nu trebuie să dureze mai mult de 2 minute. După terminarea titrarii, este necesar, cu agitare puternică a soluției, să se adauge încă două picături dintr-o soluție de 2,6-diclorfenolindofenol; dacă culoarea soluției de testat crește, se poate presupune că sfârșitul reacției a fost găsit corect, caz în care volumul picăturilor adăugate ale indicatorului nu este luat în considerare. Atunci când se determină cantitatea de soluție de testare necesară pentru titrare, se presupune că nu se utilizează mai mult de 2 ml de 0,001 N pentru titrare. o soluție de 2,6-diclorfenolindofenol.

Determinarea vitaminei C se efectuează de cel puțin două ori, iar rezultatele titrarilor paralele nu trebuie să difere unele de altele cu mai mult de 0,04 ml. Conținutul de vitamina C se calculează ca medie aritmetică a 2-3 determinări paralele. La calcularea rezultatelor titrarii, trebuie introdusă o corecție pentru determinarea controlului: titrare 0,001 N. o soluție de 2,6-diclorfenolindofenol într-un amestec de 5 ml acid acetic 80% și 10 ml apă distilată până când apare o culoare roz. Această corecție, care este de obicei egală cu 0,06-0,08 ml pentru un volum de 15 ml, se scade din cantitatea totală de indicator utilizat pentru titrarea soluției de testat.

unde V este suma de 0,001 n. Soluție de 2,6-diclorfenolindofenol utilizată pentru titrare, ținând cont de corecția pentru titrarea de control, ml; K - factor de conversie la exact 0,001 n. o soluție de 2,6-diclorfenolindofenol; V1 este volumul la care a fost adusă proba când i s-a adăugat lichidul de extracție, ml; V2 este volumul lichidului analizat luat pentru titrare, ml; V3 este volumul soluției sau extractului inițial luat pentru analiză după adăugarea de acetat de plumb, ml; V4 este volumul soluției sau extractului inițial luat pentru analiză înainte de tratarea cu acetat de plumb; g - proba de produs, g; 0,088 - cantitatea de acid ascorbic corespunzătoare la 1 ml de exact 0,001 N. o soluție de 2,6-diclorfenolindofenol.

Determinarea vitaminei C nu trebuie efectuată în lumina directă a soarelui. Durata analizei nu trebuie să depășească 1 oră.

Preparare de 0,001 N. Soluție indicator de 2,6-diclorfenolindofenol

0,25-0,3 g indicator se agită într-un balon cotat de un litru cu 600 ml apă distilată timp de 1,5-2 ore (se poate lăsa să se dizolve peste noapte), se completează cu apă distilată până la 1 litru, se amestecă bine și se filtrează. . Soluția indicator este potrivită pentru analiză în 5-10 zile. Se pastreaza la intuneric, la loc racoros, de preferat la frigider.

Titrul indicatorului este verificat zilnic. Apariția unei nuanțe murdare la verificarea titrului indică inadecvarea soluției de indicator pentru analiză.

Determinarea titrului soluției indicator - 2,6-diclorfenolindofenol

Titrul soluției indicator poate fi setat în două moduri.

Prima cale. La 5 ml de soluție indicator se adaugă 2,5 ml dintr-o soluție saturată de oxalat de sodiu și se titrează cu hidroxid de sodiu 0,01 N dintr-un microburet. Soluție de sare Mohr preparată în 0,02 N. soluție de acid sulfuric până când culoarea albastră dispare și culoarea albăstruie-verzuie se schimbă în galben-chihlimbar. Titrul soluției de sare Mohr este stabilit la 0,01 N. soluție de permanganat de potasiu, iar titrul acestuia din urmă este de 0,01 n. soluție de oxalat de sodiu sau acid oxalic conform metodelor convenționale.

Soluția de sare Mohr rămâne potrivită pentru analiză timp de 2-3 luni atunci când este depozitată într-un loc întunecat și răcoros. Titrul soluției de sare Mohr se verifică cel puțin o dată pe lună.

A doua cale. Câteva cristale de acid ascorbic (aproximativ 1-1,5 mg) se dizolvă în 50 ml soluție de acid sulfuric 2%. 5 ml din această soluție, luați cu pipeta, se titrează cu o soluție de 2,6-diclorfenolindofenol dintr-o microbiuretă până când apare o culoare roz, care nu dispare în 3 minute. În paralel, același volum (5 ml) de soluție de acid ascorbic este titrat dintr-o altă microbiuretă cu exact 0,001 N. Soluția de iodat de potasiu (0,3568 g de KJO3, uscat timp de 2 ore la 105 ° C, se dizolvă în 1 l de apă distilată, soluția rezultată de KJO3 0,01 N este diluată de 10 ori într-un balon cotat cu apă distilată înainte de analiză). Titrarea se efectuează în prezența mai multor cristale (1-2 mg) de iodură de potasiu și 2-3 picături dintr-o soluție de amidon 1% până când apare o culoare albastră. Această titrare se efectuează în mod convenabil într-o ceașcă de porțelan.

