Kantitatif. Tıbbi müstahzarlarda vitaminlerin kalitatif tayini C vitamininin kalitatif tayini prensibi

GOST R 54635-2011

H59 Grubu

RUSYA FEDERASYONUNUN ULUSAL STANDARDI

FONKSİYONEL GIDA ÜRÜNLERİ

A vitamini belirleme yöntemi

fonksiyonel gıda ürünleri. A vitamini belirleme yöntemi

OKS 67.050
OKSTU 9109

Giriş tarihi 2013-01-01

Önsöz

Standardizasyonun amaç ve ilkeleri Rusya Federasyonu 27 Aralık 2002 tarihli N 184-FZ "Teknik Düzenleme Üzerine" Federal Yasası ve Rusya Federasyonu'nun ulusal standartlarının uygulanmasına ilişkin kurallar - GOST R 1.0-2004 "Rusya Federasyonu'nda Standardizasyon. Temel hükümler"

Standart hakkında

1 Rus Akademisi Kurumu Tarafından Geliştirildi Tıp Bilimleri Beslenme Araştırma Enstitüsü

2 Standardizasyon Teknik Komitesi tarafından TANITILDI TC 36 "Fonksiyonel Gıdalar"

3 Federal Teknik Düzenleme ve Metroloji Ajansı'nın 12 Aralık 2011 tarihli N 784-st Emriyle ONAYLANMIŞ VE YÜRÜRLÜĞE GEÇİLMİŞTİR

4 İLK ​​KEZ TANITILDI


Bu standarttaki değişikliklerle ilgili bilgiler, yıllık olarak yayınlanan "Ulusal Standartlar" bilgi endeksinde ve değişiklik ve değişiklik metinleri - aylık yayınlanan bilgi endekslerinde "Ulusal Standartlar" da yayınlanır. Bu standardın revize edilmesi (değiştirilmesi) veya iptal edilmesi durumunda, aylık yayınlanan "Ulusal Standartlar" bilgi endeksinde ilgili bir bildirim yayınlanacaktır. İlgili bilgi, bildirim ve metinler de bilgi sistemi genel kullanım - İnternetteki Federal Teknik Düzenleme ve Metroloji Ajansı'nın resmi web sitesinde

1 kullanım alanı

1 kullanım alanı

Bu standart, fonksiyonel gıdalar için geçerlidir ve yüksek performanslı sıvı kromatografisi (bundan sonra HPLC olarak anılacaktır) kullanılarak retinol, retinol asetat, retinol palmitat formundaki A vitamininin kütle fraksiyonunu belirlemek için bir yöntem oluşturur.

A vitamininin kütle fraksiyonunun ölçüm aralığı 0,5 ila 10,0 ppm'dir.

Not - Bu standart, ölçüm aralığına tabi gıda maddelerine uygulanabilir.

2 Normatif referanslar

Bu standart, aşağıdaki standartlara normatif referanslar kullanır:

GOST R 8.563-2009 Ölçümlerin tekdüzeliğini sağlamak için devlet sistemi. Ölçüm teknikleri (yöntemleri)

GOST R 12.1.019-2009 İş güvenliği standartları sistemi. Elektrik güvenliği. Genel gereksinimler ve koruma türlerinin isimlendirilmesi

GOST R ISO 5725-6-2002 Ölçüm yöntemleri ve sonuçlarının doğruluğu (doğruluğu ve kesinliği). Bölüm 6. Pratikte kesinlik değerlerinin kullanılması

GOST R ISO/IEC 17025-2006 * Test ve kalibrasyon laboratuvarlarının yeterliliği için genel şartlar
________________
GOST ISO/IEC 17025-2009

GOST R 51652-2000 Gıda hammaddelerinden rektifiye edilmiş etil alkol. Özellikler

GOST R 52062-2003 Bitkisel yağlar. Kabul kuralları ve numune alma yöntemleri

GOST R 52179-2003 Margarinler, yemek pişirme, şekerleme, fırıncılık ve süt endüstrisi için yağlar. Kabul kuralları ve kontrol yöntemleri

GOST R 52349-2005 Gıda ürünleri. Fonksiyonel gıda ürünleri. Terimler ve tanımlar

GOST R 53228-2008 Otomatik olmayan eylem ölçekleri. Bölüm 1. Metrolojik ve teknik gereksinimler. testler

GOST 12.1.004-91 İş güvenliği standartları sistemi. Yangın Güvenliği. Genel Gereksinimler

GOST 12.1.005-88 İş güvenliği standartları sistemi. Çalışma alanının havası için genel sıhhi ve hijyenik gereklilikler

GOST 12.1.007-76 İş güvenliği standartları sistemi. Zararlı maddeler. sınıflandırma ve Genel Gereksinimler güvenlik

GOST 427-75 Metal cetvelleri ölçmek. Özellikler

GOST 1770-74 (ISO 1042-83, ISO 4788-80) Laboratuvar cam malzemelerinin ölçülmesi. Silindirler, beherler, şişeler, test tüpleri. Genel Özellikler

GOST 4166-76 Reaktifler. Sodyum sülfat. Özellikler

GOST 4517-87 Reaktifleri. Analizde kullanılan yardımcı reaktiflerin ve çözeltilerin hazırlanmasına yönelik yöntemler

GOST 6709-72 Damıtılmış su. Özellikler

GOST 9293-74 Gaz ve sıvı nitrojen. Özellikler

GOST 12026-76 Laboratuvar filtre kağıdı. Özellikler

GOST 13496.0-80 * Bileşik yem, hammaddeler. Örnekleme yöntemleri
________________
* Belge, Rusya Federasyonu topraklarında geçerli değildir. GOST R ISO 6497-2011, metinde bundan sonra geçerlidir. - Veritabanı üreticisinin notu.

GOST 14919-83 Ev tipi elektrikli sobalar, elektrikli sobalar ve fırınlar. Genel Özellikler

GOST 16317-87 Ev tipi elektrikli soğutma cihazları. Genel Özellikler

GOST 18300-87 Rektifiye teknik etil alkol. Özellikler

GOST 19627-74 Hidrokinon (paradioksibenzen). Özellikler

GOST 24363-80 Reaktifleri. Potasyum hidroksit. Özellikler

GOST 25336-82 Laboratuar kapkacakları ve ekipmanları. Türler, temel parametreler ve boyutlar

GOST 26809-86 Süt ve süt ürünleri. Kabul kuralları, numune alma yöntemleri ve kanalizasyon numunesi hazırlama

GOST 27025-86 Reaktifleri. Test için genel kurallar

GOST 28498-90 Sıvı cam termometreler. Genel teknik gereksinimler. Test yöntemleri

GOST 29227-91 (ISO 835-1-81) Laboratuvar cam eşyaları. Pipetler mezun oldu. Bölüm 1. Genel gereksinimler

Not - Bu standardı kullanırken, kamu bilgi sistemindeki referans standartların geçerliliğini - Federal Teknik Düzenleme ve Metroloji Ajansı'nın resmi web sitesinde İnternet'te veya yıllık olarak yayınlanan "Ulusal Standartlar" bilgi endeksine göre kontrol etmeniz önerilir. Cari yılın 1 Ocak tarihi itibariyle yayınlanan ve cari yılda yayınlanan ilgili aylık yayınlanan bilgi işaretlerine göre. Referans standardı değiştirilirse (değiştirilirse), bu standardı kullanırken, değiştirme (değiştirilmiş) standart tarafından yönlendirilmelisiniz. Atıf yapılan standart değiştirilmeden iptal edilirse, bu referansın etkilenmediği ölçüde ona atıfta bulunulan hüküm uygulanır.

3 Terimler ve tanımlar

Bu standart, GOST R 52349'a göre terimleri ve uygun tanımla aşağıdaki terimi kullanır:

4 Yöntemin özü

Analiz edilen numuneden elde edilen ekstrakttaki A vitamininin belirlenmesi, HPLC ayrımı ve ardından fotometrik veya florimetrik algılama ile gerçekleştirilir. Gerekirse, analiz edilen numunenin alkali hidrolizinden sonra ekstrakt elde edilir.

Kantitatif analiz, retinol, retinol asetat, retinol palmitat tepe noktalarının alanı veya yüksekliği kullanılarak bir harici standart yöntemiyle gerçekleştirilir.

5 Güvenlik gereksinimleri

5.1 Koşullar Güvenli davranışİşler

Testler yapılırken, GOST 12.1.004, elektrik güvenliği - GOST R 12.1.019, reaktiflerle çalışırken güvenlik önlemleri - GOST 12.1.007 tarafından belirlenen yangın güvenliği gereksinimlerine ve ayrıca belirtilen gereksinimlere uymak gerekir. spektrofotometre, kromatograf ve diğer cihaz ve ekipman için teknik belgeler.

Testlerin yapıldığı oda, besleme ve egzoz havalandırması ile donatılmalıdır. Çalışma alanının havasındaki zararlı maddelerin içeriğinin kontrolü GOST 12.1.005 gerekliliklerine uygun olarak yapılmalıdır.

Gaz tüpleriyle çalışırken, yönlendirilmeniz gerekir.

5.2 Operatör kalifikasyon gereksinimleri

Mesleklerde yüksek veya orta uzmanlık eğitimi almış kişilerin testler yapmasına ve sonuçları işlemesine izin verilir: kimyager, kimya mühendisi, teknisyen, laboratuvar asistanı, kimya laboratuvarında deneyimli. Yöntemin laboratuvarda ilk kullanımı, kalifiye bir HPLC teknisyeninin gözetimi altında yapılmalıdır.

6 Test koşulları

6.1 Genel koşullar

Testler normal laboratuvar koşulları altında gerçekleştirilir: sıcaklık çevre- (25±5) °С; bağıl nem- (65±15)%; AC frekansı - (50±5) Hz; şebeke voltajı - (220±10) V.

Çözümleri hazırlarken ve saklarken GOST 27025, GOST 4517 gerekliliklerine uyulmalıdır.

A vitamininin yok edilmesini önlemek için, test materyali ve standartlarının analizi, numuneleri doğrudan güneş ışığından koruyan bir antioksidan (askorbik asit, hidrokinon, pirogallol) varlığında gerçekleştirilir.

6.2 Fotometrik ölçümler için koşullar

Fotometrik ölçümler için koşullar Tablo 1'de verilmiştir.


Tablo 1 - Fotometrik ölçümler için koşullar

6.3 Kromatografik analiz için koşullar

Kromatografik kolon sıcaklığı: 25 °C veya ortam sıcaklığı.

Mobil faz akış hızı: 0,7 cm/dak (kılavuz değer).

Enjekte edilen numunenin hacmi: 50 10 cm.

Mobil faz: 50:45:5 hacim oranında bir asetonitril, metil alkol, metilen klorür karışımı.

Kromatografik ayırma için optimal koşulların kontrol edilmesi, her maddenin kütle konsantrasyonu en az 0,4 µg/cm olan karışık bir retinol, retinol asetat, retinol palmitat çözeltisinin kromatografik analizi ile gerçekleştirilir. Bu karışık çözelti, 8.1.2'ye göre çalışma çözeltileri hazırlama prosedürüne benzer şekilde retinol, retinol asetat, retinol palmitat stok çözeltilerinden hazırlanır. Retinol, retinol asetat, retinol palmitatın bitişik piklerinin ayırma katsayısı en az 1.3 ise, kromatografik ayırmanın etkinliği tatmin edici olarak kabul edilir. Aksi takdirde, gerekli ayırma verimini elde etmek için mobil faz akış hızı deneysel olarak seçilir veya diğer kolonlar test edilir.

7 Ölçüm aletleri, yardımcı cihazlar, reaktifler ve malzemeler

7.1 A vitamininin kütle fraksiyonunun içeriğini belirlemek için aşağıdaki ölçüm aletleri, yardımcı ekipman ve malzemeler kullanılır:

- GOST R 53228'e uygun teraziler, ± 0.1 mg'lık izin verilen mutlak hata sınırları ile tartım doğruluğu sağlar;

- 190 ila 1100 nm spektral aralığı olan bir spektrofotometre, iletim ölçümlerindeki ana hata %1'den fazla değildir;

- optik yol uzunluğu 1 cm olan kuvars küvetler;

- aşağıdaki unsurları içeren yüksek performanslı sıvı kromatografı: pompa; örnekleme cihazı; florimetrik dedektör (dalga boyları, nm: uyarma - 325 nm, emisyon - 470 nm) veya spektrofotometrik dedektör (algılama dalga boyu - 325 nm) gürültü seviyesi 10 birim optik yoğunluktan fazla olmayan ve bağıl ölçüm hatası 10'dan fazla olmayan %; 0.30-0.46 cm çapında, 10-25 cm uzunluğunda, partikül boyutu 5 um olan oktadesil silika jel ile doldurulmuş HPLC için bir analitik kolon; bir kayıt cihazı - bir tepe noktasının alanını (veya yüksekliğini) %1'den fazla olmayan bir hatayla ölçmeye izin veren bir entegratör veya bir kaydedici; elde edilen ölçüm sonuçlarını işlemek için yazılım;

- mobil fazı ve analiz edilen çözümleri filtrelemek için filtreler (örneğin, 0,45 μm gözenek boyutuna sahip);

- numuneleri sıvı kromatografa sokmak için 0.1 cm3 kapasiteli mikro şırınga tipi "Hamilton";

- GOST 29227'ye göre 1(2.3)-1(2)-1-0.5(1.2.5.10.25) dereceli pipetler veya ± %1'den fazla olmayan nispi doz hatası olan benzer veya değişken doz hacimlerine sahip otomatik dağıtıcılar;

- GOST 1770'e göre 1-50(100.250)-1(2) silindirleri;

- GOST 1770'e göre hacimsel şişeler 2-50(100,250,500,1000)-2;

- GOST 1770'e göre P-2-5(10.15.20.25)-0.1(0.2)XC zemin durduruculu ölçüm tüpleri;

- GOST 25336 uyarınca В(Н)-1-50(100,150,250)ТХС gözlükleri;

- GOST 25336'ya göre yuvarlak dipli şişeler K-1-100(250.500)-29/32TS;

- GOST 25336'ya göre V-36(56)-80XC, V-75-110(140)XC, V-100-150XC hunileri;

- GOST 427'ye göre bölme fiyatı 1 mm olan metal bir cetvel;

- dakikada 100-150 titreşimlik bir platform titreşimi frekans aralığına sahip şişeler ve test tüpleri için bir çalkalayıcı;

- 4-6 bin rpm sağlayan santrifüj;

- sıcaklığı 40 ° ila 100 ° C arasında tutan bir ısıtma regülatörlü su banyosu;

- çalışma hacmi en az 2 dm3 olan ultrasonik laboratuvar banyosu;

- 7 mm Hg çalışma basıncı aralığına sahip döner buharlaştırıcı. 760 mm Hg'ye kadar (9 10 Pa'dan 10 10 Pa'ya kadar) veya GOST 25336'ya göre su jeti pompası;

- GOST 25336'ya göre cam laboratuvar buzdolapları;

- GOST 28498'e göre 1 °C'lik bir ölçek bölümü ile 0 °C ila 100 °C arasında bir sıcaklık aralığına sahip laboratuvar sıvı termometresi;

- GOST 9293, özel saflık derecesi ve aşağıdakilere göre gaz halinde nitrojen içeren bir silindir;

- GOST 12026'ya göre laboratuvar filtre kağıdı;

- GOST 14919'a göre kapalı tip elektrikli soba;

- elektrikli laboratuvar değirmeni;

- GOST 16317'ye göre ev tipi buzdolabı.

7.2 Ölçümler yapılırken aşağıdaki reaktifler ve malzemeler kullanılır:

- ana maddenin kütle fraksiyonu en az %99,9 olan mutlak etil alkol ();

- ana maddenin kütle fraksiyonu en az %96 olan veya GOST R 51652, GOST 18300'e göre rektifiye etil alkol ()

- ana maddenin kütle fraksiyonu en az %99,9 olan metil alkol ();

- asetonitril () ana maddenin kütle oranı %99,8'den az değildir;

- metilen klorür () ana maddenin kütle oranı %99,8'den az değildir;

- n-heksan () ana maddenin kütle oranı %99'dan az değildir;

- etilasetan () ana maddenin kütle oranı %99'dan az değil veya GOST 8981'e göre;

- propanol-2 () ana maddenin kütle oranı %99'dan az değildir;

- peroksitlerden saflaştırılmış (50 ± 10) °C sıcaklıkta damıtılmış petrol eteri;

- peroksitlerden saflaştırılmış, %0.1 pirogallol içeren dietil eter;

- GOST 24363'e göre potasyum hidroksit (KOH), kimyasal olarak saf veya analitik dereceli, KOH çözeltisi, kütle oranı %50;

- sodyum sülfat () ana maddenin susuz kütle oranı %99,5'ten az değildir veya GOST 4166'ya göre kimyasal olarak saftır;

- GOST 6709'a göre damıtılmış su;

- askorbik asit () göre veya kimyasal olarak saf;

- hidrokinon () ana maddenin kütle fraksiyonu en az %99 veya GOST 19627'ye göre;

- pirogallol () ana maddenin kütle oranı %99'dan az değildir;

- butilhidroksitoluen () ana maddenin kütle oranı %99'dan az değildir;

- retinol ()=286.5 g/mol, ana maddenin kütle oranı %90'dan az değildir;

- retinol asetat () = 328.5 g/mol, ana maddenin kütle oranı %90'dan az değil veya ;

- retinol palmitat () = 524.9 g/mol, ana maddenin kütle oranı %90'dan az değil veya .

7.3 Metrolojik ve teknik açıdan yukarıdakilerden daha düşük olmayan diğer ölçü aletlerinin, yardımcı ekipmanların kullanılmasına izin verilir. teknik özellikler ve gerekli ölçüm doğruluğunun yanı sıra yukarıdakilerden daha kötü olmayan kalitede reaktifler ve malzemeler sağlamak.

8 Ölçüm almaya hazırlanma

8.1 Çözeltilerin hazırlanması

8.1.1 Temel standart çözümler

Yaklaşık 50 mg retinol (veya retinol asetat veya retinol palmitat) 50 ml mutlak etil alkol içinde çözülür. Çözeltideki retinolün (veya retinol asetat veya retinol palmitat) kütle konsantrasyonu yaklaşık 1.0 mg/cm'dir. Daha sonra 2 ml retinol çözeltisi (veya retinol asetat veya retinol palmitat) bir pipetle 50 ml'lik ölçülü balona yerleştirilir ve mutlak etil alkol ile işarete getirilir. Elde edilen bazik standart çözeltilerdeki bileşiklerin kütle konsantrasyonu yaklaşık 40 ug/cm'dir.

8.1.2 Kalibrasyon çözümleri

Ana standart solüsyonlardan en az dört kalibrasyon solüsyonu retinol (veya retinol asetat veya retinol palmitat) 0,4-4,0 µg/cm kütle konsantrasyonu aralığında, ana standart solüsyonların mutlak etil alkol ile bir sıvı içinde tam olarak seyreltilmesiyle hazırlanır. 50 cm3 kapasiteli baloncuklu balon.