Titrul unei soluții de 2,6-diclorfenolindofenol (x) în termeni de acid ascorbic se calculează prin formula

unde V este suma de 0,001 n. Soluție de KJO3 utilizată pentru titrarea soluției de acid ascorbic, ml; V1 - cantitatea de soluție de 2,6-diclorfenolindofenol utilizată pentru titrarea soluției de acid ascorbic, ml; 0,088 - cantitatea de acid ascorbic corespunzătoare la 1 ml de exact 0,001 N. soluție de 2,6-diclorfenolindofenol, mg.

Metodă simplificată de control pentru determinarea vitaminei C

Metoda este utilizată pentru analizele în masă ale fructelor și legumelor proaspete. Vă permite să determinați acidul ascorbic numai în formă redusă. Precizia metodei ±20%.

Metoda de determinare.În funcție de conținutul estimat de vitamina C din produs, o probă de 10-30 g este luată într-un pahar cântărit și turnată rapid în el cu 50 ml de soluție de acid clorhidric 4%; Probele umplute cu acid pot fi păstrate timp de 10-15 minute. Proba, împreună cu acidul, este transferată într-un mortar de porțelan. O parte din acidul din mortar se toarnă într-un balon cotat sau un cilindru cu o capacitate de 100 ml, iar proba cu o cantitate mică de acid rămas este bine triturată. Apoi, conținutul mortarului este transferat în același cilindru (sau balon) în care se află reziduul de acid clorhidric, spălând reziduul din mortarul de porțelan cu apă distilată în același balon cotat (sau cilindru). Soluția din balonul cotat a fost adusă până la semn cu apă distilată. Conținutul balonului este bine amestecat și filtrat rapid prin tifon sau apă. Din această soluție se prelevează o probă de titrare.

În cazul produselor greu de măcinat, la o probă într-un mortar de porțelan se adaugă 2-5 g de nisip de cuarț cântărit, bine spălat și calcinat sau pulbere de sticlă. După ce întregul conținut al mortarului a fost transferat într-un balon cotat (sau cilindru) și volumul extractului a fost adus la 100 ml, la extract se adaugă apă distilată în cantitate de 0,35 ml pentru fiecare gram de nisip luat. , iar tot lichidul se amestecă bine din nou.

La examinarea unui material lichid, acesta este diluat într-un cilindru cu o soluție de acid clorhidric 4% și apă distilată, astfel încât concentrația finală de acid clorhidric să fie de 2%. Acidul clorhidric poate fi înlocuit cu acid metafosforic sau oxalic. Pentru a obține un extract, utilizați o soluție de acid metafosforic 2% preparată în 2 N. soluție de acid sulfuric. În primul rând, se prepară o soluție de acid metafosforic 20% în 2 N. soluție de acid sulfuric, iar înainte de utilizare, această soluție este diluată de 10 ori cu 2 N. soluție de acid sulfuric.

O porțiune cântărită a produsului de testat este măcinată într-un mortar cu o soluție de acid metafosforic 2% (porțiunea cântărită trebuie acoperită cu acid), apoi este transferată într-un cilindru gradat. Mortarul se spală de mai multe ori cu o cantitate mică de soluție de acid metafosforic, aceste soluții se toarnă într-un cilindru, aducând conținutul la 100 ml. Vitamina C din soluția de acid metafosforic este stabilă timp de câteva ore. În absența acidului metafosforic, se poate folosi acidul oxalic. O porțiune din materialul de testat este măcinată rapid într-un mortar sub 20 ml de soluție de acid clorhidric 1% și apoi conținutul unui mortar de porțelan este transferat într-un cilindru gradat de 100 ml și volumul extractului este ajustat la 100 ml folosind un 1 % soluție de acid oxalic. După agitare, extractul este filtrat. Pentru titrare 0,001 N. cu o soluție de 2,6-diclorfenolindofenol nu se iau mai mult de 5 ml din extractul filtrat.

Titrarea și calculul conținutului de vitamina C (în miligrame per 100 g de produs) se efectuează în același mod ca și în metoda arbitrajului. Discrepanța dintre rezultatele analizelor a două probe paralele dintr-un produs nu trebuie să depășească 3-4%.

Metodă de determinare a vitaminei C în produsele uscate sulfatate

Metoda se bazează pe faptul că compușii sulfului (în mediu acid) sunt blocați de formaldehidă și nu interferează cu titrarea acidului ascorbic.

O portie din produsul uscat, luat in asa fel incat extractul sa contina 0,04-0,1 mg de vitamina C, se macina intr-un mojar cu o solutie 5% de acid metafosforic. Extractul este filtrat și, în cazul unui produs nesulfitat, titrat cu 0,001 N. Soluție de 2,6-diclorfenolindofenol.

La analiza unui produs uscat sulfitat, extractul de metafosfor rezultat este acidulat cu o soluție de acid sulfuric 50% și tratat cu formaldehidă, a cărei concentrație în soluția finală ar trebui să fie de 4%. Soluția este lăsată să stea timp de 8 minute și apoi titrată cu 0,001 N. Soluție de 2,6-diclorfenolindofenol ca mai sus.

Determinarea carotenului

Metodele de determinare a carotenului se bazează pe extracția acestuia din țesuturile plantelor cu benzină sau eter de petrol și eliberarea ulterioară din substanțele înrudite folosind cromatografia de adsorbție. Determinarea cantitativă a carotenului se realizează prin colorimetria soluțiilor obținute care conțin caroten. Au fost propuse trei versiuni ale metodei pentru determinarea carotenului.

Metoda de determinare. Prima varianta. Carotenul este extras din material vegetal după deshidratarea acestuia cu alcool sau acetonă, iar apoi substanțele care au trecut în extract sunt saponificate cu o soluție alcoolică de alcali. Se recuperează din nou carotenul, filtratul este trecut printr-o coloană de adsorbție, apoi se determină intensitatea culorii filtratului.

O porție din produsul zdrobit se ia într-o cantitate de la 1 la 50 g, în funcție de conținutul de caroten, și se macină într-un mortar de porțelan cu o cantitate mică de nisip spălat și calcinat sau sticlă zdrobită. La masa pisată se adaugă de cinci ori cantitatea de alcool sau acetonă într-un mojar, măcinată, apoi se adaugă 20-30 ml de benzină sau eter de petrol în porții. Amestecul se triturează, extractul se filtrează printr-un filtru de hârtie; extracția se repetă până când ultimele porțiuni ale extractului sunt incolore.

Filtratul se transferă într-o pâlnie de separare, se adaugă câțiva mililitri de apă distilată pentru a separa straturile: cel superior este benzină, cel inferior este alcool sau acetonă. Stratul de alcool sau acetonă se toarnă într-o altă pâlnie de separare și se spală de 2 ori cu benzină sau eter de petrol, adăugând aceste extracte la filtratul principal. Extractele combinate sunt transferate într-un balon și concentrate la un volum de 20-30 ml într-o baie de apă la o temperatură care nu depășește 50 ° C în vid. La extract se adaugă un volum aproximativ egal de alcali alcoolic 5% și se saponifică timp de 30 min-1 oră într-o baie de apă la reflux cu soluția în fierbere. Soluția saponificată se transferă într-o pâlnie de separare, se adaugă câțiva mililitri de apă, se agită și se separă stratul de benzină, care se spală apoi de 8-10 ori cu apă distilată. Extractul de benzină se transferă într-un balon și se usucă cu sulfat de sodiu anhidru cu agitare până când soluția devine tulbure, apoi se filtrează și se concentrează la un volum de 5-10 ml ca mai sus. Extractul condensat este trecut sub vid ușor printr-o coloană de adsorbție umplută cu oxid de magneziu sau alumină. Carotenul adsorbit pe coloană este eluat (dizolvat) cu eter sau benzină, trecându-le prin adsorbant până când lichidul care iese din coloană devine incolor.

Filtratul rezultat este colectat într-un balon cotat, volumul lichidului este adus la semn cu eter de petrol sau benzină și colorimetric într-un colorimetru Dubosque sau pe un colorimetru fotoelectric, folosind o soluție standard de azobenzen sau dicromat de potasiu pentru comparație.

A doua varianta.În primul rând, se efectuează saponificarea substanței de testat, apoi extracția carotenului, adsorbția și colorimetria. O porțiune din substanța zdrobită (de la 1 la 50 g), măcinată într-un mojar, se transferă într-un balon, se adaugă 20-40 ml de alcool alcalin 5%, se saponifică timp de 30 min-1 h, apoi se procedează în la fel ca în prima metodă.

A treia opțiune (simplificată). Cu această metodă, saponificarea este exclusă și toate celelalte etape de analiză sunt aceleași ca în prima metodă.

Extractele obţinute sunt spălate cu apă, uscate pe sulfat de sodiu anhidru, concentrate la volume mici, trecute printr-o coloană de adsorbant şi colorimetric.

La determinarea carotenului în morcovi, utilizarea unei coloane de adsorbție poate fi exclusă, deoarece morcovii conțin o cantitate mică de alți carotenoizi, care practic au un efect redus asupra rezultatului determinării. Analiza conform celei de-a treia variante se efectuează în acele cazuri în care rezultatele determinării carotenului coincid cu rezultatele obținute la lucrul conform primei variante. Determinarea carotenului în materialul vegetal uscat (legume, fructe, fructe de pădure și alte produse). O porțiune din substanța zdrobită se ia de la 2 la 10 g, carotenul este extras cu benzină sau eter de petrol fără pretratare cu alcool. Extractele obţinute se concentrează la un volum de 20-30 ml şi se saponifică cu o soluţie alcoolică de KOH. În plus, analiza este efectuată așa cum este indicat în prima variantă.

Calculul conținutului de caroten. Când se utilizează un colorimetru Dubosque și soluții standard de azobenzen sau dicromat de potasiu pentru colorimetrie, conținutul de caroten (x) în mg% din produsul studiat se calculează prin formula

unde K este factorul de conversie (cantitatea de caroten în miligrame corespunzătoare a 1 ml de soluție standard de azobenzen este 0,00235 sau soluția standard de bicromat de potasiu este 0,00208); H - indicarea scării soluției standard, mm; H1 - indicarea scalei soluției de testat, mm; g - proba din produsul studiat, g; V este volumul filtratului după adsorbția cromatografică, ml.