Retinol (veya retinol asetat veya retinol palmitat), (µg/cm) kütle konsantrasyonunun belirlenmesi, bir spektrofotometrede 1 cm emici tabaka kalınlığına sahip bir kuvars küvette kalibrasyon çözeltilerinin optik yoğunluğunun ölçülmesinden sonra gerçekleştirilir. optimum dalga boyu ve formülle hesaplanır

kalibrasyon çözeltisinin optik yoğunluğunun değeri nerede;

- Tablo 1'de verilen, 1 cm'lik bir emici tabaka kalınlığı ile 100 cm'de 1 g'lık mutlak etanol veya 2-propanol kütle konsantrasyonundaki kalibrasyon çözeltisinin optik yoğunluğunun değeri;

10 - dönüşüm faktörü;

- formülle hesaplanan, ölçüm yaparken ilgili bileşenlerin absorpsiyonunu dikkate alan katsayı

HPLC analizi sırasında standart maddenin pik alanı nerede, mAU·s (AU·s);

- standart maddenin HPLC analizi sırasında eşlik eden bileşenlerin tepe noktalarının alanlarının toplamı, mAU·s (AU·s).

Tüm solüsyonlar, hazırlama ve analiz sırasında ultraviyole radyasyondan özenle korunur. Retinol çözeltileri 2 ay boyunca 4 °C'nin altındaki sıcaklıklarda saklanır. Oda sıcaklığında 2-3 saat ölçümler için taze hazırlanmış retinol asetat veya retinol palmitat çözeltileri kullanılır.

8.2 Numune alma ve hazırlama

8.2.1 Örnekleme GOST 13496.0, GOST 26809, GOST R 52062, GOST R 52179'a göre yapılır.

8.2.2 Bir laboratuvar numunesinden dörde bölünerek izole edilen ortalama bir numunenin kaba parçacıkları, uygun ekipman (örneğin bir laboratuvar değirmeni) kullanılarak, tüm ürün 1 mm çapında delikli bir elekten geçecek şekilde ezilir. Öğütülmüş numune iyice karıştırılır.

Analiz edilen numuneler homojenize edilerek yüksek sıcaklıklara maruz kalmaktan kaçınılır.

8.2.3 Retinol asetat veya retinol palmitat ile güçlendirilmiş, su içeriği %1 veya daha az olan yağ bazlı gıda maddeleri

Analiz edilen numunenin 2-5 g'ı, çözünmeyi hızlandırmak için ultrasonik bir banyo kullanılarak 10-15 ml n-heksan içinde çözülmüş 25 ml kapasiteli bir ölçülü balona aktarılır. Çözelti, n-heksan ile işarete kadar yapılmıştır. Gerekirse, çözelti n-heksan ile sonraki seyreltme için kullanılabilir. Daha sonra heksan çözeltisinin bir kısmı bir nitrojen akışı içinde buharlaştırıldı ve kuru tortu, eluent içinde yeniden çözündürüldü.

8.2.4 Retinol asetat veya retinol palmitat ile takviye edilmiş, kütlece %20'den fazla olmayan su içeren yağ bazlı gıda ürünleri

Analiz edilen numunenin 2-5 g'ı, çözünmeyi hızlandırmak için ultrasonik bir banyo kullanılarak 10-15 ml n-heksan içinde kuvvetlice karıştırılarak çözülür. Susuz sodyum sülfat ekleyerek fazla suyu çıkarın. Şişenin içeriği, çözünmeyen çökeltiyi ayırmak için bir kağıt filtreden süzülür. Şişe iki kez 5 ml n-heksan ile yıkanır. Süzüntüler 25 ml'lik bir ölçülü balonda toplanır Çözelti n-heksan ile işarete kadar yapılır. Daha sonra heksan çözeltisinin bir kısmı bir nitrojen akışı içinde buharlaştırıldı ve kuru tortu, eluent içinde yeniden çözündürüldü.

8.2.5 Retinol asetat veya retinol palmitat ile güçlendirilmiş diğer gıdalar

Alkali hidrolizi gerçekleştirmek için, 1-30 g analiz edilen kuru veya sıvı malzeme numunesi, 5 dakika içinde 100-500 ml kapasiteli yuvarlak tabanlı bir şişeye konur. Daha sonra 50-150 cm3 rektifiye etil alkol (veya metil alkol), 0.2-1.0 g antioksidan (askorbik asit, hidrokinon, butilhidroksitoluen), 4-40 cm3 %50 potasyum hidroksit solüsyonu ekleyin ve 15- için ısıtın. 80 °C-100 °C sıcaklıkta geri akış altında bir su banyosunda 45 dakika.

Önerilen test materyali ve reaktif oranları Tablo 2'de verilmiştir.


Tablo 2 - Test materyali ve reaktiflerin önerilen oranları

Oda sıcaklığında en az 16 saat boyunca alkali hidroliz gerçekleştirildiğinde, yukarıdaki malzeme ve reaktif oranları kullanılır.

Soğutulduktan sonra karışımın yüzeyinde bir sıvı veya katı yağ tabakası kalırsa, eklenen KOH çözeltisinin hacmi ve alkali hidroliz süresi artar.

Hidroliz tamamlandıktan sonra, şişenin içeriği hızla (20 ± 5) °C'ye soğutulur ve nicel olarak bir ayırma hunisine aktarılır. Şişe, hacmi eklenen etil alkol (veya metil) hacmine eşit olan suyla durulanır ve su aynı huniye dökülür. A vitamini, dietil (veya petrol) eter, n-heksan, n-heksan ile, iki dakika boyunca 1:1 hacim oranında dietil (veya petrol) eter ilavesiyle ekstrakte edilir. A vitamininin eksik ekstraksiyonunu hesaba katmak için standart ekleme yöntemi kullanılmalıdır.

Ekstraksiyon, 50-100 cm'lik ekstraksiyon kısımları ile üç veya dört kez tekrarlanır.

Suyu çıkarmak için özüt, 2-5 g susuz sodyum sülfat içeren bir filtreden süzülür. Daha sonra ekstrakt, 50 °C'yi aşmayan bir sıcaklıkta bir döner buharlaştırıcı kullanılarak kuruyana kadar buharlaştırılır ve daha sonra eluent içinde yeniden çözülür. Gerekirse, çözelti sonraki seyreltme için kullanılabilir.

8.2.3 (8.2.4, 8.2.5)'e göre elde edilen solüsyon HPLC ile analiz edilir. Analiz edilen numunenin kütlesi ve çözücünün hacmi, analiz edilen çözeltideki analitlerin konsantrasyonu 0,4 ila 4,0 µg/cm aralığında olacak şekilde seçilir.

8.3 Sıvı kromatografın hazırlanması

Çalışma için sıvı kromatografın hazırlanması, ekipmanın kullanım kılavuzuna uygun olarak gerçekleştirilir. Çalışmaya başlamadan önce kolon eluent ile yıkanır.

8.4 Kalibrasyon eğrisi oluşturma

Kalibrasyon bağımlılığı oluşturma prosedürleri, ekipman kullanım kılavuzuna göre gerçekleştirilir. 8.1.2'ye göre hazırlanan tüm kalibrasyon çözeltilerinin kromatografik analizini gerçekleştirin.

Kalibrasyon grafiği "analitik sinyal" - "kalibrasyon çözeltisindeki vitaminin kütle konsantrasyonu, µg/cm" koordinatlarında oluşturulmuştur. Analiz edilen her kalibrasyon çözümü için iki paralel ölçüm yapılır ve aritmetik ortalama değer bulunur. Analitik sinyallerin ölçülen değerleri ile tutma süresi değerleri arasındaki fark, ortalama değerlerin %5'ini geçmemelidir. Kalibrasyon eğrisinin doğrusal bölümleri, A vitamininin belirlenen kütle konsantrasyonlarının tüm aralığına karşılık gelmelidir.

Kalibrasyon eğrisinin katsayısı, μg/cm/(mAU s) veya μg/cm/(AU s), formülle hesaplanan katsayıların aritmetik ortalaması olarak belirlenir.

kalibrasyon çözeltisindeki standart maddelerin kütle konsantrasyonu nerede, µg/cm;

- inci kalibrasyon çözeltisinin analizindeki analitik sinyalin alanı (yüksekliği), mAU s (AU s) veya tepe yüksekliği, mm.

Kalibrasyon bağımlılığının yapısının doğruluğu, 0,997'lik güvenilir bir yaklaşım değeri ile kontrol edilir.

Kalibrasyon aşağıdaki durumlarda gerçekleştirilir: yönteme hakim olma aşamasında, kromatografik analiz koşulları değiştiğinde veya operasyonel kontrol veya iç denetim sonuçları metrolojik gereksinimleri karşılamadığında.

9 Ölçüm alma

Eşit hacimlerde test ve kalibrasyon çözeltileri sırayla kromatograf kolonuna enjekte edilir. Kalibrasyon çözümü olarak, tepe yüksekliği test edilen çözeltinin tepe yüksekliğinden en az farklı olan bir çözelti seçilir. Kalibrasyon için kullanılan çözeltideki A vitamini () konsantrasyonu, 8.1.2'ye göre kullanım gününde belirtilir.

Zirveleri belirlemek için, test solüsyonunun retinol (veya retinol asetat veya retinol palmitat) ve standart solüsyonun alıkonma süresini karşılaştırın ve ayrıca test solüsyonuna benzer A vitamini içeriğine sahip standart bir solüsyon ekleyin.

10 Sonuçların işlenmesi ve sunumu

A vitamininin kütle oranı, milyon, aşağıdaki formüllerle hesaplanır:

8.4'e göre kalibrasyon eğrisinin katsayısı nerede;


- seyreltme hacmi, cm;

- analiz edilen numunenin kütlesi, g.

Kalibrasyon solüsyonu kullanma

kalibrasyon çözeltisinin kütle konsantrasyonu nerede, µg/cm;

- seyreltme hacmi, cm;

- test çözeltisinin iki paralel kromatografik analizi için analiz edilen bileşenin tepe noktasının alanının (yüksekliğinin) ölçüm sonuçlarının aritmetik ortalaması, mAU·s (AU·s) veya tepe yüksekliği, mm;

- analiz edilen numunenin kütlesi, g;

- kalibrasyon çözeltisinin iki paralel kromatografik analizi için analiz edilen bileşenin tepe noktası alanının (yükseklik) ölçümlerinin sonuçlarının aritmetik ortalaması, mAU·s (AU·s) veya tepe yüksekliği, mm.

Sonuç, üçüncü ondalık basamağa kadar hesaplanır ve ikinci ondalık basamağa yuvarlanır.

Her numuneyi analiz ederken, test numunesinin bir numunesinin alınmasıyla başlayarak iki paralel belirleme yapılır.

Bir operatör tarafından aynı reaktifler ve ekipman kullanılarak ve mümkün olan en kısa sürede gerçekleştirilen iki tekrarlı ölçümün sonuçları (ortalama değerin yüzdesi olarak) arasındaki tutarsızlık, (tekrarlanabilirlik sınırı tablo 3'te verilmiştir) aşmamalıdır. ) %95 güven düzeyi ile.

Bu koşul sağlanırsa, aritmetik ortalama değer, nihai test sonucu olarak alınır.

Test sonucunun bir yüzdesi olarak ve% 95'lik bir güven düzeyi ile A vitamini () kütle fraksiyonunun belirlenmesindeki nispi hatanın sınırları, Tablo 3'te belirtilen değerleri aşmamalıdır.

A vitamini tayininin sonucu aşağıdaki biçimde sunulur:

Milyon %95, (6)

iki paralel belirlemenin sonuçlarının aritmetik ortalaması nerede, milyon;

- formülle hesaplanan tanımların mutlak hatası sınırının değeri, milyon

Test sonuçları, aşağıdakileri gösteren protokole kaydedilir:

- bu standarda bir referans;

- numunenin türü, kökeni ve adı;

- numune alma yöntemi ve tarihi;

- numunenin alındığı ve test edildiği tarih;

- Araştırma sonuçları;

- belirlenen koşullardan belirleme prosedüründeki sapmaların nedenleri.

Bohan İvan

İnsanlar eski zamanlardan beri diyette belirli gıdaların yokluğunun hastalıklara neden olabileceğini biliyorlardı.

Gıdalardaki vitamin eksikliği vücutta ciddi rahatsızlıklara yol açabilir. En yaygın vitamin C vitaminidir. Antik çağlardan beri insanlar nedenleri bilinmeyen çok sayıda ciddi hastalıktan mustarip olmuştur. Bu hastalıklardan biri, genellikle Uzak Kuzey'deki insanları etkileyen iskorbüt hastalığıdır. Denizcilerin yaklaşık% 60'ının Vasco da Gama seferinde iskorbütten öldüğü biliniyor, aynı kaderi 1741'de Rus denizci V. Bering ve ekibinin birçok üyesi, Rus kutup gezgini G.Ya. 1914'te Sedov ve diğerleri.Yelken filosunun varlığı sırasında, tüm deniz savaşlarının toplamından daha fazla denizci iskorbütten öldü. Ve bunun nedeni, C vitamini eksikliği veya hipovitaminozuydu.

İndirmek:

Ön izleme:

Belediye bütçe eğitim kurumu

"Ortalama Kapsamlı okul 25"

Doğa Tarihi Bölümü

Gıdalarda C vitamini içeriğinin belirlenmesi

Tamamlayan: Bohan Ivan

7B öğrenci

Başkan: Bokhan Vera Vasilievna, kimya öğretmeni

Abakan 2015

Giriş ………………………………………………………………………….3

I. Teorik kısım………………………………………………………………4

1. C vitamininin keşfi ve çalışılmasının tarihçesi…………………………………4
2. C vitamininin biyolojik değeri………………………………………..5
3. Günlük C vitamini ihtiyacı………………………………………...5
4. Vitamin eksikliği - vitamin eksikliği……………………………..6
5. Hipervitaminoz belirtileri………………………………………………….6
6. Vitamin eksikliğinin önlenmesi………………………………………………....7
7. C vitamini kaynakları……………………………………………………...8

II. Pratik kısım. kantitatif içerik

Gıdalarda iyodometrik yöntemle C vitamini…..………… 9

1. C vitamini tayini için çalışma solüsyonlarının hazırlanması….….9

1. Doğruluk için test çözümleri………………………………………………………………10

1. Ürünlerde askorbik asit tayini……………..………10

1. Elde edilen sonuçların işlenmesi ……………………..…………….10

Sonuç……………………………………………………………………….11

Edebiyat……………………………………………………………………….12

Başvuru………………………………………………………………………13

giriiş

İnsanlar eski zamanlardan beri diyette belirli gıdaların yokluğunun hastalıklara neden olabileceğini biliyorlardı.

Gıdalardaki vitamin eksikliği vücutta ciddi rahatsızlıklara yol açabilir. En yaygın vitamin C vitaminidir. Antik çağlardan beri insanlar nedenleri bilinmeyen çok sayıda ciddi hastalıktan mustarip olmuştur. Bu hastalıklardan biri, genellikle Uzak Kuzey'deki insanları etkileyen iskorbüt hastalığıdır. Denizcilerin yaklaşık% 60'ının Vasco da Gama seferinde iskorbütten öldüğü biliniyor, aynı kaderi 1741'de Rus denizci V. Bering ve ekibinin birçok üyesi, Rus kutup gezgini G.Ya. 1914'te Sedov ve diğerleri.Yelken filosunun varlığı sırasında, tüm deniz savaşlarının toplamından daha fazla denizci iskorbütten öldü. Ve bunun nedeni, C vitamini eksikliği veya hipovitaminozuydu.

Şu anda, yıldan yıla mevsimsel akut solunum yolu enfeksiyonlarından korkuyoruz. Profilaktik ajanlardan biri C vitaminidir. “Yerli araştırmacılara göre, okul çocuklarında askorbik asit eksikliği, lökositlerin vücuda giren patojenik mikropları yok etme yeteneğini 2 kat azaltır, bunun sonucunda akut solunum yolu sıklığı hastalıklar %26-40 oranında artıyor ve tam tersi vitamin almak akut solunum yolu enfeksiyonlarının sıklığını önemli ölçüde azaltıyor” bu konunun bugün hala geçerli olduğunu gördüm. Bu bana insanlık için çok önemli olan bu maddeyi araştırma fikrini verdi.

amaç Bu çalışma, C vitamininin kaynaklarını ve insan vücudu için önemini incelemektir.

Bu hedefe ulaşmak için aşağıdakileri çözmek gerekir görevler:

1. Konuyla ilgili literatürü analiz edin
2. Vitamin kaynaklarını ve vücuttaki işlevlerini incelemek
3. Bazılarında C vitamini içeriğini araştırın Gıda Ürünleri

Çalışmanın amacı: Gıda.

Çalışma konusu:gıdalarda C vitamini tespiti için işlemler.

Araştırma Yöntemleri:literatür analizi, deney, gözlem.

Hipotez: C vitamini içeriği evde belirlenebilir.

I. Teorik kısım

1. C vitamininin keşfi ve incelenmesi tarihi

C vitamini veya askorbik asit beyaz bir kristaldir, suda çözünür ve tadı limon suyuna benzer.

C vitamini keşfinin tarihi, iskorbüt ile ilişkilidir. O uzak zamanlarda, bu hastalık özellikle denizcileri etkiledi. Güçlü, cesur denizciler, iskorbütten önce güçsüzdü ve bu da genellikle ölümcül sonuç. Hastalık kendini gösterdi Genel zayıflık, diş eti kanaması, dişlerin düşmesi sonucu ciltte kanamalar, döküntü ortaya çıktı. Ancak tedavisi bulundu. Böylece, Hintliler örneğini takip eden denizciler, C vitamini deposu olan sulu bir çam iğnesi özütü içmeye başladılar. 18. yüzyılda, İngiliz filosunun cerrahı J. Lind, denizcilerin hastalığının olabileceğini gösterdi. diyetlerine taze sebze ve meyveler ekleyerek tedavi edilebilirler. Bir başka ilginç gerçek ise, C vitamininin kaşifi Albert von Szent-György'nin aslında tam bir vitamin kompleksi keşfetmiş olmasıdır.

Özelliklerinin incelenmesinde büyük bir hak Linus Pauling'e aittir. Linus Carl Pauling, hayatında iki kez insanlığa hizmetlerinden dolayı dünyanın en yüksek ödülüne layık görülen birkaç bilim adamından biridir. Nobel Ödülü. Linus Pauling, modern kimya ve moleküler biyolojinin kurucularından biridir.

Unutulmamalıdır ki, bu kadar yüksek ödülleri kimseyle paylaşmadan kendi başına alan tek kişidir. Bilim adamı 60'ların ortalarında araştırma yaptı. İlk çalışmasına C Vitamini ve Soğuk algınlığı adı verildi. Ancak, C vitamininin genel olarak kabul edilenden 200 kat daha yüksek dozlarda alınması gerektiğini savunan bilim adamına ilaç ve tıp camiasından ne büyük bir öfke ve ret dalgası dayanmak zorunda kaldı! Bu arada, Pauling, her zaman olduğu gibi, katı bilimsel verilere dayanarak, karşıtlarını, insanlar ve maymunlar hariç olmak üzere çoğu memelinin karaciğerinin, C vitamini ile orantılı bir miktarda sentezlediğini kanıtlayan Irving Stone'un çalışmalarına yönelmeye çağırdı. hayvanın vücut ağırlığı. Bir kişi için bir orantı yapan Pauling, belirtilen rakama geldi - C vitamini dozu, adam için gerekli vücudun direncini arttırmak için normal yiyeceklerle gelen miktarın 200 katı olmalıdır.