Când utilizați un electrofotocolorimetru, se utilizează următoarea formulă:

unde H2 este citirea scării reocordului pentru soluția standard; H1 - același lucru pentru soluția de testare. Restul notației este la fel ca în formula anterioară.

Prepararea soluțiilor standard

soluție de azobenzen. 14,5 mg de azobenzen cristalin pur chimic se dizolvă în 100 ml de alcool etilic 96%.

Soluție de bicromat de potasiu. 360 mg de bicromat de potasiu recristalizat de trei ori se dizolvă în 1 litru de apă distilată.

Pregătirea coloanei de adsorbție

Pentru coloana de adsorbție se folosește un tub de sticlă de 12–15 cm lungime, 1–1,5 cm diametru, îngustat în jos. Tubul este introdus prin dop într-un balon Bunsen. Vata de vata este plasata in partea inferioara a tubului de adsorbtie, iar apoi adsorbantul - oxid de magneziu sau oxid de aluminiu. Pentru aceasta, se prepară o suspensie din adsorbant și benzină sau eter de petrol. Gruelul se umple în coloană cu 4-6 cm și se spală cu porțiuni mici de solvent, evitând formarea bulelor de aer.

Determinarea vitaminei B1

Vitamina B1 (tiamină, aneurină) se găsește în produsele naturale atât în ​​formă liberă, cât și în formă legată. În primul caz, este tiamină liberă sau clorura acesteia - clorhidrat (C12H18O4Cl2); în stare legată, este ester pirofosfat de tiamină atașat la un purtător proteic, adică este coenzima carboxilazei. Metoda de determinare a vitaminei B1 se bazează pe capacitatea tiaminei de a fi oxidată la tiocrom de către fericianura de potasiu într-un mediu alcalin și pe proprietatea tiocromului rezultat de a da fluorescență albastră atunci când este iluminat cu raze ultraviolete. În timpul analizei, tiocromul este extras dintr-o soluție alcalină apoasă cu alcool izobutilic, butilic sau izoamil, separându-l astfel de impurități fluorescente și alte nedorite care sunt insolubile în acești alcooli.

Conținutul de tiamină din substanța de testat se determină prin compararea intensității fluorescenței testului și a soluțiilor standard cu ajutorul unui fluorometru. Metoda descrisă este aplicabilă pentru a determina nu numai tiamina liberă, ci și conținutul total de tiamină. În acest caz, forma legată de tiamină este mai întâi supusă scindării de către un preparat enzimatic care conține fosfatază.

Metoda fluorometrică pentru determinarea vitaminei B1. O porție cântărită de produs de testat în cantitate de 5-10 g, pusă într-un mojar, se măcina temeinic cu 10-25 ml de 0,1 N. soluție de acid sulfuric și transferată cantitativ în balon folosind aceeași soluție acidă; volumul total de lichid din balon a fost ajustat la aproximativ 75 ml. Balonul este închis cu un condensator de reflux (aer), scufundat într-o baie de apă clocotită, iar tiamina este extrasă timp de 45 de minute cu agitare periodică a conținutului. În cazul determinării tiaminei libere, extractul rezultat se răcește, se adaugă soluție de acetat de sodiu 2,5 molar la pH 5,0, se ajustează volumul la 100 ml cu apă distilată, se agită, se filtrează și se iau 10-20 ml soluție. pentru analize suplimentare.

La determinarea conținutului total de tiamină, extractul este răcit la 35-40 ° C și i se adaugă un preparat enzimatic, care, în cantitate de 0,03 g la 1 g de substanță uscată a probei, este măcinat preliminar în un mojar cu 2-3 ml de soluție de 2,5 molari de acetat de sodiu, apoi suspensia rezultată de medicament este transferată într-un balon cu 2-3 ml de soluție de acetat de sodiu și pH-ul extractului este ajustat la 5,0 cu același soluţie.

După adăugarea preparatului enzimatic, balonul cu extractul este închis cu un dop de bumbac și plasat timp de 12-15 ore într-un termostat la o temperatură de 37 ° C. Apoi conținutul balonului este răcit, volumul este ajustat la 100. ml cu apă distilată, se agită și se filtrează. Determinarea ulterioară a tiaminei libere și a conținutului său total se efectuează în același mod.

10-20 ml de filtrat se trec printr-o coloană de adsorbție pentru a adsorbi tiamina. În acest scop, se folosește un tub de sticlă (Fig. 25), având următoarele dimensiuni: în partea superioară - un diametru de 25 mm și o lungime de 90 mm, în partea din mijloc - un diametru de 7 mm și o lungime de 150 mm, iar în partea inferioară - un diametru de 5 mm (diametrul interior 0,03-1,0 mm) și 30 mm lungime. În partea de mijloc a tubului se pune vată de sticlă și deasupra se toarnă un adsorbant; pentru schimbătorul de cationi ODV-3, înălțimea coloanei trebuie să fie de aproximativ 8 cm.Coloana pregătită pentru lucru se fixează pe un dop într-un cilindru gradat cu o capacitate de 100 ml. Adsorbantul este spălat cu 10 ml de soluție de acid acetic 3% și soluția de testat este trecută prin coloană. Apoi adsorbantul se spală de 3 ori cu apă distilată, câte 10 ml fiecare, iar tiamina este eluată din adsorbant cu o soluție 25% de clorură de potasiu în 0,1 N încălzită până la punctul de fierbere. soluție de acid clorhidric în porții de 6-7 ml. Eluatul este colectat într-un cilindru gradat curat la un volum de 30 ml.

5 ml din soluția rezultată se pipetează în două pâlnii de separare mici; La prima pâlnie se adaugă 3 ml dintr-un amestec pentru oxidarea tiaminei (soluție 0,4% de fericianură de potasiu în soluție de hidroxid de sodiu 15%), se amestecă și se adaugă 12 ml alcool izobutilic (butil sau izoamil) pentru a extrage tiocromul format. . În a doua pâlnie (proba de control) se toarnă 3 ml soluție de hidroxid de sodiu 15%, se amestecă și se adaugă 12 ml alcool izobutilic. Ambele pâlnii se agită timp de 2 minute, amestecul este lăsat singur până la separarea completă, stratul inferior apos-alcalin este separat, iar stratul de alcool este filtrat printr-un filtru de hârtie, în care se introduc mai întâi 2-3 g de sulfat de sodiu anhidru. ; filtratul limpede este colectat într-o eprubetă uscată, de unde este transferat în cuva fluorometrului. O soluție de alcool poate fi, de asemenea, deshidratată cu sulfat de sodiu direct într-o pâlnie de separare; după adăugarea a aproximativ 2 g de reactiv, amestecul este agitat și soluția deshidratată este filtrată printr-un filtru de hârtie într-o eprubetă uscată.

O soluție de tiocrom dintr-o soluție standard de tiamină se prepară după cum urmează: se adaugă 1 ml dintr-o soluție care conține 1 μg de tiamină în două pâlnii de separare cu o pipetă gradată, se adaugă 4 ml dintr-o soluție de clorură de potasiu 25% și apoi Într-o pâlnie se adaugă 3 ml de amestec pentru oxidare, iar în a doua (proba martor) - 3 ml soluție de hidroxid de sodiu 15%. Se amestecă conținutul pâlniilor și se adaugă 12 ml de alcool izobutilic în fiecare pâlnie. Apoi procedați așa cum este descris mai sus.

Intensitatea fluorescenței soluțiilor de alcool preparate se determină pe un fluorometru (Fig. 26) cu filtre speciale de lumină folosind un galvanometru sensibil. Intensitatea fluorescenței se măsoară în patru soluții: la doi subiecți (oxidat și control neoxidat) și în două standard (oxidat și control neoxidat). În fiecare cuvă se adaugă aproximativ 8 ml de soluție de izobutil.

unde A este citirea fluorometrului pentru soluția oxidată testată; B este citirea fluorometrului pentru soluția neoxidată testată; A1 - citirea fluorometrului pentru soluție oxidată standard; B1 - citirea fluorometrului pentru o soluție standard neoxidată; g - proba din produsul studiat, g; V1 - volumul total al extractului, ml; V2 - volum de extract luat pentru adsorbție, ml; V3 - volumul total de eluat, ml; V4 este volumul de eluat luat pentru oxidare, ml; 1000 - factor de conversie, mg.

Prepararea reactivilor de bază și a preparatelor

1. Soluție standard de tiamină. 10 mg de clorură de tiamină cristalină sunt dizolvate în 0,001 N. Soluție alcoolică 25% de acid clorhidric într-un balon cotat cu o capacitate de 100 ml. Soluția nu se schimbă în 1-1,5 luni când este păstrată într-o sticlă întunecată într-un loc răcoros. Pentru a prepara o soluție de lucru, se adaugă 1 ml din soluția standard într-un balon de 100 ml și se diluează cu apă distilată până la semn; soluția se prepară înainte de analiză, conține 1 μg de tiamină în 1 ml.

2. Soluție de acetat de sodiu 2,5 molară. 340 g de acetat de sodiu se dizolvă în apă distilată și se reglează volumul la 1 litru.

3. Soluție de clorură de potasiu 25%. Se dizolvă 250 g clorură de potasiu în apă distilată, se adaugă 8,5 ml acid clorhidric concentrat și se reglează volumul la 1 litru cu apă.

4. Amestecul de oxidare - soluție de fericianură de potasiu 0,04% în soluție de hidroxid de sodiu 15%. Amestecul se prepară înainte de analiză prin amestecarea a 4 ml de soluție de fericianură de potasiu 1% proaspăt preparată cu 96 ml de soluție de hidroxid de sodiu 15%.

5. Preparate enzimatice din Penicillium notatum sau din Aspergillus oriza.

6. Schimbător de cationi adsorbant SDV-3. Schimbătorul de cationi este zdrobit la o dimensiune a particulei de 0,5 până la 0,13 mm în cantitate de 70% și mai puțin de 0,13 mm - 30%. Pentru a scăpa de impuritățile de fier, se tratează de trei ori cu acid clorhidric 10% de fiecare dată timp de 2 ore la 40-60 ° C, se spală cu apă distilată până când reacția la clor dispare și se activează prin uscare la o temperatură care să nu depășească 60- 70°C.