Pauling, C vitamininin gelişim üzerindeki etkisini inceleyerek araştırmasına devam etti. onkolojik hastalıklar. Amerikan tıbbında gerçek bir patlama, askorbik asidin fantastik olanaklarını kanıtlayan “Kanser ve C Vitamini” adlı kitabından kaynaklandı. Bu sırada Linus Pauling, C Vitamini Adamı olarak adlandırıldı. Ancak basının alaylarına, doktorların ve eczacıların direnişine rağmen bilim adamı çalışmaya devam etti. Zaman onun inançlarını doğruladı.

2. C vitamininin biyolojik değeri

C vitamini güçlü bir antioksidandır. Redoks süreçlerinin düzenlenmesinde önemli bir rol oynar, kollajen ve prokollajen sentezine, metabolizmaya katılır. folik asit s ve demirin yanı sıra steroid hormonları ve katekolaminlerin sentezi. Askorbik asit ayrıca kanın pıhtılaşmasını düzenler, kılcal geçirgenliği normalleştirir, hematopoez için gereklidir ve anti-inflamatuar ve anti-alerjik etkilere sahiptir.

C vitamini, vücudun stresin etkilerine karşı savunmasında bir faktördür. Süreçleri güçlendirir, enfeksiyonlara karşı direnci arttırır. Çeşitli alerjenlere maruz kalmanın etkilerini azaltır. C vitamininin kanserin önlenmesinde kullanımına ilişkin birçok teorik ve deneysel arka plan vardır. Onkolojik hastalarda, dokulardaki rezervlerinin tükenmesi nedeniyle, ek uygulama gerektiren vitamin eksikliği semptomlarının sıklıkla geliştiği bilinmektedir.

Kolon, yemek borusu kanseri ile ilgili olarak C vitamininin önleyici rolünü gösteren veriler vardır. Mesane ve endometriyum (Blok G., Epidemiology, 1992, 3(3), 189–191).

C vitamini vücudun kalsiyum ve demiri emme ve toksik bakır, kurşun ve cıvayı uzaklaştırma yeteneğini geliştirir.

Yeterli miktarda C vitamini varlığında B vitaminlerinin stabilitesinin önemli ölçüde artması önemlidir. 1 , B2 , A, E, pantotenik ve folik asitler. C vitamini, düşük yoğunluklu lipoprotein kolesterolü oksidasyondan ve buna bağlı olarak kan damarlarının duvarlarını oksitlenmiş kolesterol formlarının birikmesinden korur.

Vücudumuz C vitamini depolayamaz, bu nedenle sürekli olarak ek almamız gerekir. Suda çözünür olduğu ve sıcaklığın etkisine maruz kaldığı için ısıl işlemle pişirmek onu yok eder.

3. Günlük C vitamini ihtiyacı

Günlük C vitamini ihtiyacı bir dizi nedene bağlıdır: yaş, cinsiyet, yapılan iş, hamilelik veya emzirme, iklim koşulları, kötü alışkanlıklar.

Hastalık, stres, ateş ve toksik etkilere (sigara dumanı gibi) maruz kalmak C vitamini ihtiyacını artırır.

Sıcak bir iklimde ve Uzak Kuzey'de C vitamini ihtiyacı yüzde 30-50 artar. Genç vücut, yaşlılara göre C vitaminini daha iyi emer, bu nedenle yaşlılarda C vitamini ihtiyacı biraz artar.

Fizyolojik ihtiyaçların ağırlıklı ortalama oranı günde 60-100 mg'dır. Olağan terapötik doz günlük 500-1500 mg'dır.[]

Çocuklar için:

0-6 ay - 30 mg

6 ay bir yıla kadar - 35 mg

1-3 yıl - 40 mg

4-6 yaş - 45 mg

7-10 yıl - 45 mg

11-14 yaş - 50 mg

15 ila 50 yaş arasındaki erkekler ve kadınlar için günlük gereksinim yaklaşık 70 mg'dır.

4. Vitamin eksikliği - beriberi

Vücuda vitamin temini eksikliği, zayıflamasına, keskin bir vitamin eksikliğine - metabolizmanın ve hastalıkların yok olmasına - vücudun ölümüyle sonuçlanabilecek beriberi'ye yol açar. Avitaminoz sadece yetersiz vitamin alımından değil, aynı zamanda vücutta asimilasyon ve kullanım süreçlerinin ihlalinden de kaynaklanabilir.

Rusya Tıp Bilimleri Akademisi Beslenme Enstitüsü'nün vitamin ve mineral laboratuvarı başkanına göre prof. V.B. Spiricheva'ya göre, Rusya'nın farklı bölgelerinde yapılan anketlerin sonuçları, okul öncesi ve okul çağındaki çocukların büyük çoğunluğunun normal büyüme ve gelişme için gerekli vitaminlerden yoksun olduğunu gösteriyor.

Özellikle olumsuz, incelenen çocukların% 80-90'ında eksikliği ortaya çıkan C vitamini ile ilgili durumdur.

Moskova, Yekaterinburg, Nizhny Novgorod ve diğer şehirlerdeki hastanelerde çocukları muayene ederken, %60-70 oranında C vitamini eksikliği bulunur.

Bu eksikliğin derinliği kış-ilkbahar döneminde artar, ancak birçok çocukta, daha uygun yaz ve sonbahar aylarında bile vitamin eksikliği devam eder.

Ancak yetersiz vitamin alımı, bağışıklık sisteminin aktivitesini önemli ölçüde azaltır, solunum ve solunumun sıklığını ve şiddetini artırır. mide-bağırsak hastalıkları. Eksiklik eksojen (gıdadaki askorbik asit eksikliği nedeniyle) ve endojen (insan vücudunda C vitamininin emiliminin ve emiliminin bozulması nedeniyle) olabilir.

Vitaminin uzun süre yetersiz alımı ile hipovitaminoz gelişebilir.

5. Hipervitaminoz belirtileri

C vitamini yüksek dozlarda bile iyi tolere edilir.

Yine de:

· Doz çok yüksekse ishal gelişebilir.

· Büyük dozlar Spesifik enzim glikoz-6-fosfat dehidrojenazdan yoksun kişilerde hemolize (kırmızı kan hücrelerinin tahrip olmasına) neden olabilir. Bu nedenle, bu bozukluğu olan kişiler, yalnızca bir doktorun sıkı gözetimi altında daha yüksek dozlarda C vitamini almalıdır.

Askorbik asit, aspirin ile aynı anda büyük dozlarda alınırsa, mide tahrişi meydana gelebilir ve bunun sonucunda ülser gelişebilir (kalsiyum askorbat formundaki askorbik asit, nötr bir reaksiyona sahiptir ve mukozaya karşı daha az agresiftir) gastrointestinal sistem).

· C vitamini aspirin ile birlikte kullanıldığında, yüksek doz aspirinin böbrekler yoluyla C vitamini atılımının artmasına ve idrarla kaybına ve dolayısıyla bir süre sonra vitamin eksikliğine yol açabileceği de unutulmamalıdır.

C vitamini içeren çiğneme ve sakızlar diş minesine zarar verebilir, bunları aldıktan sonra ağzınızı çalkalamalı veya dişlerinizi fırçalamalısınız.

6. beriberi önlenmesi

DSÖ Uzman Komitesi koşulsuz kavramını tanıttı günlük doz 2.5 mg / kg vücut ağırlığını aşmayan C vitamini ve 7.5 mg / kg olan şartlı olarak izin verilen günlük C vitamini dozu (Shilov P.I., Yakovlev T.N., 1974)

Vitamin eksikliğinin önlenmesi, vitamin bakımından zengin gıda ürünlerinin üretilmesinden, yeterli sebze ve meyve tüketiminden, gıda ürünlerinin uygun şekilde depolanmasından ve işletmelerde rasyonel teknolojik işlenmesinden oluşur. Gıda endüstrisi, yemek ve evde. Vitamin eksikliği ile - vitamin müstahzarları ile beslenmenin ek zenginleştirilmesi, toplu tüketim için güçlendirilmiş gıda ürünleri.

C vitamini, iskorbüt, gastrointestinal sistemin belirli hastalıkları, kanama, alerjiler, kollajenozlar, ateroskleroz, bulaşıcı hastalıklar, önleyici zehirlenmeler için reçete edilir.

Araştırma göstermiştir ki yüksek dozlar C vitamini, belirli kanser türlerine sahip hastaların yaşam süresini uzatmaya ve durumlarını iyileştirmeye katkıda bulunur. Çok yüksek dozlarda askorbik asidin normal döllenmeyi engelleyebileceğine, düşüklere neden olabileceğine, kan pıhtılaşmasını artırabileceğine ve böbrek ve pankreas işlevi üzerinde olumsuz bir etkiye sahip olabileceğine dair kanıtlar vardır. Bununla birlikte, aşırı dozda askorbik asit tehlikesi abartılmıştır. Çok sayıda çalışmanın sonuçları, hipervitaminoz C'nin pratik olarak tezahür etmediğini düşünmeyi mümkün kılmıştır.

Büyük dozlarda C vitamininin sistematik olarak alınması, ağız boşluğu, yemek borusu, gırtlak, mide, meme, beyin kanseri riskini azaltır. Büyük dozlarda C vitamini (günde yaklaşık 1 g), tütün dumanının sigara içen kişinin vücudu üzerindeki son derece tehlikeli etkilerini bir şekilde ortadan kaldırır.

Vitamin preparatlarına ek olarak, hipovitaminozu önlemek için kuşburnu kullanılır. Gül kalçaları şu şekilde farklılık gösterir: yüksek içerik askorbik asit (% 0,2'den az olmamak üzere) ve yaygın olarak C vitamini kaynağı olarak kullanılırlar. Olgunlaşma döneminde toplanan ve kurutulan çeşitli kuşburnu türlerinin meyvelerini kullanırlar. C vitaminine ek olarak, K, P vitaminleri, şekerler, tanenler dahil organik ve diğer maddeleri içerirler. İnfüzyonlar, özler, şuruplar, haplar, tatlılar, drajeler şeklinde kullanılır.

Kuşburnu infüzyonu şu şekilde hazırlanır: 10 g (1 yemek kaşığı) meyve bir emaye kaseye konur, 200 ml (1 bardak) sıcak kaynamış suya dökülür, bir kapakla kapatılır ve bir su banyosunda ısıtılır ( kaynar suda) 15 dakika bekletin, ardından oda sıcaklığında en az 45 dakika soğutun, süzün. Kalan ham madde sıkılır ve elde edilen infüzyonun hacmi kaynamış su ile 200 ml'ye ayarlanır. Yemeklerden sonra günde 2 kez 1/2 fincan alın. Çocuklara resepsiyon başına 1/3 bardak verilir. Tadı iyileştirmek için infüzyona şeker veya meyve şurubu ekleyebilirsiniz.

Kuşburnu şurubu, çeşitli kuşburnu ve meyve özü (kırmızı üvez, kara chokeberry, kartopu, alıç, kızılcık vb.) suyunun şeker ve askorbik asit ilavesiyle hazırlanır. 1 ml'de yaklaşık 4 mg askorbik asit, ayrıca P vitamini ve diğer maddeler içerir. Çocuklara atayın (içinde önleyici amaçlar) 1/2 çay kaşığı veya 1 tatlı kaşığı (yaşa göre) günde 2-3 defa su ile yıkanır.

7. C Vitamini Kaynakları

Vitaminlerin ana kaynağı bitkilerdir. İnsan vücudunda askorbik asit oluşmaz ve bunun birikimi yoktur. İnsanlar ve hayvanlar vitaminleri doğrudan bitkisel gıdalardan ve dolaylı olarak hayvansal ürünlerden alırlar. Hayvansal kaynaklı ürünlerde, C vitamini hafifçe temsil edilir (karaciğer, adrenal bezler, böbrekler). Gıdalarda önemli miktarda askorbik asit bulunur. bitki kökenliörneğin turunçgiller, yeşil yapraklı sebzeler, kavun, brokoli, brüksel lahanası, karnabahar, lahana, siyah kuş üzümü, dolmalık biber, çilek, domates, elma, kayısı, şeftali, hurma, deniz topalak, kuşburnu, üvez, fırında pişmiş patates. C vitamini yönünden zengin otlar: yonca, sığırkuyruğu, dulavratotu kökü, gerbil, eyebright, rezene tohumu, çemen, şerbetçiotu, atkuyruğu, yosun, nane, ısırgan otu, yulaf, kırmızı biber, kırmızı biber, maydanoz, çam iğneleri, civanperçemi, pisilyum, ahududu yaprağı , kırmızı yonca, kuşburnu, takke, menekşe yaprağı, kuzukulağı. Bazı gıdalardaki C vitamini içeriği normları için Ek 1'e bakın (100 g başına mg olarak).

Gıdalardaki C vitamini içeriği, ürünlerin depolanmasından ve mutfakta işlenmesinden önemli ölçüde etkilenir. C vitamini, suya batırıldığında bile soyulmuş sebzelerde hızla yok edilir. Tuzlama ve asitleme, C vitaminini yok eder. Pişirme, ürünün askorbik asit içeriğini azaltma eğilimindedir. C vitamini asidik bir ortamda daha iyi korunur.

Askorbik asit sentetik olarak da elde edilebilir, toz, draje, glikoz tabletleri vb. şeklinde üretilir. Askorbik asit, çeşitli multivitamin preparatlarının bir parçasıdır.

Sadece birkaç kişinin ve özellikle çocukların, ana besin kaynağı olan yeterince meyve ve sebze yediğini unutmayın. besin kaynakları A vitamini Daha da fazlası stres, sigara ve duman ve duman gibi diğer hücre hasarı kaynaklarının etkisi altında vücutta yakılır. Aspirin gibi yaygın olarak kullanılan ilaçlar, vücudumuzu hala almayı başardığımız vitamin miktarlarından büyük ölçüde mahrum bırakır.

II. Pratik kısım.Gıdalardaki C vitamini içeriğinin iyodometrik yöntemle kantitatif tayini

Askorbik asit, diğer tüm asitlerin sahip olmadığı bir özelliğe sahiptir: iyot ile hızlı reaksiyon. Bu nedenle, eskidengıda ürünlerindeki C vitamini içeriğinin iyodometrik yöntemle kantitatif belirlenmesi.

Bir molekül askorbik asit - C 6 H 8 O 6 , bir molekül iyot ile reaksiyona girer - I 2 .

1. C vitamini tayini için çalışma solüsyonlarının hazırlanması

Meyve sularında ve diğer ürünlerde C vitamini belirlemek için, iyot konsantrasyonu% 5 olan bir eczane iyot tentürü almak gerekir, yani. 100 ml'de 5 gr. Bununla birlikte, bazı meyve sularındaki askorbik asit o kadar küçük olabilir ki, belirli bir meyve suyunu (örneğin 20 ml) titre etmek için sadece 1-2 damla iyot tentürü yeterlidir. Bu durumda, analiz hatası çok büyüktür. Sonucu daha doğru hale getirmek için çok fazla meyve suyu almanız veya iyot tentürünü seyreltmeniz gerekir. Her iki durumda da titrasyon için kullanılan iyot damlalarının sayısı artar ve analiz daha doğru olur.

Meyve sularının analizi için, 1 ml iyot tentürüne toplam 40 ml hacme kaynamış su eklemek, yani tentürü 40 kez seyreltmek uygundur ve 1 ml'si 0.88 mg askorbik aside karşılık gelir.

İyot tentürünün titrasyonu için ne kadar harcanacağını bulmak için önce 1 damla hacmini belirlemelisiniz: bir şırınga kullanarak, 1 ml seyreltik iyot çözeltisi ölçün ve bu hacimde sıradan bir pipetten kaç damla bulunduğunu hesaplayın. . Bir kapak 0.02 ml içerir.

Ardından nişasta hamurunu hazırlayın: bunun için ½ su bardağı suyu kaynatın, su ısınırken 1/4 çay kaşığı nişastayı bir kaşık soğuk suyla karıştırın, böylece topaklar kalmaz. Kaynar suya dökün ve soğutun.

2. Doğruluk için test çözümleri.

Ürünlerin analizine geçmeden önce çözümümüzün doğruluğunu test edeceğiz. Bunu yapmak için 0,1 g 1 tablet saf vitamin alın, 0,5 litre kaynamış suda çözün. Bir tabletten 20 kat daha az vitamin içeriğine karşılık gelen 25 ml deney için alın. Bu çözeltiye 1/2 çay kaşığı nişasta macunu ekleyin ve damla damla iyot çözeltisini mavi olana kadar ekleyin. Damla sayısını ve dolayısıyla tüketilen iyot çözeltisinin hacmini belirleriz, çözeltideki vitamin içeriğini aşağıdaki formüle göre hesaplarız: 0.88 * V = A mg, burada V iyot çözeltisinin hacmidir. Orijinal tablette A - 20 kat daha fazla, sonra A * 20 = tabletteki askorbik asit içeriği. Sonuçlar, titrasyonun 5,28 mg vitamine karşılık gelen 6 ml çözelti aldığını, 20 ile çarparak 105.6 sayısını bulduğunu gösterdi. Bu, analizimizin doğruluğunun oldukça yeterli olduğu anlamına gelir.

3. Ürünlerde askorbik asit tayini

25 ml test ürünü aldık ve nişasta ekledik. Ardından, test sıvısı, tüm askorbik asidin oksitlendiğini gösteren stabil bir mavi nişasta rengi görünene kadar bir iyot çözeltisi ile titre edildi (Bkz. Ek 2). Titrasyon için kullanılan iyot çözeltisi miktarı kaydedilerek hesaplama yapılmıştır. Bunu yapmak için, 1 ml% 0.125 iyot çözeltisinin 0.875 mg askorbik asidi oksitlediğini bilerek bir orantı yaptık.

4. Elde edilen sonuçların işlenmesi

25 ml limon suyunun titrasyonu 7.1 ml iyot çözeltisi aldı. Bir orantı kurun:

1 ml iyot çözeltisi - 0.875 mg askorbik asit

7,1 ml - X

X= 7.1 * 0.875/1=6.25 (mg)

Yani 25 ml meyve suyu 6.25 mg askorbik asit içerir. Daha sonra 100 ml meyve suyu 6.25*100/25=25 mg içerir.

Benzer şekilde, diğer ürünlerdeki C vitamini içeriğini de hesapladık. Elde edilen veriler tablo1'e girildi.

Tablo 1. Araştırma sonuçları

Böylece, çalışma sırasında, insan vücudunun bağışıklık sistemini güçlendirmek için gerekli olan C vitamininin gıdalar açısından en zengin olduğu pratik sonucuna vardık - kuşburnu suyu, kırmızı biber, lahana ve limon. tavsiye ederizen basit şey kuşburnu infüzyonu hazırlamaktır. Özellikle bal veya meyve şurubu ile çok lezzetli olduğu için afiyetle içebilirsiniz.