Determinarea vitaminei B2

Vitamina B2 (riboflavina) C17H20N4O6 se găsește în produsele naturale atât în ​​stare liberă, cât și în stare legată. Sunt cunoscute trei forme de riboflavină legată: mononucleotidă de flavină, dinucleotidă de flavină adenină și o a treia formă care este strâns legată de o proteină.

Metoda de determinare a vitaminei B2 se bazează pe proprietate solutii apoase riboflavina pentru a da o fluorescență galben-verzuie intensă în lumina ultravioletă. La determinarea conținutului total de vitamina B2 prin metoda fluorimetrică, formele legate de riboflavină sunt transferate în stare liberă prin hidroliză enzimatică și acidă. În timpul analizei, extractele din produse naturale sunt tratate secvenţial cu permanganat şi hidrosulfit de sodiu pentru a reduce cantitatea de impurităţi fluorescente. Apoi, într-o probă separată, se determină intensitatea fluorescenței nespecifice, care depinde doar de impuritățile rămase; în această probă, riboflavina este redusă preliminar la o leucoformă incoloră și astfel fluorescența sa este „stinsă”. La calcularea conținutului de vitamina B2 din produsul de testat, datele privind fluorescența nespecifică sunt introduse ca o modificare a rezultatului determinării fluorescenței totale.

Determinarea conținutului total de vitamina B2. O probă de produs (5-10 g) este măcinată cu grijă într-un mojar cu o cantitate mică de tampon fosfat (pH 7,8-8,0), apoi transferată într-un balon folosind aceeași soluție tampon, aducând diluția totală la un raport. de 1:15 sau 1:douăzeci. Balonul cu conținutul se încălzește într-o baie de apă clocotită timp de 45 de minute cu agitare frecventă, se răcește la 30°C, se verifică valoarea pH-ului și, în cazul trecerii la zona acidă, pH-ul este din nou ajustat la 7,8- 8,0 prin adăugarea unui tampon fosfat. La extract se adaugă un preparat enzimatic (tripsină, pancreatină sau un preparat din penicillium notatum) în cantitate de 30 mg la 1 g de substanță uscată a probei, care se măcina preliminar într-un mojar cu 2-3 ml de fosfat. tampon sau acetat de sodiu. Extractul se ține într-un termostat la 37 ° C timp de 12-20 ore; în timpul hidrolizei enzimatice, forma riboflavinei, care este ferm legată de proteină, este scindată. După răcire, extractul este diluat cu apă distilată până la o diluție totală de 1:25 sau 1:30 și filtrat printr-un filtru pliat.

Se adaugă 5 ml de filtrat într-un balon mic, se adaugă 5 ml de acid tricloracetic 20% și se încălzește într-o baie de apă clocotită timp de 10 minute. Soluția este răcită și se adaugă 1/4 volum dintr-o soluție de fosfat dipotasiu 4M pentru a ajusta pH-ul la 6,0. Apoi, o soluție de 4% de permanganat este adăugată prin picurare la extract pentru a oxida impuritățile fluorescente; Soluția de permanganat se adaugă de obicei într-o cantitate de 0,2-0,4 ml până când apare o culoare roșiatică persistentă a extractului.

Extractul tratat cu permanganat este lăsat singur timp de 10 minute, apoi se adaugă în picătură o soluție de peroxid de hidrogen 3% până când culoarea dispare; în timp ce se adaugă peroxid de hidrogen, extractul este agitat continuu. La extract se adaugă 0,2 ml de soluție de lucru de clorură de staniu și 0,1 ml de soluție de hidrosulfit de sodiu 2,5% pentru a restabili impuritățile fluorescente. Extractul este agitat energic timp de 20 de minute pentru a transforma riboflavina redusă reversibil în forma fluorescentă oxidată. Volumul extractului este ajustat cu apă la 15 ml, în prezența turbidității, soluția este filtrată. În extractul preparat, intensitatea fluorescenței este determinată în comparație cu intensitatea fluorescenței soluției standard de lucru de riboflavină. Pentru a face acest lucru, extractul și soluția de lucru de riboflavină (vezi mai jos „pregătirea reactivilor”) se toarnă în 8-10 ml în cuve de fluorometru și se măsoară intensitatea fluorescenței pe scara galvanometrului. Apoi, în ambele cuve se adaugă 0,1 g de carbonat acid de sodiu și 0,1 g de hidrosulfit, se amestecă conținutul cuvelor și se măsoară din nou intensitatea fluorescenței. Într-o soluție standard de riboflavină, fluorescența este stinsă la zero, în timp ce în extractul studiat rămâne o mică fluorescență, care se datorează prezenței impurităților fluorescente care nu sunt complet îndepărtate atunci când extractul este tratat cu reactivii de mai sus. Pentru a asigura stingerea completă a fluorescenței riboflavinei, se adaugă 0,1 g de hidrosulfit la probe și se măsoară din nou intensitatea fluorescenței. Cu golire completă, citirile galvanometrului nu ar trebui să se schimbe. Conținutul de riboflavină în micrograme per 1 g de substanțe (x) se calculează prin formula

unde A este citirea fluorometrului pentru soluția de testat (prima citire); B - citirea fluorometrului pentru soluția de testat după stingere (a doua citire); C - citirea fluorometrului pentru o soluție standard care conține 0,4 μg de riboflavină în 1 ml; 0,4 - concentrația soluției standard, μg; g - proba de produs, g; V - volumul total de diluție, ml.

Prepararea reactivilor de bază

1. Soluție standard de riboflavină. O porție cântărită de riboflavină în cantitate de 10 mg se dizolvă în apă distilată într-un balon cotat de 250 ml. 1 ml din această soluție conține 40 micrograme de riboflavină. Soluția nu se schimbă în decurs de 1 lună când este păstrată la rece și la întuneric. Înainte de determinare, se prepară o soluție de lucru, pentru care la 100 ml se adaugă 37,5 ml dintr-o soluție de acid tricloracetic 20%, 25 ml dintr-o soluție 4-molară de fosfat dibazic de potasiu, 1 ml dintr-o soluție standard de riboflavină. balon cotat și diluat cu apă până la semn. 1 ml de soluție de lucru conține 0,4 µg de riboflavină.

2. Amestecul tampon fosfat (pH 7,8-8,0). Se prepară o soluție molară de fosfat de sodiu 1/15 (11,876 g Na2HPO4-2H2O recristalizat în 1 l apă) și o soluție molară 1/15 de fosfat dipotasic (9,078 g KH2PO4 recristalizat în 1 l apă). Se amestecă 9,5 părți din prima soluție și 0,5 părți din a doua soluție.

3. Soluție de clorură stanoasă. 10 g de clorură de staniu (SnCl2) se dizolvă în 25 ml de acid clorhidric concentrat. Soluția stoc rezultată este depozitată într-o sticlă întunecată cu un dop măcinat la temperatura camerei. Înainte de fiecare determinare, se prepară o soluție de lucru prin diluarea a 0,2 ml din soluția stoc cu apă la 100 ml.

4. Soluție de hidrosulfit de sodiu. 0,25 g Na2S2O4-2H2O se dizolvă în 10 ml soluție de bicarbonat de sodiu 2%. Soluția se prepară înainte de utilizare.

5. Preparate enzimatice: tripsina, pancreatina sau un preparat enzimatic din Penicillium notatum.

Determinarea acidului nicotinic (vitamina PP)

În produsele naturale, vitamina PP (acidul nicotinic) apare sub formă liberă și legată: ca acid nicotinic C6H5O2N sau amida sa C6H6ON2. Pentru a determina acidul nicotinic, care se bazează pe interacțiunea acidului nicotinic cu bromura de tiocianat sau cian. Compusul rezultat în prezența aminelor aromatice (anilină, metol) într-un mediu neutru sau ușor acid dă un derivat de culoare galbenă. Intensitatea culorii soluțiilor de testat este direct proporțională cu cantitatea de acid nicotinic și se măsoară colorimetric.

Metoda de determinare. O porțiune din produsul de testat zdrobit se ia în cantitate de 5 g, se transferă într-un balon cotat cu o capacitate de 100 ml și 75 ml de 2-n. soluție de acid sulfuric, spălând pâlnia și gâtul balonului cu o soluție din acest acid. Conținutul balonului se agită energic. Balonul se pune într-o baie de apă clocotită și conținutul este încălzit timp de 90 de minute cu agitare ocazională. După aceea, balonul este răcit, amestecul este adus la semn cu apă distilată, amestecat bine și filtrat printr-un filtru de hârtie. (Hidrolizatul rezultat poate fi lăsat la rece până a doua zi).

Se iau 25 ml de filtrat, se pun într-un balon cotat de 50 ml, se adaugă o picătură de fenolftaleină și se adaugă 10 n. soluție de hidroxid de sodiu până când se obține o culoare roz deschis (aproximativ 4 ml). Excesul de alcali se elimină cu 1-2 picături de 5 N. acid sulfuric (până când culoarea roz dispare). Dacă soluția este încălzită, se răcește, apoi se adaugă 2 ml de soluție de sulfat de zinc și 1-2 picături de alcool izoamilic (pentru a elimina spuma). Apoi, în timp ce amestecați conținutul balonului, adăugați în picături o soluție de 4 N. sodă caustică până când se formează un precipitat gros de hidroxid de zinc. Precipitarea este completată prin adăugarea unei soluții de 1 N. sodă caustică până când apare o culoare roz pal. Adăugați 1-2 picături de 5N în balon. acid sulfuric (până dispare culoarea roz) și lăsați să stea 10 minute amestecând ocazional. Amestecul din balon se aduce la 50 ml cu apă distilată, se agită și se filtrează printr-o hârtie de filtru. Filtratul rezultat este folosit pentru reacții de culoare, în acest scop se folosesc eprubete speciale cu dopuri măcinate, care se introduc într-un trepied rotund. În același timp, atunci când se efectuează reacții de culoare ale soluțiilor de testat, operațiuni similare se repetă cu soluții standard de acid nicotinic. În același timp, au pus control asupra reactivilor la soluțiile standard și asupra aminelor subiecților.