Kuşburnu şurubu da ekleyerek kırmızı ve chokeberry, kartopu, kızılcık, alıç. Böyle bir şurup 1 yemek kaşığı içinde tüketilebilir. Günde 3 kez ve küçük çocuklara 0,5-1 çay kaşığı verin. Bu birçok hastalığı önleyecektir.

Çözüm

Araştırılan literatüre ve yapılan çalışmalara dayanarak, aşağıdaki sonuçlar çıkarılabilir:

• Vitaminler, temel besin maddelerinin en önemli sınıfıdır. Vitaminlerden bahsetmişken, hepsinin önemli olduğunu söyleyebiliriz, ancakC vitamini - askorbik asitçoğu biyokimyacı tarafından doğanın en büyük harikalarından biri olarak kabul edilir. Askorbik asit molekülü o kadar basit, aktif ve hareketlidir ki, çeşitli yaşam süreçlerine katılarak birçok engeli kolayca aşabilir.
• Vücudun yeterli C vitamini alabilmesi için ya yerel sebzeler ya da sentetik olarak elde edilen askorbik asit yemek gerekir.
• C vitamini en güçlü antioksidanlardan biridir ve ilk olarak limon suyundan izole edilmiştir. Suda mükemmel bir şekilde çözünür ve bu ona bir takım avantajlar sağlar - örneğin, bu özelliği sayesinde C vitamini, ihtiyaç duyulan yere kolayca ve hızlı bir şekilde nüfuz edebilir, bağışıklık sisteminin vücuttaki arızaları ortadan kaldırmasına yardımcı olabilir ve gerekli işlemleri başlatabilir. insan sağlığı ve yaşamı için. Bununla birlikte, aynı özellik onu savunmasız kılar - ürünlerin ısıl işlemi sırasında askorbik asit yok edilir.
• Gıda ürünlerindeki C vitamini içeriğini özel bir laboratuvarın yardımına başvurmadan incelemek, ancak bunu evde yapmak mümkündür, bu da hipotezimizi doğrular.
• C vitamini - iyot çözeltisi ile meyve ve sebzelerde bulunan askorbik asit.
• En yüksek miktarda C vitamini bulunur. taze sebzeler ve meyveler, özellikle kuşburnu, kırmızı biber, limon.

Edebiyat

1. Dudkin M.S., Shchelkunov L.F. Yeni gıda ürünleri. - M.: Nauka, 1998.
2. Leenson I. Eğlenceli kimya, - M.: Rosmen, 1999.
3. Skurikhin I.M., Nechaev A.P. Bir kimyagerin bakış açısından yemekle ilgili her şey. ‒ M.: Daha yüksek

okul, 1991.

1. Smirnov M.I. "Vitaminler", M.: "Tıp" 1974.
2. Tyurenkova I.N. "Bitki vitamin kaynakları", Volgograd 1999.
3. Kimyasal bileşim gıda ürünleri / Ed. I.M. Skurikhina, M.N. Volgareva. ‒ M.: Agropromizdat, 1987.
4. . http://vitamini.solvay-pharma.ru/encyclopedia/info.aspx?id=13
5. .http://kref.ru/infohim/138679/3.html
6. “Genç Bir Kimyagerin Ansiklopedik Sözlüğü” - Moskova 1990 Pedagoji, 650'ler.
7. http://vitamini.solvay-pharma.ru/encyclopedia/info.aspx?id=13

Ek 1

Ek 2

C vitamini içeriği için bir iyot çözeltisi ile meyve suyunun incelenmesi

"Vitaminler" genel adı altında birleştirilen temel gıda maddeleri, kendi içinde nicel tayinleri için tek bir yöntem kullanma olasılığını dışlayan farklı kimyasal bileşik sınıflarına aittir. Vitaminler için bilinen tüm analitik yöntemler, ya bu maddelerin spesifik biyolojik özelliklerinin belirlenmesine (biyolojik, mikrobiyolojik, enzimatik) ya da fizikokimyasal özelliklerinin kullanımına (floresan, kromatografik ve spektrofotometrik yöntemler) ya da bazı vitaminlerin bazı reaktiflerle reaksiyona girerek renkli bileşikler oluşturması (kolorimetrik yöntemler).

Analitik ve uygulamalı kimya alanında kaydedilen ilerlemeye rağmen, gıda ürünlerindeki vitaminleri belirleme yöntemleri hala emek yoğun ve zaman alıcıdır. Bu, başlıcaları aşağıdaki gibi olan bir dizi nesnel nedenden kaynaklanmaktadır.

1. Bir dizi vitaminin belirlenmesi, birçoğunun doğada proteinler veya peptitler ile kompleksler şeklinde ve ayrıca fosforik esterler şeklinde bağlı bir durumda olması nedeniyle genellikle karmaşıktır. Kantitatif belirleme için, bu kompleksleri yok etmek ve vitaminleri fizikokimyasal veya mikrobiyolojik analiz için uygun serbest formda izole etmek gerekir. Bu genellikle özel işleme koşulları (asidik, alkali veya enzimatik hidroliz, otoklavlama) kullanılarak elde edilir.

2. Hemen hemen tüm vitaminler, yüksek sıcaklık, atmosferik oksijen, ışık ve diğer faktörlerin etkisi altında kolayca oksidasyona, izomerizasyona ve tam tahribata maruz kalan oldukça kararsız bileşiklerdir. Önlemlere uyulmalıdır: Ürünün ön hazırlık süresini en aza indirin, güçlü ısı ve ışığa maruz kalmaktan kaçının, antioksidan kullanın, vb.

3. Gıda ürünlerinde, kural olarak, büyük kimyasal benzerliğe sahip ve aynı zamanda biyolojik aktivitede farklılık gösteren bir grup bileşikle uğraşmak gerekir. Örneğin, E vitamini 8 tokoferol içerir. kimyasal özellikler, ancak biyolojik eylemde farklılık gösterir; Karoten ve karotenoid pigmentler grubu, sadece 10'unun bir dereceye kadar vitamin özelliklerine sahip olduğu 80'e kadar bileşik içerir.

4. Vitaminler, farklı organik bileşik sınıflarına aittir. Bu nedenle, onlar için ortak grup reaksiyonları mevcut olamaz ve yaygın yöntemler Araştırma.

5. Ek olarak, analiz, miktarı belirlenen vitamin içeriğini (örneğin, steroller ve D vitamini) birçok kez aşabilen test örneğinde eşlik eden maddelerin varlığını karmaşıklaştırır. Gıda ürünlerinde vitamin tayinindeki olası hataları ortadan kaldırmak için ekstraktlar genellikle ilgili bileşiklerden tamamen saflaştırılır ve vitamin konsantre edilir. Bunun için çeşitli yöntemler kullanılır: analize müdahale eden maddelerin çökeltilmesi, adsorpsiyon yöntemleri, iyon değişimi veya bölme kromatografisi, analitin seçici ekstraksiyonu, vb.

Son yıllarda, HPLC, gıda ürünlerindeki vitaminleri belirlemek için başarıyla kullanılmıştır. Bu yöntem, analiz süresini azaltan çeşitli vitaminleri ve biyolojik olarak aktif formlarını aynı anda ayırmanıza, tanımlamanıza ve nicelleştirmenize izin verdiği için en umut verici olanıdır.

Vitaminlerin incelenmesi için fiziko-kimyasal yöntemler. Yöntemler, vitaminlerin fizikokimyasal özelliklerinin (floresan, ışık absorpsiyon, redoks reaksiyonları vb.) kullanımına dayanmaktadır. Analitik kimya ve enstrümantasyonun gelişmesi sayesinde, fizikokimyasal yöntemler, zaman alıcı ve pahalı biyolojik yöntemlerin neredeyse tamamen yerini almıştır.

C vitamininin belirlenmesi. C vitamini (askorbik asit) gıdalarda hem indirgenmiş hem de oksitlenmiş halde bulunabilir. Gıda ürünlerinin işlenmesi ve depolanması sırasında oksidasyon sonucu dehidroaskorbik asit (DAC) oluşabilmekte, bu da belirlenmesini zorunlu kılmaktadır. Gıda ürünlerinde C vitamini belirlenirken çeşitli yöntemler kullanılır: AA'nın redoks özelliklerine dayalı kolorimetrik, floresan, hacimsel analiz yöntemleri ve HPLC.

AA'nın kantitatif tayininde can alıcı nokta, numune ekstraktının hazırlanmasıdır. Ekstraksiyon tamamlanmış olmalıdır. En iyi özütleyici, proteinleri çökeltme kabiliyetine sahip olan %6'lık bir metafosforik asit çözeltisidir. Asetik, oksalik ve hidroklorik asitler ve bunların karışımları da kullanılır.

1. Oksitlenmiş ve indirgenmiş AA formlarının toplam ve ayrı tayini için, Rohe yöntemi genellikle bir 2,4-dinitrofenilhidrazin reaktifi kullanılarak kullanılır. Oksitleyici ajanların etkisi altındaki AA (gulonik asit), DAK'a ve daha sonra 2,4-dinitrofenilhidrazin ile turuncu renkli bileşikler oluşturan 2,3-diketogulonik aside geçer. 2,4-dinitrofenilhidrazinin kendisi, asit formunda bulunamayan bir bazdır. Bununla birlikte, alkalilerin etkisi altındaki karşılık gelen hidrazonlar, yoğun renkli asit tuzlarına dönüştürülür. C vitamini belirlenirken, bu yöntem indirgeyici ajanların (glikoz, fruktoz vb.) varlığına müdahale eder. Bu nedenle, ne zaman harika içerik test ürünündeki şekerler, belirlemeyi zorlaştıran kromatografiyi kullanır.

2. Son zamanlarda, toplam C vitamini içeriğini (AA ve DAA toplamı) belirlemek için çok hassas ve doğru bir floresan yöntemi kabul edilmiştir. DAK, o-fenilendiamin ile yoğunlaşarak, 350 nm'lik bir uyarma dalga boyunda maksimum flüoresansa sahip olan bir flüoresan bileşiği olan kuinoksalini oluşturur.

Kinoksalinin oda sıcaklığında nötr bir ortamda floresan yoğunluğu, DAA konsantrasyonu ile doğru orantılıdır. AA'nın nicel tayini için, DAA'da ön oksitlenir. Bu yöntemin dezavantajı oldukça pahalı ekipmandır.

AA'nın redoks özelliklerine dayalı yöntemler.

3. AA'nın redoks özelliklerine dayanan yöntemlerden en büyük uygulamayı mavi renge sahip 2,6-diklorofenolindofenol çözeltisi ile titrasyon yöntemi bulmuştur. AA'nın reaktif ile etkileşiminin ürünü renksizdir. Yöntem, her türlü ürünün analizinde kullanılabilir. Patateslerde doğal pigment içermeyen ürünler analiz edilirken süt, görsel titrasyon kullanılır. Doğal boyaların mevcudiyeti durumunda, potansiyometrik titrasyon veya indofenol-ksilen ekstraksiyonu yöntemini kullanın. İkinci yöntem, 2,6-diklorofenolindofenolün askorbik asit ile kantitatif renk gidermesine dayanmaktadır. Fazla boya ksilen ile ekstrakte edilir ve ekstraktın optik yoğunluğu 500 nm'de ölçülür.

Sadece AK tepki verir. DAK, sistein ile önceden indirgenmiştir. AA'yı ısıl işlem görmüş gıdalarda veya uzun süreli depolanmış ekstraktlarda bulunan indirgeyici maddelerden ayırmak için formaldehit ile işlenirler. Formaldehit, ortamın pH'ına bağlı olarak, AA ve indirgeyici ajanların yabancı safsızlıkları ile seçici olarak etkileşime girer (pH = 0). Belirtilen yöntem AK ve DAK miktarını belirler.

AA'nın fotometrik tayini için 2,6-diklorofenolindofenol de kullanılabilir. Reaktif çözeltisinin rengi mavidir ve AA ile etkileşimin ürünü renksizdir, yani. reaksiyon sonucunda mavi rengin yoğunluğu azalır. Optik yoğunluk 605 nm'de ölçülür (pH = 3.6).

4. AA'nın indirgeme özelliklerine dayanan başka bir yöntem, AA'nın Fe(3+)'yi Fe(2+)'ye indirgeme yeteneğini ve ikincisinin 2,2'- ile yoğun kırmızı tuzlar oluşturma yeteneğini kullanan kolorimetrik yöntemdir. dipiridil. Reaksiyon pH 3.6'da ve 70ºС sıcaklıkta gerçekleştirilir. Çözeltinin absorbansı 510 nm'de ölçülür.

5. AA'nın Folin reaktifi ile etkileşimine dayanan fotometrik yöntem. Folin reaktifi, fosfomolibdik ve fosfotungstik asitlerin bir karışımıdır, yani. bu, 640-700 nm'de soğuran molibden mavilerinin oluşumuna dayanan bilinen bir yöntemdir.

6. Son derece hassas ve spesifik HPLC yöntemi, tüm gıda ürünlerinde C vitamini tayini için başarıyla kullanılabilir. Analiz oldukça basittir, sadece protein açısından zengin ürünleri analiz ederken, önce onları çıkarmanız gerekir. Algılama floresan ile gerçekleştirilir.

Yukarıdaki C vitamini belirleme yöntemlerine ek olarak, örneğin altın klorür ile oksidasyon ve hidroksamik asitlerin oluşumu gibi bir dizi yöntem vardır, ancak bu yöntemlerin pratik bir önemi yoktur.

Tiamin tayini (B 1 ). Çoğu doğal üründe tiamin, difosforik ester - kokarboksilaz formunda bulunur. Bir dizi karbonhidrat metabolizması enziminin aktif grubu olan ikincisi, proteinle belirli bağlar içindedir. Tiaminin kantitatif tayini için, kompleksleri yok etmek ve incelenen vitamini fizikokimyasal analiz için mevcut olan serbest bir biçimde izole etmek gerekir. Bu amaçla asit hidrolizi veya enzimlerin etkisi altında hidroliz gerçekleştirilir. Protein açısından zengin nesneler, bir hidroklorik asit ortamında proteolitik enzimler (pepsin) ile işlenir. Yüksek yağ içeriğine sahip nesneler (domuz eti, peynirler) onu çıkarmak için eter ile işlenir (tiamin pratik olarak eterde çözünmez).

1. Gıda ürünlerinde tiaminin belirlenmesi için, kural olarak, tiaminin alkali bir ortamda potasyum hekzasiyanoferrat (3+) ile oksidasyonuna dayanan ve ultraviyole ışıkta yüksek oranda floresan olan bir tiyokrom bileşiği oluşturan bir floresan yöntemi kullanılır. Floresansının yoğunluğu, tiamin içeriği ile doğru orantılıdır (heyecan verici ışığın dalga boyu 365 nm, yayılan ışığın dalga boyu 460-470 nm'dir (mavi floresan)). Bu yöntemi kullanırken, bir dizi nesnede floresan bileşiklerin varlığından dolayı zorluklar ortaya çıkar. İyon değişim reçineleri ile kolonlarda saflaştırılarak uzaklaştırılırlar. Et, süt, patates, buğday ekmeği ve bazı sebzeleri analiz ederken saflaştırma gerekmez.

2. Tiamin, UV bölgesinde (sulu çözeltide 240 nm, etanolde 235 nm) kendi absorpsiyonu ile karakterize edilir, bu da doğrudan spektrofotometri ile belirlenebileceği anlamına gelir.

3. Tiamin ve riboflavinin eş zamanlı tespiti için HPLC kullanılır.

Riboflavin tayini (B 2 ). Gıdalarda riboflavin esas olarak proteine ​​bağlı fosfor esterleri olarak bulunur ve bu nedenle önceden proteolitik sindirim olmadan belirlenemez. Serbest riboflavin sütte önemli miktarlarda bulunur.

Riboflavin belirlenirken, en yaygın olarak mikrobiyolojik ve fiziko-kimyasal (floresan) analiz yöntemleri kullanılır. Mikrobiyolojik yöntem spesifik, oldukça hassas ve doğrudur; tüm ürünler için geçerlidir, ancak uzun ve özel koşullar gerektirir.

Fizikokimyasal yöntem, floresan maddelerin değerlendirilme yönteminde farklılık gösteren iki versiyonda geliştirilmiştir:

doğrudan floresan varyantı (riboflavin floresan yoğunluğunun belirlenmesi) ve

Lumiflavin varyantı.

1. Serbest riboflavin ve fosfat esterleri, 440-500 nm'lik bir uyarma dalga boyunda karakteristik bir sarı-yeşil floresan sergiler. Bu özellik, riboflavin tayini için en yaygın olarak kullanılan floresan yönteminin temelidir. Riboflavin ve esterleri, maksimum 530 nm'de çok benzer floresan spektrumları verir. Maksimumun konumu pH'a bağlı değildir. Floresan yoğunluğu önemli ölçüde pH'a ve çözücüye bağlıdır (riboflavin ve esterleri için farklıdır), bu nedenle esterler önceden yok edilir ve serbest riboflavin analiz edilir. Bunun için hidroklorik ve trikloroasetik asitlerle hidroliz, otoklavlama ve enzim preparatlarıyla işleme kullanılır.

UV ışığında riboflavinin sarı-yeşil floresansının yoğunluğu sadece konsantrasyonuna değil, aynı zamanda çözeltinin pH değerine de bağlıdır. Maksimum yoğunluğa pH=6-7'de ulaşılır. Bununla birlikte, ölçüm 3 ila 5 pH'da gerçekleştirilir, çünkü bu aralıkta floresan yoğunluğu sadece riboflavin konsantrasyonu ile belirlenir ve diğer faktörlere bağlı değildir - pH değeri, tuzların konsantrasyonu, demir, organik safsızlıklar , vb.

Riboflavin ışıkta kolayca yok edilir, tayin ışıktan korunan bir yerde ve 7'den yüksek olmayan bir pH'da yapılır.

2. Luminflavin varyantı, floresan yoğunluğu kloroform ile ekstraksiyonundan sonra ölçülen (mavi floresan, 460-470 nm) lumiflavine dönüştürmek için alkalin bir ortamda ışınlama üzerine riboflavin özelliğinin kullanımına dayanır. Belirli koşullar altında toplam riboflavinin %60-70'i lumiflavine geçtiğinden, analiz sırasında test ve standart çözelti için aynı olan sabit ışınlama koşullarını gözlemlemek gerekir.

B vitamini tayini 6 . Vitamini belirlemek için aşağıdaki yöntemler kullanılabilir:

1. Doğrudan spektrofotometri. Piridoksin hidroklorür, pH = 5'te 292 nm'de (e = 4.4 10 3) kendi absorpsiyonu ile karakterize edilir.

2. Kjeldahl yöntemi. Belirleme, vitaminin oksidasyonu sırasında oluşan amonyak tarafından gerçekleştirilir.

3. 2,6-diklorokinon klorimin (Gibbs reaktifi) ile pH 8-10'da reaksiyona dayanan ve mavi indofenollerin oluşumuyla sonuçlanan fotometrik yöntem. İndofenoller metil etil keton ile ekstrakte edilir ve ekstraktın optik yoğunluğu 660–690 nm'de ölçülür (Gibbs reaksiyonu fenolleri serbest bir para pozisyonu ile verir).

4. Piridoksin ve piridoksamin ile ışınlandığında mavi flüoresans ve piridoksal ile mavi flüoresans gözlenmesi gerçeğine dayanan bir flüoresan yöntemi.

B vitamini tayini 9 . Gıdalarda doku ve vücut sıvılarında bulunan folatların tayini önemli zorluklar içermektedir. bu nesnelerde genellikle bağlı formda bulunurlar (poliglutamatlar olarak); ek olarak, çoğu form atmosferik oksijenin, ışığın ve sıcaklığın etkilerine karşı hassastır. Folatları hidrolizden korumak için askorbik asit varlığında hidroliz önerilir.

Gıdalarda folatlar fiziksel, kimyasal ve mikrobiyolojik yöntemlerle belirlenebilir. Kolorimetrik yöntem, p-aminobenzoik asit ve ilgili maddelerin oluşumu ile pteroilglutamik asidin bölünmesine ve bunların renkli bileşiklere dönüştürülmesine dayanır. Bununla birlikte, özgüllüğün olmaması nedeniyle, bu yöntem esas olarak farmasötiklerin analizi için kullanılır.

Folatların ayrılması, saflaştırılması ve tanımlanması için kolonlar, kağıt ve ince bir adsorban tabakası üzerinde kromatografi yöntemleri de geliştirilmiştir.

PP vitamininin belirlenmesi. Gıda ürünlerinde, nikotinik asit ve amidi, koenzimlerin bir parçası olan hem serbest hem de bağlı formdadır. Niasinin kantitatif tayini için kimyasal ve mikrobiyolojik yöntemler, onun en eksiksiz izolasyonunu ve dönüşümünü önerir. ilgili formlar Hücrelerin karmaşık organik maddesinin bir parçası olan, serbest nikotinik aside dönüştürülür. Niasinin bağlı formları, ısıtıldığında asit çözeltilerine veya kalsiyum hidroksite maruz bırakılarak salınır. 0,1 MPa'lık bir basınçta 30 dakika boyunca bir otoklavda 1 M sülfürik asit çözeltisi ile hidroliz, bağlı niasin formlarının tamamen salınmasına ve nikotinamidin nikotinik aside dönüştürülmesine yol açar. Bu işleme yönteminin daha az renkli hidrolizatlar verdiği ve et ve balık ürünlerinin analizinde kullanılabileceği tespit edilmiştir. Kalsiyum hidroksit ile hidroliz, un, tahıllar, unlu mamüller, peynirler, gıda konsantreleri, sebzeler, meyveler ve meyvelerde niasin tayininde tercih edilir. Ca(OH)2, soğutulmuş çözeltilerde neredeyse tamamen çözünmeyen şekerler ve polisakkaritler, peptitler ve glikopeptitlerle bileşikler oluşturur. Sonuç olarak, Ca(OH)2 ile işleme tabi tutularak elde edilen hidrolizat, asit hidrolizata göre kimyasal belirlemeye müdahale eden daha az madde içerir.

1. Niasinin belirlenmesi için kimyasal yöntemin temeli, iki aşamada ilerleyen Koenig reaksiyonudur. İlk aşama, piridin halkasının etkileşiminin reaksiyonudur. nikotinik asit siyanojen bromür ile ikincisi, aromatik aminlerle etkileşim sonucu renkli bir glutakonik aldehit türevinin oluşmasıdır. (Siyanojen bromürün nikotinik aside eklenmesinden hemen sonra sarı bir glutakonaldehit rengi ortaya çıkar. Reaksiyon karışımına katılan aromatik aminlerle etkileşiminin bir sonucu olarak, yoğun olarak sarı, turuncu veya kırmızı renkte olan dianiller oluşur. amin (benzidin - kırmızı , sülfanilik asit - sarı) Koenig reaksiyonu, serbest a-konumuna sahip piridin ve türevlerinin fotometrik tayini için kullanılır.Metodun dezavantajı, reaksiyon hızının düşük olması nedeniyle süresidir.

CNBr almak iki şekilde mümkündür:

1. CN - + Br 2 = CNBr + Br -

2. SCN – + Br 2 + 4H20 = CNBr + SO 4 2– + 8H + + Br –

Sıcaklığa, pH'a, aromatik aminlerin kaynağına bağlı olarak bu reaksiyonun birçok modifikasyonu vardır. pH ve amin, gelişen rengin yoğunluğunu ve stabilitesini önemli ölçüde etkiler. En kararlı renk, nikotinik asidin bromrodan (bromosiyano) reaktifi ve sülfanilik asit veya metol (para-metilaminofenol sülfat) ile reaksiyon ürünleri ile verilir.

2. Nikotinik asit ve amidi, UV bölgesinde kendi absorpsiyonlarından dolayı spektrofotometrik olarak da belirlenebilir. Nikotinik asit, 262 nm'de (E = 4.4 10 3) maksimum absorpsiyon ve 215 nm'de nikotinamid (E = 9 10 3) ile karakterize edilir.

3. Niasinin kantitatif tayini için mikrobiyolojik yöntem yaygın olarak kullanılmaktadır. Basit, spesifik, ancak kimyasaldan daha uzun. Mikrobiyolojik yöntem, bunu kimyasal olarak yapmanın imkansız olduğu nesnelerde (yüksek şeker içeriği ve düşük niasin seviyesi olan yiyecekler) niasin içeriğini belirlemenizi sağlar.

b-karoten tayini. Bir dizi gıda ürününde, özellikle bitki kaynaklı karotenoidler mevcuttur. Karotenoidler (lat. karota- havuç) - sarıdan kırmızı-turuncuya doğal pigmentler; sikloheksan halkaları içeren çoklu doymamış bileşikler; Çoğu durumda molekülde 40 karbon atomu içerirler.) Bazıları (a, b-karoten, kriptoksantin vb.) insanlarda ve hayvanlarda A vitaminine dönüştürülebildiğinden, A vitamininin provitaminleridir (öncülleri). Yaklaşık on tanesi provitamin A olarak bilinir, ancak bunların en aktifi b-karotendir.

Gıda ürünlerini analiz ederken, karoten çıkarmak, konsantre etmek ve ilgili bileşiklerden arındırmak için numunenin ön işleme tabi tutulması gerekir. Bu amaçla ekstraksiyon (petrol eteri, heksan, aseton ve bunların karışımları), sabunlaştırma ve kromatografi yaygın olarak kullanılmaktadır. B-karoten belirlenirken ısıtmadan kaçınılmalıdır. Ancak bazı durumlarda, örneğin yağın b-karotene oranı 1000:1'den fazla olduğunda (süt ürünleri, hayvansal yağlar, margarin, yumurta, karaciğer) sıcak sabunlaştırma gereklidir. Sabunlaştırma, bir antioksidan varlığında gerçekleştirilir. Fazla alkali, b-karoten yıkımına yol açar. B-karoteni eşlik eden pigmentlerden ayırmak için, alüminyum oksit, magnezyum oksit ile kolonlar üzerinde adsorpsiyon kromatografisi yaygın olarak kullanılmaktadır.

1. Gıda ürünlerinde b-karoten tayini için şu anda kullanılan fizikokimyasal yöntemlerin çoğu, çözeltilerinin ışık absorpsiyon yoğunluğunun ölçülmesine dayanmaktadır. Konjuge çift bağlı bileşikler olarak karotenoidler, karakteristik UV ve görünür absorpsiyon spektrumlarına sahiptir. Absorpsiyon bandının konumu, karotenoid molekülündeki konjuge çift bağların sayısına ve kullanılan solvente bağlıdır. β-karotenin maksimum absorpsiyonu benzende 464-465 nm'de, heksanda ve petrol eterinde 450-451 nm'de gözlenir.

2. Son zamanlarda, b-karoten ve diğer karotenoidleri belirlemek için HPLC yöntemi daha sık kullanılmaktadır. Yöntem, analiz süresini ve dolayısıyla ışık ve atmosferik oksijenin etkisi altında imha olasılığını azaltmaya izin verir. Karotenoidlerin HPLC yöntemi, yöntemin sebzelerdeki a- ve b-karotenin uzamsal izomerlerini ayırma ve miktarını belirleme yeteneğini gösteren klasik bir örnektir.

B-karoteni belirlemek için kimyasal yöntemler de kullanılabilir, örneğin, A vitaminine benzer şekilde kloroformda (mavi, 590 nm) antimon (3+) klorür ve Folin reaktifi (mavi, 640-700) ile reaksiyona dayalıdır. nm). Ancak, bu reaksiyonların spesifik olmaması nedeniyle geniş uygulama alanı bulamamışlardır.

A vitamininin belirlenmesi. Vitaminin en önemli temsilcileri, daha önce de belirtildiği gibi, retinol (A1 -alkol), rentinal (A1 -aldehit), retinoik asittir (A 2).

Gıda ürünlerinde A vitamininin kantitatif tayininde kolorimetrik, floresan, direkt spektroskopi ve HPLC gibi çeşitli yöntemler kullanılmaktadır. Yöntem seçimi, bir veya daha fazla ekipmanın mevcudiyeti, çalışmanın amacı, analiz edilen malzemenin özellikleri, beklenen A vitamini içeriği ve beraberindeki safsızlıkların doğası ile belirlenir.

Vitaminin izolasyonu, nitrojen ortamında alkollü bir KOH çözeltisi ile kaynatılarak gerçekleştirilir; ve ardından petrol eteri ile ekstraksiyon.

1. A vitamini aktivitesine sahip maddelerin kantitatif tayini için, bu bileşiklerin spektrumun UV bölgesinde farklı dalga boylarında ışığı seçici olarak absorbe etme yeteneklerine dayalı olarak doğrudan spektrofotometri kullanılabilir. Absorpsiyon, belirli bir bileşiğin maksimum absorpsiyon karakteristiğinin kullanılan solventte gözlemlendiği dalga boylarında ölçüldüğünde, bir maddenin konsantrasyonu ile orantılıdır. Yöntem en basit, en hızlı ve oldukça spesifiktir. Aynı spektral bölgede absorpsiyon ile safsızlık içermeyen nesnelerde A vitamini tayininde güvenilir sonuçlar verir. Bu tür safsızlıkların mevcudiyetinde, yöntem, bir kromatografik ayırma aşaması ile kombinasyon halinde kullanılabilir.

2. Umut verici bir yöntem, retinolün UV ışınlarının etkisi altında floresan yayma kabiliyetine dayanan floresan yöntemidir (heyecan verici ışık dalga boyu 330–360 nm). Floresan maksimum 480 nm bölgesinde gözlenir. A vitamininin bu yöntemle tayini karotenoidler ve D vitamini tarafından engellenir. Müdahale edici etkiyi ortadan kaldırmak için alümina üzerinde kromatografi kullanılır. Floresan yönteminin dezavantajı pahalı ekipmandır.

3. Daha önce, en yaygın olanı, antimon klorür ile reaksiyona girerek A vitaminini belirlemek için kolorimetrik yöntemdi. Kloroform içinde bir antimon klorür çözeltisi kullanın (Carr-Price reaktifi). Reaksiyon mekanizması tam olarak kurulmamıştır ve SbCl3'teki bir SbCL 5 safsızlığının reaksiyona girdiği varsayılmaktadır. Reaksiyonda oluşan bileşik mavi renklidir. Optik yoğunluk ölçümü, 3-5 saniye boyunca 620 nm dalga boyunda gerçekleştirilir. Yöntemin önemli bir dezavantajı, gelişen rengin kararsızlığının yanı sıra SbCl3'ün yüksek hidrolizlenebilirliğidir. Reaksiyonun şu şekilde ilerlemesi bekleniyor:

Bu reaksiyon A vitamini için spesifik değildir; karotenoidler benzer bir renk verir, ancak bu bileşiklerin kromatografik olarak ayrılması, onların enterferans etkisinin ortadan kaldırılmasını mümkün kılar.

A vitamininin listelenen yöntemlerle tayini, kural olarak, yağ benzeri maddelerin alkali hidrolizi ve sabunlaşmayan tortunun organik bir çözücü ile ekstraksiyonu dahil olmak üzere bir hazırlık aşamasından önce gelir. Çoğu zaman ekstraktın kromatografik olarak ayrılması gerekir.

4. Son zamanlarda, kolon kromatografisi yerine, HPLC giderek daha fazla kullanılmaya başlandı; bu, genellikle gıda ürünlerinde aynı anda bulunan yağda çözünen vitaminleri (A, D, E, K) ayırmanıza ve bunları büyük bir doğrulukla ölçmenize olanak tanır. HPLC, özellikle vitaminlerin gıda ürünlerine girişini kontrol ederken gerekli olan çeşitli vitamin formlarının (A vitamini-alkol, izomerleri, retinol esterleri) belirlenmesini kolaylaştırır.

E vitamini tayini. "E vitamini" ortak adıyla birleştirilen madde grubu, a-tokoferolün biyolojik aktivitesine sahip olan tokol ve trienol türevlerini içerir. a-tokoferole ek olarak, biyolojik aktiviteye sahip yedi ilgili bileşik daha bilinmektedir. Hepsi ürünlerde bulunabilir. Sonuç olarak, E vitamini analizindeki ana zorluk, birçok durumda, büyük kimyasal benzerliğe sahip, ancak aynı zamanda biyolojik aktivitede farklılık gösteren ve sadece biyolojik bir yöntemle değerlendirilebilen bir grup bileşiği dikkate almanın gerekli olmasıdır. . Zor ve pahalıdır, bu nedenle fizikokimyasal yöntemler biyolojik yöntemlerin yerini neredeyse tamamen almıştır.

E vitamini tayinindeki ana aşamalar: numune hazırlama, alkali hidroliz (sabunlaştırma), sabunlaşmayan tortunun organik bir çözücü ile ekstraksiyonu, E vitamininin enterferans yapan maddelerden ayrılması ve çeşitli kromatografi türleri kullanılarak tokoferollerin ayrılması, kantitatif tayin. Tokoferoller alkali bir ortamda oksidasyona karşı çok hassastır, bu nedenle sabunlaştırma ve ekstraksiyon nitrojen atmosferinde ve bir antioksidan (askorbik asit) varlığında gerçekleştirilir. Sabunlaştırıldığında doymamış formlar (tokotrienoller) yok edilebilir. Bu nedenle, üründe bulunan tüm E vitamini formlarının belirlenmesi gerekiyorsa, sabunlaştırma, örneğin düşük sıcaklıklarda kristalizasyon gibi diğer işleme türleri ile değiştirilir.

1. E vitaminini belirlemek için çoğu fizikokimyasal yöntem, tokoferollerin redoks özelliklerinin kullanımına dayanır. Gıda ürünlerindeki tokoferol miktarını belirlemek için, ferrik demirin ferro demire indirgenmesinin tokoferollerle reaksiyonu çoğunlukla organik reaktiflerle renkli bir Fe(2+) kompleksi oluşturmak için kullanılır. En yaygın olarak kullanılan, Fe(2+)'nin kırmızı renkli bir kompleks (λ max = 500 nm) verdiği 2,2'-dipiridildir. Reaksiyon spesifik değildir. Karoten, stirenler, A vitamini vb. de buna girer.Ayrıca, renk yoğunluğu önemli ölçüde zamana, sıcaklığa ve aydınlatmaya bağlıdır. Bu nedenle, analizin doğruluğunu arttırmak için, tokoferoller, kolon, gaz-sıvı kromatografisi, HPLC ile tayine müdahale eden bileşiklerden ön olarak ayrılır. Toplam tokoferol içeriğinin (et, süt ürünleri, balık vb.) %80'inden fazlasını a-tokoferolün oluşturduğu ürünlerin E-vitamini değeri belirlenirken, genellikle tokoferol miktarının belirlenmesi ile sınırlıdır. Diğer tokoferoller (bitkisel yağlar, tahıllar, unlu mamüller, kuruyemişler) önemli miktarlarda mevcut olduğunda, bunları ayırmak için kolon kromatografisi kullanılır.

2. Tokoferollerin miktarını belirlemek için floresan yöntemi de kullanılabilir. Heksan özleri, 292 nm'lik bir uyarma dalga boyunda 325 nm'de maksimum bir flüoresansa sahiptir.

3. Tek tek tokoferollerin belirlenmesi için, HPLC yöntemi, tek bir işlemde hem ayırma hem de nicel analiz sağlayan şüphesiz ilgi çekicidir. Yöntem ayrıca yüksek hassasiyet ve doğruluk ile karakterizedir. Algılama, absorpsiyon veya floresan ile gerçekleştirilir.

D vitamininin belirlenmesi. Düşük içeriği, D vitaminine duyarlı spesifik reaksiyonların olmaması ve onu ilgili maddelerden ayırmanın zorluğu nedeniyle gıdalarda vitamin miktarının belirlenmesi son derece zordur. Yakın zamana kadar, sıçanlar veya tavuklar üzerinde biyolojik çalışmalar yapılmaktaydı. Biyolojik yöntemler, raşitojenik bir diyet uygulanan sıçanlarda (tavuklarda) raşitizmi tedavi eden veya önleyen test ürününün minimum miktarının belirlenmesine dayanır. Raşitizm derecesi radyografik olarak değerlendirilir. Bu, D vitaminini %0.01-0.2 µg konsantrasyonda belirlemenizi sağlayan oldukça spesifik ve doğru bir yöntemdir.

1. D vitamini içeriği % 1 μg'den fazla olan ürünlerin incelenmesinde, kalsiferollerin antimon klorür ile reaksiyonuna dayanan bir fotometrik yöntem kullanılabilir (pembe renkli bir ürün oluşur). Yöntem, hem kolekalsiferolün (D 3) hem de ergokalsiferolün (D 2) belirlenmesine izin verir. Analiz şu işlemlerden oluşur: sabunlaştırma (alkali hidroliz), sterollerin çökeltilmesi, kromatografi (kolon veya bölme) ve antimon klorür ile fotometrik reaksiyon. Yöntem, D vitamini içeriğini belirlemek için uygundur. Balık Yağı, yumurta, morina karaciğeri, havyar, tereyağı, vitaminle zenginleştirilmiş gıdalar. Tarif edilen yöntem zahmetli ve zaman alıcıdır.

D 2 vitamini ışıktan ve havadan korunmalıdır, aksi takdirde izomerizasyon meydana gelir. D 3 - daha kararlı.

2. Çocuk ve çocuk hastalıklarının analizinde başarıyla kullanılan ve giderek daha fazla kullanılan HPLC yöntemi daha hızlı, daha güvenilir ve daha doğru. diyet ürünleri D vitamini ile zenginleştirilmiştir.

3. Kalsiferoller, içsel UV absorpsiyonu ile karakterize edilir ve doğrudan spektrofotometri ile belirlenebilir.

Son yıllarda D vitamini tayini için kromatografik ayırma yöntemleri, özellikle ince tabaka ve gaz-sıvı kromatografisi başarıyla kullanılmaktadır. Hayvanlarda ve insanlarda D vitamini metabolizmasını incelemek için yapılan deneysel çalışmalarda, silika jel veya alüminyum oksit üzerinde ince tabaka veya kolon kromatografisi ile kombinasyon halinde radyokimyasal yöntemler yaygın olarak kullanılmaktadır.

K vitamininin belirlenmesi. K vitaminini belirlemek için fiziksel, kimyasal, biyolojik yöntemlerin yanı sıra K vitamininin UV radyasyonuna duyarlılığına dayalı spektrografik yöntemler kullanılır.