Lista soluțiilor utilizate în analiză este prezentată în tabel. cinci.

Pentru a efectua reacții de culoare, se toarnă 5 ml dintr-o soluție standard de acid nicotinic în două eprubete (determinări paralele) și se toarnă 5 ml apă distilată în două eprubete, apoi se toarnă 5 ml din soluția de testare în alte patru. eprubete. Toate eprubetele așezate într-un trepied sunt scufundate într-o baie la o temperatură de 50 ° C timp de 5 minute, după care se adaugă 2 ml de soluție de bromură de rodan sub tracțiune de biuretă conform tabelului. 5 (excluzând controlul pentru amine). Lichidul din tuburi se amestecă și se lasă într-o baie timp de 10 minute la o temperatură de 50 ° C. Tuburile se răcesc în apă rece la temperatura camerei, se aseaza intr-o cutie de lemn cu cuiburi pentru eprubete, se inchide cutia cu un capac si se lasa 10 minute la loc intunecat. În tuburi se adaugă 3 ml de soluție de metol, se amestecă conținutul și se lasă într-o cutie închisă timp de 1 oră într-un loc întunecat.

După o oră, soluțiile rezultate sunt colorimetrice pe un colorimetru fotoelectric cu filtru de lumină albastră într-o cuvă cu grosimea stratului de 10 mm. Conținutul de acid nicotinic se calculează după cum urmează. Valorile densității optice ale soluțiilor de test (n) și standard (n1) sunt stabilite, ținând cont de corecțiile pentru control

unde A este densitatea optică a soluției de testat; A1 - la fel, standard; B este densitatea optică a soluției de control pentru amine; B1 - densitatea optică a soluției de control pentru reactivi.

În viitor, pentru a calcula conținutul de acid nicotinic în mg% (x), utilizați următoarea formulă:

unde G este conținutul de acid nicotinic în 1 ml de soluție standard, mgc; n este densitatea optică a soluției de testat, ținând cont de soluția de control; n1 este densitatea optică a soluției etalon, ținând cont de soluția de control; g - proba, g; V este volumul total al hidrolizatului, ml; V1 este volumul de hidrolizat luat pentru curățare cu sulfat de zinc, ml; V2 este volumul final al soluției după adăugarea de sulfat de zinc, ml.

Prepararea reactivilor

1. Soluție standard de acid nicotinic (bazic). 500 mg de acid nicotinic se pun într-un balon de 500 ml, 5 ml de 10 N. H2SO4 și, când cristalele se dizolvă, se completează până la semn cu apă distilată. 1 ml din această soluție conține 1000 micrograme de acid nicotinic. Soluția este potrivită timp de 1 an când este păstrată la rece.

2. Soluție standard - de lucru. Se diluează 5 ml din soluția standard stoc la 1 litru cu apă distilată. 1 ml din această soluție conține 5 μg acid nicotinic (soluția se prepară zilnic).

3. Soluție de Rodanbromur (se prepară înainte de utilizare). Apa de brom se prepară prin adăugarea de brom la apa distilată până când picăturile de brom încetează să se dizolve. La apa cu brom răcită pe gheață, luată în cantitatea necesară analizei, se adaugă prin picurare o soluție 10% de tiocianat de potasiu sau de amoniu până la o culoare galben deschis și apoi o soluție de 1% din aceiași reactivi până când apa de brom este complet decolorată. Se adaugă treptat, în porții mici, câte 20-50 mg de carbonat de calciu până la încetarea eliberării bulelor și a formării turbidității. Soluția este filtrată într-o sticlă de sticlă închisă la culoare cu dop măcinat și depozitată la rece.

4. Soluție de Metol 8% (se prepară înainte de utilizare). 8 g de metol recristalizat se dizolvă în 0,5 N. Soluție de HCI și transferată într-un cilindru gradat sau balon cu o capacitate de 100 ml, soluția este adusă la semnul de 0,5 N. Acid clorhidric.

Recristalizarea metolului. 500 ml 0,1 N H2SO4 se încălzește până la fierbere, se adaugă la soluția de fierbere 100 g de metol, amestecat în prealabil cu 0,7 g de NaHS03; amestecul se încălzește până la fierbere. Dacă soluția este puternic colorată, adăugați 10 g cărbune activ. Amestecul se transferă imediat într-o pâlnie Buchner preîncălzită și se filtrează. Filtratul se transferă într-un pahar, se adaugă 0,3 g bisulfit de sodiu și 700 ml alcool 96%; totul se amestecă, se scufundă în apă cu gheață și se lasă într-un loc întunecat câteva ore. Cristalele de metol precipitate sunt filtrate printr-o pâlnie Buechner, spălate pe pâlnie cu alcool 96% dintr-o sticlă de pulverizare și uscate la aer la întuneric. Metolul recristalizat este depozitat într-o sticlă de sticlă închisă la culoare, cu dop măcinat, într-un loc întunecat.