2-metil-1,4-naftokinonların tayini için, bir dizi reaktifle verdikleri renk reaksiyonlarına dayalı olarak birçok kolorimetrik yöntem önerilmiştir: 2,4-dinitrofenilhidrazin, sodyum N,N-dietilditiyokarbamat, tetrazolyum tuzları, vb. Ancak tüm bu yöntemler ve diğer bir dizi fiziksel ve kimyasal yöntem yeterince spesifik değildir ve onların yardımıyla elde edilen sonuçlar, insan ve hayvanların gıda ürünlerinde, organlarında ve dokularında K vitamini içeriğini belirlemek için çok göreceli değere sahiptir. Kolorimetrik ve spektrofotometrik yöntemlerle, kromatografi, saflaştırma ve K vitaminlerinin kolonlar, kağıt veya ince bir adsorban tabakası üzerinde ayrılması ile kombinasyon halinde tatmin edici sonuçlar elde edilir.

Giriş…………………………………………………………2

1. Vitamin belirleme yöntemlerine genel bakış…………………3

2. Vitamin tayini için kromatografik yöntemler…………5

3. Vitaminleri belirlemek için elektrokimyasal yöntemler…………10

4. Sıyırma voltametrik yöntemi belirlemek için

suda çözünen vitaminler B 1 B 2 gıdalarda………..13

Sonuç………………………………………………………...18

giriiş

Şu anda, piyasada çok bileşenli kuru karışımlar olan insanlar ve hayvan yemleri için çok sayıda güçlendirilmiş gıda ürünü ortaya çıkmıştır. Bu tür ürünlerin yelpazesi oldukça geniş bir şekilde sunulmaktadır. Bunlar, her şeyden önce, biyolojik olarak aktif gıda takviyeleri, ön karışımlar, hayvanlar ve kuşlar için karma yemler, multivitamin preparatlarıdır. Bu tür ürünlerin kalitesi için kriter, vitaminlerin içeriği ve özellikle miktarı düzenleyici belgeler ve sıhhi kalite standartları tarafından düzenlenen suda çözünen ve yağda çözünen vitaminler gibi hayati olanlar için analizleri olabilir.

Vitamin tayini için çeşitli yöntemler kullanılmaktadır. Yaygın olarak kullanılan optik analiz yöntemleri zahmetlidir, zaman alıcıdır ve pahalı reaktifler gerektirir; kromatografik yöntemlerin kullanımı pahalı ekipman kullanımı nedeniyle karmaşıktır. Her yıl ürün yelpazesi genişliyor ve gıda ürünlerinin üretimi artıyor, tarif geliştiriliyor. bebek maması. Bu da, ürünlerin kalite kontrolüne ve vitaminlerin belirlenmesine yönelik yöntemlerin iyileştirilmesine yönelik artan taleplere yol açar. Gıda hammaddelerinin ve gıda ürünlerinin kalitesi için biyomedikal gereklilikler ve sıhhi standartlar, çeşitli amaçlara yönelik bebek maması ürünlerinin çoğu türünün ve grubunun besin değerini karakterize eder.

1. Vitamin belirleme yöntemlerine genel bakış

Hemen hemen tüm vitaminler, yüksek sıcaklık, ışık, atmosferik oksijen, nem ve diğer faktörlerin etkisi altında kolayca oksitlenir, izomerleşir ve yok edilir.

C vitamini (askorbik asit) belirlemek için mevcut yöntemlerden en yaygın olarak kullanılan yöntem, askorbik asidin indirgeme özelliklerine ve kabiliyetine dayanan GOST 24556-81'e göre 2,6-diklorofenolindofenol çözeltisi ile görsel ve potansiyometrik titrasyondur. 2,6-DCPIP'yi azaltmak için. Askorbik asit eklendiğinde bu indikatörün koyu mavi rengi renksiz hale gelir. Test ürününün ekstraktının hazırlanması önemlidir. En iyi özütleyici, askorbat oksidazı inaktive eden ve proteinleri çökelten %6'lık bir metafosforik asit çözeltisidir.

Bitkisel hammaddeler, konsantreler ve alkolsüz içeceklerdeki karoten, GOST 8756.22-80'e göre fizikokimyasal yöntemle kontrol edilir. Yöntem, organik bir çözücü ile ürünlerden ekstraksiyon işleminde elde edilen bir çözeltide karotenin kütle fraksiyonunun fotometrik olarak belirlenmesine dayanır. Solüsyon, kolon kromatografisi kullanılarak eşlik eden renklendirici maddelerden ön saflaştırılır. Karoten, organik çözücülerde (eter, benzin vb.) kolayca çözünür ve onlara sarı bir renk verir. Karotenin kantitatif tayini için alüminyum oksit ve magnezyum oksit içeren kolonlarda adsorpsiyon kromatografisi kullanılır. Bir kolon üzerindeki pigmentlerin bu şekilde belirlenmesi, adsorbanın aktivitesine, pigmentlerin miktarına ve ayrılacak olan karışımdaki diğer bileşenlerin varlığına bağlıdır. Kuru bir alüminyum oksit karışımı karoteni tutarken, ıslak bir karışım diğer boyaların çözeltiye geçmesine izin verir.

Tiamin esas olarak bir dizi enzimin aktif grubu olan difosforik ester - kokarboksilaz formunda bağlı haldedir. Asit hidrolizi yardımıyla ve enzimlerin etkisi altında tiamin bağlı halden salınır. Bu yöntem, tiamin miktarını belirler. B1 vitamini içeriğini hesaplamak için gıda ürünlerinde tiamin belirlemek için kullanılan bir florometrik yöntem kullanılır. Tiaminin, bütil alkolde yoğun floresan veren kalsiyum ferrisiyanür ile alkali bir ortamda tiyokrom oluşturma yeteneğine dayanır. İşlemin yoğunluğu, EF-ZM florometresinde kontrol edilir.

Yiyecek ve içeceklerde riboflavin, bağlı halde, yani bir proteinle bağlantılı fosfor esterleri formunda bulunur. Ürünlerdeki riboflavin miktarını belirlemek için, asit hidrolizi ve enzim preparatları ile muamele ederek bağlı durumundan kurtarmak gerekir. Alkolsüz içeceklerdeki B1 vitamini, dokularda kolayca hidrolize olabilen ve sıkıca bağlı riboflavin formlarının miktarını belirlemek için kimyasal bir yöntem kullanılarak hesaplanır. Yöntem, riboflavinin sodyum hiposülfit ile indirgenmesinden önce ve sonra floresan yeteneğine dayanmaktadır. Fenolik bileşiklerin toplam içeriğinin belirlenmesi. Bunun için, alkali bir ortamda bir reaktif ile polifenollerin etkisi altında tungstik asidin indirgenmesi sırasında mavi komplekslerin oluşumuna dayanan Folin-Denis kolorimetrik yöntemi kullanılır. Fenolik bileşikler, bir EKF-2 cihazında alev fotometrisi ile klorojenik asit ile belirlenir.

2. Vitaminlerin belirlenmesi için kromatografik yöntemler

Son zamanlarda, yüksek performanslı sıvı kromatografi yöntemi yurtdışında hızla gelişmektedir. Bu, her şeyden önce, hassas sıvı kromatografların ortaya çıkmasından ve analiz tekniklerinin geliştirilmesinden kaynaklanmaktadır. HPLC yönteminin vitamin tayininde yaygın olarak kullanılması yayın sayılarına da yansımıştır. Bugüne kadar, hem suda hem de yağda çözünen vitaminlerin analizi üzerine yayınlanmış tüm çalışmaların yarısından fazlası bu yöntemin kullanımına ayrılmıştır.Vitamin tayininde çeşitli kromatografi türleri yaygınlaşmıştır.

Tokoferolü safsızlıklardan arındırmak için ince tabaka kromatografisi kullanılır.Spektrofotometrik ve florimetrik yöntemlerle kombinasyon halinde, E vitamini de bu yöntemle kantitatif olarak belirlenir.Ayırma sırasında silufollu plakalar, kieselgel kullanılır.

Zeytinyağında tokoferol izomerlerinin analizi gaz-sıvı kromatografisi ile gerçekleştirilir. GC ve GLC analiz yöntemleri, yağda çözünen vitaminlerin analizinde son derece zor olan uçucu türevlerin hazırlanmasını gerektirir. Bu nedenle, bu belirleme yöntemleri yaygın olarak kullanılmamaktadır. Gıda ürünlerinde, farmasötiklerde ve biyolojik nesnelerde E vitamini tayini, hem normal fazda hem de ters faz koşullarında gradyan ve izokratik modlarda gerçekleştirilir. Adsorban olarak silika jel (SG), diyatomlu toprak, silasorb, ODS-Hypersil ve diğer taşıyıcılar kullanılır. Vitaminlerin analizinde sıvı kromatografide elüatın bileşimini sürekli olarak izlemek ve tayinin hassasiyetini artırmak için, UV (A, = 292 nm), spektrofotometrik (X = 295 nm), floresan (X, = 280/325 nm) ), elektrokimyasal, PMR ve kütle spektroskopik dedektörleri.

Çoğu araştırmacı, sekiz tokoferol izomerinin ve bunların asetatlarının karışımlarını ayırmak için adsorpsiyon kromatografisini kullanmayı tercih eder. Bu durumlarda, hareketli faz genellikle, küçük miktarlarda herhangi bir basit eter içeren hidrokarbonlardır. Listelenen E vitamini belirleme yöntemleri, kural olarak, numunelerin ön sabunlaşmasını sağlamaz, bu da analiz süresini önemli ölçüde azaltır.

Multivitamin preparatlarında ortak mevcudiyetlerinde yağda çözünen vitaminlerin (A, D, E, K) içeriğinin eşzamanlı kantitatif tespiti ile ayırma, hem doğrudan hem de ters fazlarda gerçekleştirilir. Bu durumda, çoğu araştırmacı HPLC'nin ters fazlı versiyonunu kullanmayı tercih eder. HPLC yöntemi, suda çözünen B1 ve B2 vitaminlerini hem aynı anda hem de ayrı ayrı analiz etmenizi sağlar. Vitaminleri ayırmak için HPLC'nin ters fazlı, iyon çiftli ve iyon değişimli versiyonları kullanılır. Hem izokratik hem de gradyan kromatografi modlarını uygulayın. Analitlerin matristen ön ayrımı, numunenin enzimatik ve asidik hidrolizi ile gerçekleştirilir.

Sıvı kromatografi yönteminin avantajları:

Aynı Anda Birden Fazla Bileşen Tanımlama

Müdahale eden bileşenlerin etkisinin ortadan kaldırılması

Kompleks, diğer analizleri gerçekleştirmek için hızla yeniden yapılandırılabilir.

Sıvı kromatograf "Chromos ZhKh-301" için ekipman ve yazılımın bileşimi ve özellikleri:

tablo 1

"Chromos ZhKh-301" kromatografının avantajları:

Eluentin akış hızını korumanın yüksek stabilitesi ve doğruluğu, yüksek basınçlı pompaların tasarımı ile sağlanır.

Kolonlara kolay erişim, cihazın tasarımı ile sağlanmaktadır.

Ayırma verimliliği, yüksek performanslı kromatografik kolonların kullanılmasıyla sağlanır.

Ölçüm limitini değiştirmeden dedektörlerin ölçüm sinyalinin geniş bir lineer aralığı, bu da hem yüksek hem de düşük konsantrasyonların tepe noktalarını yüksek doğrulukla ölçmeyi mümkün kılar.

Suda çözünen vitaminlerin kromatogram analizi:

1 askorbik asit (C),
2 nikotinik asit (Niasin),
3 piridoksin (B6),
4 tiamin (B1),
5 nikotinamid (B3),
6 folik asit (M),
7 siyanokobalamin (B12),
8 riboflavin (B2).

Yağda çözünen vitaminlerin kromatogram analizi:

1. A vitamini
2. tokol
3. y-tokoferol
4. a-tokoferol (E Vitamini)
5. lutein
6. zeaksantin
7. kriptoksantin

8. a-karoten

HPLC yönteminin yüksek duyarlılığına rağmen, enstrümanların yüksek maliyeti ve numune hazırlama süresi dikkate alındığında analiz süresinin ülkemizdeki analitik laboratuvarlarda kullanımını önemli ölçüde kısıtlamaktadır.

Bitmiş ürünlerin besin değerini belirlerken ve ayrıca güçlendirilmiş ürünlerin üretimini kontrol ederken, konsantre gıda ve sebze kurutma üretim süreçlerinin derinlemesine incelenmesiyle, aşağıdaki vitaminlerin içeriği belirlenir: C vitamini (askorbik asit) , B1 (tiamin), B2 (riboflavin), PP (nikotinik asit), asit), karoten (provitamin A).

Vitamin tayini için numunelerin hazırlanması.İncelenen ürünlerin numuneleri analizden hemen önce hazırlanır. Taze meyve ve sebzeleri analiz ederken, numuneler, bir bıçakla (lahana, soğan) veya bir rende (patates, kök bitkileri) ile hızlı bir şekilde kıyılmış uzunlamasına parçalar şeklinde paslanmaz çelik bir bıçakla tek tek numunelerden kesilir, iyice karıştırılır. ve ortaya çıkan homojen kütleden en az 200 numunelik bir numune alınır ve hemen araştırma için gönderilir.

Taze çilek ve küçük sulu meyvelerönceden ezilmemiş; ortalama numuneden bir kavanoza alınır farklı yerler birkaç çilek, meyve, karıştırın ve analiz için bir örnek alın. Kemikler meyvelerden ve meyvelerden taşlarla çıkarılır ve daha sonra yukarıda açıklandığı gibi ilerler.

En az 50 gr kuru meyve ve sebzeler bir laboratuvar değirmeninde veya makasla ezilir ve ortaya çıkan ezilmiş malzeme, öğütülmüş tıpalı bir kavanoza dökülür. Laboratuvar analizi için iyice karıştırılmış kütleden bir numune alınır.

En az 200 g miktarındaki gıda konsantreleri laboratuvar değirmeninde kırılır, karıştırılır ve analiz için numune alınır.

En az 100 gr'lık vitaminli süt yemi konsantreleri (briket halinde) bir havanda ezilip öğütülür, iyice karıştırılır ve analiz için numune alınır.

En az 50 g miktarındaki toz ürünler, araştırma için numune almadan önce iyice karıştırılır.

Sıvı, püre ve macunsu ürünlerin çalışmasında, numunenin iyice karıştırılmasından sonra analiz için numuneler alınır.

C vitamini tayini

C vitamini, l-askorbik asit (C6H8O6) gıdalarda iki şekilde bulunabilir: indirgenmiş ve oksitlenmiş (dehidroaskorbik asit).

Askorbik asit tayini için kantitatif kimyasal yöntemler, indirgeme özelliklerine dayanmaktadır. İlaçlarda ve gıda ürünlerinde askorbik asit içeriğini belirlemenin ana yöntemleri indofenol veya iyodometrik titrasyondur. Kullanılan indofenol reaktifi - 2,6-diklorofenolindofenol, mavi, askorbik asit titrasyonu sırasında indirgenir ve renksiz bir löko bileşiğine dönüşür. Reaksiyonun sonu, asidik bir ortamda pembe bir renge sahip olan göstergenin fazlalığından kaynaklanan pembe renkteki test çözeltisinin rengiyle değerlendirilir. Üründeki C vitamini içeriği, titrasyon için kullanılan indofenol miktarı ile belirlenir. İyodometrik titrasyonda, bir potasyum iyodat çözeltisi kullanılır, nişasta bir gösterge görevi görür.

Gıda ürünlerinde C vitamini belirlenirken, indofenol titrasyon yöntemleri kullanılır: tahkim, hidrojen sülfür kullanarak ve kontrol (basitleştirilmiş). Yöntem seçimi, test ürününün özelliklerine ve analizin amacına bağlıdır.

Tahkim yöntemi (hidrojen sülfür kullanılarak indofenolik)

Beklenen C vitamini içeriğine bağlı olarak, 0.01 g hassasiyetle alınan test ürününden 10-50 g tartılır, %5'lik bir çözelti kullanılarak kantitatif olarak alınır. asetik asit bir ölçülü balona (veya silindire) aktarılır ve şişenin içeriği aynı asitle 50-100 ml'lik bir hacme ayarlanır. Konsantreleri ve kurutulmuş sebze ve meyveleri analiz ederken, 5-10 g'lık bir test kısmı, 5-10 g cam tozu veya kuvars kumu (önceden demir safsızlıklarından temizlenmiş, yıkanmış ve kalsine edilmiş) ve üç katı miktarda bir havanda öğütülür. test kısmına göre %5'lik bir çözelti asetik asit. Öğütme sırasında analiz edilen ürün tamamen asetik asit ile kaplanmalıdır. Dikkatlice öğütülmüş karışım, 10 dakika demlenmeye bırakılır, daha sonra harç içeriği, tortuyu aktarmamaya çalışarak bir huniden bir ölçülü balona (veya silindire) dökülür. Harç, huni ve çubuk birkaç kez %5'lik asetik asit çözeltisi ile durulanır ve her seferinde tortunun çökmesi sağlanır. Yıkama sıvıları bir ölçülü balon (veya silindir) içindeki test çözeltisine dökülür ve alınan numunenin boyutuna ve beklenen C vitamini içeriğine bağlı olarak 50-100 ml'lik bir hacme ayarlanır. veya silindir iyice karıştırılır ve santrifüjlenir veya bir pamuk tabakasından hızla süzülür.

Elde edilen asetik asit ekstraktının 10 ml'si bir pipet ile 60-80 ml kapasiteli bir şişe, beher veya santrifüj tüpüne aktarılır ve buraya 0,4 gr kalsiyum karbonat ve 5 ml %5'lik solüsyondan ilave edilerek çözelti oluşturulur. gerekli pH ve çözeltiyi berraklaştırın, %5'lik bir asetik asit çözeltisi içinde hazırlanan kurşun asetat. Kalsiyum karbonat ilavesine köpürme eşlik ettiği için bu işlem dikkatli bir şekilde yapılmalıdır. Çözelti hızla santrifüjlenir veya önceden hazırlanmış küçük katlanmış bir filtreden kuru bir şişeye süzülür.

Filtrat bulanıksa, durulama, analiz edilen ürünün asetik ekstresinin başka bir kısmı üzerinde tekrarlanır. Buna 2, 3 veya 4 kat artırılmış kalsiyum karbonat ve %5 kurşun asetat çözeltisi ekleyin, ardından yukarıda belirtildiği gibi süzülür veya santrifüjlenir. Seyreltilmiş hidroklorik (1:1) veya sülfürik (1:3) asidin demir sülfür üzerindeki etkisiyle Kipp aygıtından elde edilen bir hidrojen sülfür akımı, 5-15 dakika boyunca şeffaf bir süzüntüden geçirilir. Kurşun sülfürün hızlı ve tam çökelmesi için çözelti, hidrojen sülfürün geçişinin başlangıcında kuvvetlice çalkalanır. Hidrojen sülfürün geçişi, kurşun sülfürün siyah çökeltisinin üzerindeki sıvı tabaka şeffaf hale geldiğinde tamamlanır. Çözelti, küçük bir kuru külsüz filtreden kuru bir şişeye süzülür ve hidrojen sülfür, mermerle doldurulmuş bir Kipp silindirinden veya aygıtından bir karbon dioksit akımıyla şeffaf süzüntüden tamamen çıkarılır ve seyreltilir (1: 1) hidroklorik asit. Karbondioksit nitrojen ile değiştirilebilir. Hidrojen sülfürün çıkarılmasının eksiksizliği için kontrol, koninin boynuna getirilen bir kurşun asetat çözeltisi ile nemlendirilmiş filtre kağıdı kullanılarak gerçekleştirilir, hidrojen sülfürün yokluğunda kağıt renksiz kalır, bir görünüm üzerindeki sarı-siyah nokta hidrojen sülfürün varlığını gösterir. Hidrojen sülfür ve inert gazın geçişi davlumbaz içinde yapılmalıdır.

5 ml %80'lik asetik asit çözeltisi ve çok fazla damıtılmış su ilk önce bir pipet ile şişeye dökülür, böylece test çözeltisi ile toplam sıvı hacmi 15 ml olur. Daha sonra hidrojen sülfürün uzaklaştırılmasından sonra elde edilen test berraklaştırılmış çözeltinin 1 ila 10 ml'si pipetlenir ve bir mikrobüret veya mikropipetten 0.001 N ile titre edilir. 30-60 saniye içinde kaybolmayan pembe bir renk görünene kadar 2,6-diklorofenolindofenol çözeltisi. Titrasyon, titre edilen çözeltinin sürekli hafif çalkalanmasıyla damlalar halinde gerçekleştirilir. Titrasyon 2 dakikadan fazla sürmemelidir. Titrasyonun bitiminden sonra, çözeltiyi kuvvetlice çalkalayarak, 2,6-diklorofenolindofenol çözeltisinden iki damla daha eklemek gerekir; test çözeltisinin rengi artarsa, reaksiyonun sonunun doğru olarak bulunduğu varsayılabilir, bu durumda indikatöre eklenen damlaların hacmi dikkate alınmaz. Titrasyon için gerekli test çözeltisi miktarını belirlerken, titrasyon için 2 ml'den fazla 0,001 N kullanılmadığı varsayılmalıdır. 2,6-diklorofenolindofenol çözeltisi.

C vitamini tayini en az iki kez yapılır ve paralel titrasyonların sonuçları 0,04 ml'den fazla farklılık göstermemelidir. C vitamini içeriği, 2-3 paralel belirlemenin aritmetik ortalaması olarak hesaplanır. Titrasyon sonuçlarını hesaplarken, kontrol tespiti için bir düzeltme yapılmalıdır: titrasyon 0.001 N. 5 ml %80 asetik asit ve 10 ml saf su karışımı içinde pembe bir renk görünene kadar 2,6-diklorofenolindofenol çözeltisi. 15 ml'lik bir hacim için genellikle 0,06-0,08 ml'ye eşit olan bu düzeltme, test çözeltisinin titrasyonu için kullanılan toplam gösterge miktarından çıkarılır.

burada V, 0.001 n miktarıdır. Titrasyon için kullanılan 2,6-diklorofenolindofenol çözeltisi, kontrol titrasyonu için düzeltme dikkate alınarak, ml; K - tam olarak 0.001 n'ye dönüştürme faktörü. 2,6-diklorofenolindofenol solüsyonu; V1, numuneye ekstraksiyon sıvısı eklendiğinde numunenin getirildiği hacimdir, ml; V2, titrasyon için alınan analiz edilen sıvının hacmidir, ml; V3, kurşun asetatın eklenmesinden sonra analiz için alınan ilk çözeltinin veya özütün hacmidir, ml; V4, kurşun asetat ile işleme tabi tutulmadan önce analiz için alınan ilk çözeltinin veya özütün hacmidir; g - ürün numunesi, g; 0.088 - 1 ml'ye karşılık gelen askorbik asit miktarı tam olarak 0.001 N. 2,6-diklorofenolindofenol çözeltisi.

C vitamini tayini direkt güneş ışığı altında yapılmamalıdır. Analizin süresi 1 saatten fazla olmamalıdır.

0.001 N hazırlanması 2,6-diklorofenolindofenol indikatör solüsyonu

0.25-0.3 g indikatör bir litrelik ölçülü balonda 600 ml distile su ile 1.5-2 saat çalkalanır (gece boyunca çözülmeye bırakılabilir), 1 litreye kadar distile su ile tamamlanır, iyice karıştırılır ve süzülür. . Gösterge çözümü 5-10 gün içinde analiz için uygundur. Karanlıkta, serin bir yerde, tercihen buzdolabında saklanmalıdır.

Gösterge titresi günlük olarak kontrol edilir. Titreyi kontrol ederken kirli bir gölgenin ortaya çıkması, analiz için gösterge çözümünün uygun olmadığını gösterir.

Gösterge çözeltisinin titresinin belirlenmesi - 2,6-diklorofenolindofenol

Gösterge çözümünün titresi iki şekilde ayarlanabilir.

İlk yol. 5 ml indikatör solüsyonuna 2.5 ml doymuş sodyum oksalat solüsyonu ekleyin ve bir mikrobüretten 0.01 N sodyum hidroksit ile titre edin. 0.02 N'de hazırlanan Mohr tuzu çözeltisi. mavi renk kaybolana ve mavimsi-yeşilimsi renk kehribar-sarıya dönüşene kadar sülfürik asit çözeltisine batırılır. Mohr tuzu çözeltisinin titresi 0.01 N'ye ayarlanmıştır. potasyum permanganat çözeltisi ve ikincisinin titresi 0.01 n'dir. geleneksel yöntemlere göre sodyum oksalat çözeltisi veya oksalik asit.

Mohr tuzu çözeltisi karanlık ve serin bir yerde saklandığında 2-3 ay analiz için uygun kalır. Mohr tuzu çözeltisinin titresi ayda en az bir kez kontrol edilir.

İkinci yol. Birkaç askorbik asit kristali (yaklaşık 1-1.5 mg), 50 ml %2'lik bir sülfürik asit çözeltisi içinde çözülür. Bu solüsyonun 5 ml'si pipetle alınır ve 2,6-diklorofenolindofenol solüsyonu ile mikrobüretten 3 dakika içinde kaybolmayan pembe bir renk oluşana kadar titre edilir. Paralel olarak, aynı hacimde (5 mi) askorbik asit çözeltisi, tam olarak 0.001 N ile başka bir mikroburetten titre edilir. bir potasyum iyodat çözeltisi (0.3568 g KJO3, 2 saat boyunca 105 ° C'de kurutulur, 1 litre damıtılmış su içinde çözülür, elde edilen 0.01 N KJO3 çözeltisi, analizden önce bir ölçülü balonda 10 kez seyreltilir) . Titrasyon, birkaç kristal (1-2 mg) potasyum iyodür ve 2-3 damla% 1 nişasta çözeltisi varlığında mavi bir renk görünene kadar gerçekleştirilir. Bu titrasyon, uygun bir şekilde porselen bir kapta gerçekleştirilir.

2,6-diklorofenolindofenol (x) çözeltisinin askorbik asit cinsinden titresi aşağıdaki formülle hesaplanır.

burada V, 0.001 n miktarıdır. Askorbik asit çözeltisinin titrasyonu için kullanılan KJO3 çözeltisi, ml; V1 - askorbik asit çözeltisinin titrasyonu için kullanılan 2,6-diklorofenolindofenol çözeltisinin miktarı, ml; 0.088 - 1 ml'ye karşılık gelen askorbik asit miktarı tam olarak 0.001 N. 2,6-diklorofenolindofenol çözeltisi, mg.

C vitamini tayini için basitleştirilmiş kontrol yöntemi

Yöntem, taze meyve ve sebzelerin kütle analizleri için kullanılır. Askorbik asidi yalnızca indirgenmiş biçimde belirlemenizi sağlar. Yöntem doğruluğu ±%20.

Belirleme yöntemi.Üründeki tahmini C vitamini içeriğine bağlı olarak, tartılmış bir bardağa 10-30 g'lık bir numune alınır ve 50 ml% 4'lük hidroklorik asit çözeltisi ile hızlı bir şekilde içine dökülür; Asitle doldurulmuş numuneler 10-15 dakika saklanabilir. Numune asitle birlikte porselen havana aktarılır. Harçtan gelen asidin bir kısmı, 100 ml kapasiteli bir ölçülü balon veya silindire dökülür ve az miktarda asit kalan numune iyice ezilir. Daha sonra harcın içeriği, hidroklorik asit kalıntısının bulunduğu aynı silindire (veya şişeye) aktarılır, porselen harcındaki tortu, aynı ölçülü balona (veya silindire) damıtılmış su ile yıkanır. Ölçülü balondaki çözelti distile su ile işarete kadar tamamlandı. Şişenin içeriği iyice karıştırılır ve gazlı bez veya su ile hızla süzülür. Bu çözeltiden bir titrasyon örneği alınır.

Öğütülmesi zor ürünlerde, porselen havanda numuneye tartılmış, iyi yıkanmış ve kalsine edilmiş kuvars kumu veya cam tozu 2-5 g eklenir. Harcın tüm içeriği bir ölçülü balona (veya silindire) aktarıldıktan ve ekstraktın hacmi 100 ml'ye getirildikten sonra, alınan her bir gram kum için ekstrakte 0.35 ml oranında saf su ilave edilir. ve tüm sıvı tekrar iyice karıştırılır.

Sıvı bir malzeme incelenirken, nihai hidroklorik asit konsantrasyonu %2 olacak şekilde %4 hidroklorik asit çözeltisi ve damıtılmış su ile bir silindir içinde seyreltilir. Hidroklorik asit, metafosforik veya oksalik asit ile değiştirilebilir. Bir özü elde etmek için, 2 N'de hazırlanan %2'lik bir metafosforik asit çözeltisi kullanın. sülfürik asit çözeltisi. İlk olarak, 2 N'de %20'lik bir metafosforik asit çözeltisi hazırlanır. sülfürik asit çözeltisi ve kullanımdan önce bu çözelti 2 N ile 10 kez seyreltilir. sülfürik asit çözeltisi.

Test ürününün tartılan bir kısmı, %2'lik metafosforik asit çözeltisi ile bir havanda öğütülür (tartılan kısım asitle kaplanmalıdır), daha sonra dereceli silindire aktarılır. Harç, az miktarda bir metafosforik asit çözeltisi ile birkaç kez yıkanır, bu çözeltiler, içeriği 100 ml'ye getirerek bir silindire dökülür. Metafosforik asit çözeltisindeki C vitamini birkaç saat stabildir. Metafosforik asit yokluğunda oksalik asit kullanılabilir. Test malzemesinin bir kısmı 20 ml %1'lik hidroklorik asit çözeltisi altında bir havanda hızla öğütülür ve daha sonra porselen havanın içeriği 100 ml'lik dereceli silindire aktarılır ve ekstrakt hacmi 1'lik bir silindir kullanılarak 100 ml'ye ayarlanır. % oksalik asit çözeltisi. Karıştırıldıktan sonra ekstrakt süzülür. 0.001 N titrasyon için 2,6-diklorofenolindofenol çözeltisi ile filtre edilen ekstrakttan 5 ml'den fazla alınmaz.

C vitamini içeriğinin titrasyonu ve hesaplanması (100 g ürün başına miligram olarak), tahkim yöntemiyle aynı şekilde gerçekleştirilir. Bir üründen iki paralel numunenin analiz sonuçları arasındaki tutarsızlık %3-4'ü geçmemelidir.

Sülfatlanmış kurutulmuş ürünlerde C vitamini tayini yöntemi

Yöntem, kükürt bileşiklerinin (asidik bir ortamda) formaldehit tarafından bloke edilmesi ve askorbik asit titrasyonuna müdahale etmemesine dayanmaktadır.

Ekstrakt 0.04-0.1 mg C vitamini içerecek şekilde alınan kurutulmuş ürünün bir kısmı, %5'lik metafosforik asit çözeltisi ile bir havanda öğütülür. Ekstrakt süzülür ve sülfitlenmemiş bir ürün olması durumunda 0.001 N ile titre edilir. 2,6-diklorofenolindofenol çözeltisi.

Sülfitlenmiş kurutulmuş bir ürünü analiz ederken, elde edilen metafosfor özütü, %50'lik bir sülfürik asit çözeltisi ile asitleştirilir ve nihai çözeltideki konsantrasyonu %4 olması gereken formaldehit ile işlenir. Çözelti 8 dakika beklemeye bırakılır ve ardından 0.001 N ile titre edilir. 2,6-diklorofenolindofenol solüsyonu yukarıdaki gibidir.

karoten tayini

Karoten tayini için yöntemler, benzin veya petrol eteri ile bitki dokularından ekstraksiyonuna ve ardından adsorpsiyon kromatografisi kullanılarak ilgili maddelerden salınmasına dayanır. Karoten kantitatif tayini, karoten içeren elde edilen çözeltilerin kolorimetrisi ile gerçekleştirilir. Karoten tayini için yöntemin üç versiyonu önerilmiştir.

Belirleme yöntemi. İlk seçenek. Karoten, alkol veya aseton ile dehidrasyonundan sonra bitki materyalinden ekstrakte edilir ve daha sonra ekstrakte geçen maddeler alkollü bir alkali çözeltisi ile sabunlaştırılır. Karoten tekrar geri kazanılır, süzüntü bir adsorpsiyon kolonundan geçirilir ve ardından süzüntünün renk yoğunluğu belirlenir.

Kırılan üründen karoten içeriğine göre 1 ila 50 gr arasında bir miktar alınır ve az miktarda yıkanmış ve kalsine edilmiş kum veya kırılmış cam ile porselen havanda öğütülür. Öğütülmüş kütleye bir havanda, öğütülmüş kütleye beş kat alkol veya aseton eklenir ve daha sonra kısımlar halinde 20-30 ml benzin veya petrol eteri eklenir. Karışım ezilir, özüt bir kağıt filtreden süzülür; ekstraktın son kısımları renksiz olana kadar ekstraksiyon tekrarlanır.

Süzüntü bir ayırma hunisine aktarılır, katmanları ayırmak için birkaç mililitre damıtılmış su eklenir: üstteki benzin, alttaki alkol veya asetondur. Alkol veya aseton tabakası başka bir ayırma hunisine dökülür ve 2 kez benzin veya petrol eteri ile yıkanır ve bu ekstraktlar ana filtrata eklenir. Birleştirilen özler bir şişeye aktarılır ve bir vakumda 50 °C'yi aşmayan bir sıcaklıkta bir su banyosunda 20-30 ml'lik bir hacme konsantre edilir. Ekstreye yaklaşık olarak eşit hacimde %5 alkollü alkali eklenir ve çözelti kaynatılarak geri akış altında bir su banyosunda 30 dakika-1 saat sabunlaştırılır. Sabunlaştırılmış çözelti bir ayırma hunisine aktarılır, birkaç mililitre su eklenir, karıştırılır ve benzin tabakası ayrılır, daha sonra 8-10 kez damıtılmış su ile yıkanır. Benzen özü bir şişeye aktarılır ve çözelti bulanık hale gelene kadar çalkalanarak susuz sodyum sülfat ile kurutulur, daha sonra süzülür ve yukarıdaki gibi 5-10 ml'lik bir hacme konsantre edilir. Yoğunlaştırılmış ekstrakt, magnezyum oksit veya alümina ile doldurulmuş bir adsorpsiyon kolonundan hafif vakum altında geçirilir. Kolon üzerine adsorbe edilen karoten, eter veya benzin ile ayrıştırılır (çözünür), kolondan çıkan sıvı renksiz hale gelene kadar adsorbandan geçirilir.

Elde edilen filtrat bir ölçülü balonda toplanır, sıvının hacmi petrol eteri veya benzin ile işarete getirilir ve karşılaştırma için standart bir azobenzen veya potasyum bikromat çözeltisi kullanılarak bir Dubosque kolorimetresinde veya bir fotoelektrik kolorimetrede kolorimetriktir.

İkinci seçenek.İlk olarak, test maddesinin sabunlaştırılması, ardından karoten, adsorpsiyon ve kolorimetri ekstraksiyonu gerçekleştirilir. Bir harç içinde öğütülmüş ezilmiş maddenin (1 ila 50 g arası) bir kısmı bir şişeye aktarılır, 20-40 ml %5 alkol alkali eklenir, 30 dakika-1 saat sabunlaştırılır ve daha sonra devam edilir. ilk yöntemde olduğu gibi.

Üçüncü seçenek (basitleştirilmiş). Bu yöntemle sabunlaşma hariç tutulur ve diğer tüm analiz aşamaları ilk yöntemdekiyle aynıdır.

Elde edilen özler su ile yıkanır, susuz sodyum sülfat üzerinde kurutulur, küçük hacimlere konsantre edilir, bir adsorban kolonundan geçirilir ve kolorimetrik olarak.

Havuçlarda karoten belirlenirken, havuçlar az miktarda başka karotenoidler içerdiğinden, pratik olarak belirlemenin sonucu üzerinde çok az etkisi olan bir adsorpsiyon kolonunun kullanımı hariç tutulabilir. Üçüncü varyanta göre analiz, karoten tayininin sonuçlarının birinci varyanta göre çalışırken elde edilen sonuçlarla çakıştığı durumlarda gerçekleştirilir. Kuru bitki materyalinde (sebzeler, meyveler, meyveler ve diğer ürünler) karoten tayini. Ezilmiş maddenin bir kısmı 2 ila 10 g arasında alınır, karoten, alkol ile ön işleme tabi tutulmadan benzin veya petrol eteri ile ekstrakte edilir. Elde edilen özler 20-30 ml'lik bir hacme konsantre edilir ve alkollü bir KOH çözeltisi ile sabunlaştırılır. Ayrıca analiz, birinci varyantta belirtildiği gibi gerçekleştirilir.

Karoten içeriğinin hesaplanması. Bir Dubosque kolorimetre ve kolorimetri için standart azobenzen veya potasyum bikromat çözeltileri kullanıldığında, test ürünündeki % mg cinsinden karoten (x) içeriği aşağıdaki formülle hesaplanır.

burada K, dönüşüm faktörüdür (1 ml standart azobenzen çözeltisine karşılık gelen miligram cinsinden karoten miktarı 0,00235'tir veya standart potasyum bikromat çözeltisi 0,00208'dir); H - standart çözelti ölçeğinin göstergesi, mm; H1 - test çözeltisinin ölçeğinin göstergesi, mm; g - incelenen ürünün numunesi, g; V, kromatografik adsorpsiyondan sonra süzüntünün hacmi, ml.

Elektrofotokolorimetre kullanırken aşağıdaki formül kullanılır:

burada H2, standart çözüm için reokord ölçeğinin okunmasıdır; H1 - test çözümü için aynı. Notasyonun geri kalanı önceki formüldekiyle aynıdır.

Standart çözeltilerin hazırlanması

azobenzen çözeltisi. 14.5 mg kimyasal olarak saf kristal azobenzen 100 ml %96 etil alkol içinde çözülür.

Potasyum bikromat çözeltisi. 360 mg üç kez yeniden kristalize edilmiş potasyum bikromat 1 litre distile suda çözülür.

Adsorpsiyon kolonunun hazırlanması

Adsorpsiyon kolonu için 12–15 cm uzunluğunda, 1–1.5 cm çapında, aşağıya doğru daraltılmış bir cam tüp kullanılır. Tüp, tıpadan bir Bunsen şişesine sokulur. Pamuk yünü, adsorpsiyon tüpünün alt kısmına yerleştirilir ve daha sonra adsorban - magnezyum oksit veya alüminyum oksit. Bunun için adsorban ve benzin veya petrol eterinden bir bulamaç hazırlanır. Yulaf 4-6 cm kolona doldurulur ve hava kabarcıklarının oluşumu önlenerek küçük çözücü kısımları ile yıkanır.

B1 vitamini tayini

B1 Vitamini (tiamin, anörin) doğal ürünlerde hem serbest hem de bağlı formda bulunur. İlk durumda, serbest tiamin veya klorür - hidroklorürdür (C12H18O4Cl2); bağlı durumda, bir protein taşıyıcıya bağlı tiamin pirofosfat esterdir, yani. karboksilazın koenzimidir. B1 vitaminini belirleme yöntemi, tiaminin alkali bir ortamda potasyum ferrisiyanür tarafından tiyokroma oksitlenme kabiliyetine ve ortaya çıkan tiyokromun ultraviyole ışınlarıyla aydınlatıldığında mavi floresan verme özelliğine dayanır. Analiz sırasında, tiyokrom, izobutil, butil veya izoamil alkol ile sulu bir alkalin solüsyondan ekstrakte edilir, böylece floresan ve bu alkollerde çözünmeyen diğer istenmeyen safsızlıklardan ayrılır.

Test maddesindeki tiamin içeriği, bir florometre kullanılarak test ve standart çözeltilerin floresan yoğunluğunun karşılaştırılmasıyla belirlenir. Tarif edilen yöntem, sadece serbest tiaminin değil, aynı zamanda toplam tiamin içeriğinin belirlenmesi için de geçerlidir. Bu durumda, tiaminin bağlı formu ilk önce fosfataz içeren bir enzim preparasyonu ile bölünmeye tabi tutulur.

B1 vitamini tayini için florometrik yöntem. Test ürününün 5-10 g miktarında tartılan bir kısmı, bir havanda 10-25 ml 0,1 N ile iyice öğütülür. sülfürik asit çözeltisi ve aynı asit çözeltisi kullanılarak kantitatif olarak şişeye aktarıldı; şişedeki toplam sıvı hacmi yaklaşık 75 ml'ye ayarlandı. Şişe bir geri akış kondansatörü (hava) ile kapatılır, kaynar su banyosuna daldırılır ve içeriğin periyodik olarak karıştırılmasıyla 45 dakika boyunca tiamin özütlenir. Serbest tiamin belirlenmesi durumunda, elde edilen ekstrakt soğutulur, pH 5.0'a 2.5 molar sodyum asetat çözeltisi eklenir, hacim distile su ile 100 ml'ye ayarlanır, karıştırılır, süzülür ve çözeltiden 10-20 ml alınır. daha fazla analiz için.

Toplam tiamin içeriği belirlenirken, ekstrakt 35-40 ° C'ye soğutulur ve buna, numunenin 1 g kuru maddesi başına 0.03 g miktarında önceden öğütülen bir enzim preparatı eklenir. 2-3 ml 2.5 molar sodyum asetat çözeltisi içeren bir harç, daha sonra ilacın sonuçtaki süspansiyonu 2-3 ml sodyum asetat çözeltisi içeren bir şişeye aktarılır ve özütün pH'ı aynı şekilde 5.0'a ayarlanır. çözüm.

Enzim preparasyonu eklendikten sonra, ekstraktlı şişe bir pamuk tıkaç ile kapatılır ve 12-15 saat 37 °C sıcaklıktaki bir termostata yerleştirilir. Daha sonra şişenin içeriği soğutulur, hacim 100'e ayarlanır. ml distile su ile karıştırıldı ve süzüldü. Serbest tiaminin ve toplam içeriğinin daha fazla belirlenmesi aynı şekilde gerçekleştirilir.

10-20 ml filtrat, tiamin adsorbe etmek için bir adsorpsiyon kolonundan geçirilir. Bu amaçla, aşağıdaki boyutlara sahip bir cam tüp (Şekil 25) kullanılır: üst kısımda - 25 mm çap ve 90 mm uzunluk, orta kısımda - 7 mm çap ve uzunluk 150 mm ve alt kısımda - 5 mm çapında (iç çap 0.03-1.0 mm) ve 30 mm uzunluğunda. Tüpün orta kısmına cam yünü yerleştirilir ve üstüne bir adsorban dökülür; ODV-3 katyon değiştirici için, kolonun yüksekliği yaklaşık 8 cm olmalıdır.Çalışmak için hazırlanan kolon, 100 ml kapasiteli dereceli bir silindirde bir mantar üzerine sabitlenir. Adsorban 10 ml %3 asetik asit solüsyonu ile yıkanır ve test solüsyonu kolondan geçirilir. Daha sonra adsorban, her biri 10 ml olan damıtılmış su ile 3 kez yıkanır ve tiamin, kaynama noktasına kadar ısıtılan 0.1 N içinde %25'lik bir potasyum klorür çözeltisi ile adsorbandan ayrıştırılır. 6-7 ml'lik kısımlarda hidroklorik asit çözeltisi. Eluat temiz bir dereceli silindirde 30 ml hacme kadar toplanır.

Elde edilen çözeltinin 5 ml'si iki küçük ayırma hunisine pipetlenir; Tiaminin oksidasyonu için 3 ml karışım (%15 sodyum hidroksit çözeltisi içinde %0.4 potasyum ferrisiyanür çözeltisi) birinci huniye eklenir, karıştırılır ve oluşan tiyokromu çıkarmak için 12 ml izobütil (bütil veya izoamil) alkol eklenir. . İkinci huniye (kontrol numunesi) 3 ml %15 sodyum hidroksit çözeltisi dökün, karıştırın ve 12 ml izobütil alkol ekleyin. Her iki huni de 2 dakika çalkalanır, karışım tamamen ayrılana kadar yalnız bırakılır, alt sulu-alkali tabaka ayrılır ve alkol tabakası bir kağıt filtreden süzülür, içine ilk önce 2-3 g susuz sodyum sülfat yerleştirilir. ; berrak filtrat kuru bir test tüpünde toplanır ve buradan florometre küvetine aktarılır. Bir alkol solüsyonu ayrıca bir ayırma hunisinde doğrudan sodyum sülfat ile dehidre edilebilir; yaklaşık 2 g reaktif ilave edildikten sonra karışım çalkalanır ve suyu alınmış solüsyon bir kağıt filtreden kuru bir test tüpüne süzülür.

Standart bir tiamin çözeltisinden bir tiyokrom çözeltisi aşağıdaki gibi hazırlanır: Dereceli pipet ile iki ayırma hunisine 1 μg tiamin içeren 1 ml çözelti eklenir, 4 ml %25 potasyum klorür çözeltisi eklenir ve ardından Bir huniye 3 ml oksidasyon karışımı ve ikinci (kontrol numunesi) - 3 ml% 15 sodyum hidroksit çözeltisi eklenir. Hunilerin içeriği karıştırılır ve her huniye 12 ml izobütil alkol eklenir. Ardından yukarıda açıklandığı gibi devam edin.

Hazırlanan alkol çözeltilerinin floresan yoğunluğu, hassas bir galvanometre kullanılarak özel ışık filtreli bir florometrede (Şekil 26) belirlenir. Floresan yoğunluğu dört solüsyonda ölçülür: iki denekte (oksitlenmiş ve oksitlenmemiş kontrol) ve iki standartta (oksitlenmiş ve oksitlenmemiş kontrol). Her küvete yaklaşık 8 ml izobütil solüsyonu eklenir.

burada A, test edilen oksitlenmiş çözelti için florometre okumasıdır; B, test edilen oksitlenmemiş çözelti için florometre okumasıdır; A1 - standart oksitlenmiş çözelti için florometre okuması; B1 - standart oksitlenmemiş bir çözelti için florometre okuması; g - incelenen ürünün numunesi, g; V1 - toplam ekstrakt hacmi, ml; V2 - adsorpsiyon için alınan ekstrakt hacmi, ml; V3 - toplam elüat hacmi, ml; V4, oksidasyon için alınan elüatın hacmidir, ml; 1000 - dönüşüm faktörü, mg.

Temel reaktiflerin ve müstahzarların hazırlanması

1. Tiamin standart solüsyonu. 10 mg kristalli tiamin klorür, 0.001 N içinde çözülür. 100 ml kapasiteli bir ölçülü balonda %25 alkol hidroklorik asit çözeltisi. Karanlık bir şişede serin bir yerde saklandığında 1-1,5 ay içinde çözelti değişmez. Bir çalışma solüsyonu hazırlamak için 100 ml'lik bir şişeye 1 ml standart solüsyon eklenir ve işarete kadar distile su ile seyreltilir; çözelti analizden önce hazırlanır, 1 ml'de 1 μg tiamin içerir.

2. 2.5 molar sodyum asetat çözeltisi. 340 g sodyum asetat distile suda çözülür ve hacim 1 litreye ayarlanır.

3. %25 potasyum klorür çözeltisi. 250 g potasyum klorür distile suda çözülür, 8.5 ml konsantre hidroklorik asit eklenir ve hacim su ile 1 litreye ayarlanır.

4. Oksidasyon karışımı - %15 sodyum hidroksit solüsyonunda %0.04 potasyum ferrisiyanür solüsyonu. Karışım analizden önce 4 ml taze hazırlanmış %1 potasyum ferrisiyanür çözeltisi ile 96 ml %15 sodyum hidroksit çözeltisi karıştırılarak hazırlanır.

5. Penicillium notatum'dan veya aspergillus oriza'dan enzim müstahzarları.

6. Adsorban katyon değiştirici SDV-3. Katyon değiştirici, %70 miktarında ve 0.13 mm - %30'dan az miktarda 0.5 ila 0.13 mm'lik bir partikül boyutuna ezilir. Demir safsızlıklarından kurtulmak için, 40-60 °C'de 2 saat boyunca her seferinde %10 hidroklorik asit ile üç kez işlemden geçirilir, distile su ile klor reaksiyonu kayboluncaya kadar yıkanır ve 60°C'yi geçmeyen bir sıcaklıkta kurutularak aktive edilir. 70 °C

B2 vitamini tayini

Vitamin B2 (riboflavin) C17H20N4O6, doğal ürünlerde hem serbest hem de bağlı halde bulunur. Üç bağlı riboflavin formu bilinmektedir: flavin mononükleotidi, flavin adenin dinükleotidi ve bir proteine ​​sıkıca bağlanan üçüncü bir form.

B2 vitamini belirleme yöntemi mülke dayanmaktadır. sulu çözeltiler ultraviyole ışığında yoğun bir sarı-yeşil floresan vermek için riboflavin. Florometrik yöntemle toplam B2 vitamini içeriği belirlenirken, riboflavin bağlı formlar enzimatik ve asit hidrolizi ile serbest bir duruma aktarılır. Analiz sırasında, doğal ürünlerden elde edilen ekstraktlar, floresan safsızlıklarının miktarını azaltmak için sırayla permanganat ve sodyum hidrosülfit ile işlenir. Daha sonra, ayrı bir numunede, sadece kalan safsızlıklara bağlı olan spesifik olmayan floresan yoğunluğu belirlenir; bu örnekte, riboflavin başlangıçta renksiz bir lökoforma indirgenir ve böylece floresansı "söndürülür". Test ürünündeki B2 vitamini içeriği hesaplanırken, toplam floresan belirleme sonucuna bir değişiklik olarak spesifik olmayan floresan hakkındaki veriler girilir.

Toplam B2 vitamini içeriğinin belirlenmesi.Ürünün bir kısmı (5-10 g), az miktarda fosfat tamponu (pH 7.8-8.0) ile bir havanda dikkatlice öğütülür ve daha sonra aynı tampon solüsyonu kullanılarak bir şişeye aktarılır ve toplam seyreltme bir orana getirilir. 1:15 veya 1: yirmi. İçindekilerin bulunduğu şişe, kaynar su banyosunda sık sık karıştırılarak 45 dakika ısıtılır, 30°C'ye soğutulur, pH değeri kontrol edilir ve asidik bölgeye kayma olması durumunda pH tekrar 7.8-'e ayarlanır. 8.0, bir fosfat tamponu ekleyerek. Ekstreye, önceden 2-3 ml fosfatlı bir harç içinde öğütülmüş numunenin 1 g kuru maddesi başına 30 mg miktarında bir enzim preparatı (tripsin, pankreatin veya penicillium notatum'dan bir preparat) eklenir. tampon veya sodyum asetat. Ekstrakt 12-20 saat 37°C'de bir termostatta tutulur; enzimatik hidroliz sırasında proteine ​​sıkıca bağlı olan riboflavin formu parçalanır. Soğutulduktan sonra öz, damıtılmış su ile toplam 1:25 veya 1:30 seyreltiye kadar seyreltilir ve kıvrımlı bir filtreden süzülür.

Küçük bir şişeye 5 ml süzüntü ekleyin, 5 ml %20 trikloroasetik asit ekleyin ve kaynar su banyosunda 10 dakika ısıtın. Çözelti soğutulur ve pH'ı 6.0'a ayarlamak için 1/4 hacim 4M dipotasyum fosfat çözeltisi eklenir. Daha sonra, floresan safsızlıkları oksitlemek için ekstrakte damla damla %4'lük bir permanganat çözeltisi eklenir; permanganat çözeltisi, özün kalıcı kırmızımsı bir rengi görünene kadar genellikle 0.2-0.4 ml miktarında eklenir.

Permanganat ile muamele edilen ekstrakt 10 dakika yalnız bırakılır ve ardından renk kaybolana kadar üzerine damla damla %3 hidrojen peroksit solüsyonu eklenir; hidrojen peroksit eklenirken ekstrakt sürekli olarak çalkalanır. 0,2 ml kalay klorür çalışma çözeltisi ve 0,1 ml %2,5 sodyum hidrosülfit çözeltisi, flüoresan safsızlıkları geri yüklemek için ekstrakte eklenir. Ekstrakt, tersinir olarak indirgenmiş riboflavini oksitlenmiş floresan forma dönüştürmek için 20 dakika kuvvetlice çalkalanır. Ekstraktın hacmi su ile 15 ml'ye ayarlanır, bulanıklık varlığında çözelti süzülür. Hazırlanan ekstrede, floresan yoğunluğu, standart çalışma riboflavin çözeltisinin floresan yoğunluğu ile karşılaştırılarak belirlenir. Bunu yapmak için, ekstrakt ve riboflavin çalışma solüsyonu (aşağıya bakınız "reaktiflerin hazırlanması") florometre küvetlerine 8-10 ml dökülür ve floresan yoğunluğu galvanometre ölçeğinde ölçülür. Daha sonra her iki küvete 0.1 g sodyum hidrojen karbonat ve 0.1 g hidrosülfit eklenir, küvetlerin içeriği karıştırılır ve floresan yoğunluğu tekrar ölçülür. Standart bir riboflavin çözeltisinde, flüoresans sıfıra söndürülürken, test ekstraktında küçük bir flüoresan kalır, bu, ekstrakt yukarıdaki reaktiflerle muamele edildiğinde tamamen çıkarılmayan flüoresan safsızlıklarının varlığından kaynaklanır. Riboflavin floresansının tamamen söndürülmesini sağlamak için numunelere 0.1 g hidrosülfit eklenir ve floresan yoğunluğu tekrar ölçülür. Tam körleme ile galvanometrenin okumaları değişmemelidir. 1 g madde (x) başına mikrogram cinsinden riboflavin içeriği, formülle hesaplanır.

A, test çözeltisi için florometre okumasıdır (ilk okuma); B - söndürmeden sonra test çözeltisi için florometre okuması (ikinci okuma); C - 1 ml'de 0.4 μg riboflavin içeren standart bir çözelti için florometre okuması; 0.4 - standart çözeltinin konsantrasyonu, μg; g - ürün numunesi, g; V - toplam seyreltme hacmi, ml.

Temel reaktiflerin hazırlanması

1. Riboflavin standart solüsyonu. 10 mg miktarındaki tartılmış bir riboflavin kısmı, 250 ml'lik bir ölçülü balonda damıtılmış su içinde çözülür. Bu çözeltinin 1 ml'si 40 mikrogram riboflavin içerir. Solüsyon soğukta ve karanlıkta saklandığında 1 ay içinde değişmez. Belirlemeden önce, 100 ml hacimsel bir çözeltiye 37.5 ml% 20'lik bir trikloroasetik asit çözeltisi, 25 ml 4-molar bir dibazik potasyum fosfat çözeltisi, 1 ml standart bir riboflavin çözeltisi ilave edilen bir çalışma çözeltisi hazırlanır. şişe ve işarete kadar su ile seyreltilir. 1 ml çalışma solüsyonu 0.4 µg riboflavin içerir.

2. Fosfat tampon karışımı (pH 7.8-8.0). 1/15 molar dibazik sodyum fosfat çözeltisi (1 l su içinde 11.876 g yeniden kristalize Na2HP04-2H2O) ve 1/15 molar dipotasyum fosfat çözeltisi (1 l su içinde 9.078 g yeniden kristalize KH2P04) hazırlayın. İlk çözeltiden 9.5 birim ve ikinci çözeltiden 0.5 birim karıştırın.

3. Kalay klorür çözeltisi. 10 g kalay klorür (SnCl2) 25 ml konsantre hidroklorik asit içinde çözülür. Elde edilen stok çözelti, oda sıcaklığında zemin tıpalı koyu renkli bir şişede saklanır. Her belirlemeden önce, 0,2 ml stok solüsyonu su ile 100 ml'ye seyrelterek bir çalışma solüsyonu hazırlayın.

4. Sodyum hidrosülfit çözeltisi. 0.25 g Na2S2O4-2H2O, 10 ml %2 sodyum bikarbonat çözeltisi içinde çözülür. Çözelti kullanımdan önce hazırlanır.

5. Enzim müstahzarları: tripsin, pankreatin veya penicillium notatum'dan bir enzim müstahzarı.

Nikotinik asit tayini (vitamin PP)

Doğal ürünlerde, PP vitamini (nikotinik asit) serbest ve bağlı formda bulunur: nikotinik asit C6H5O2N veya amidi C6H6ON2 olarak. Nikotinik asidin tiyosiyanat bromür veya camgöbeği ile etkileşimine dayanan nikotinik asidi belirlemek. Nötr veya hafif asidik bir ortamda aromatik aminlerin (anilin, metol) mevcudiyetinde elde edilen bileşik, sarı renkli bir türev verir. Test solüsyonlarının renk yoğunluğu, nikotinik asit miktarı ile doğru orantılıdır ve kolorimetrik olarak ölçülür.

Belirleme yöntemi. Ezilmiş test ürününün bir kısmı 5 g miktarında alınır, 100 ml ve 75 ml 2-n kapasiteli bir ölçülü balona aktarılır. sülfürik asit çözeltisi, şişenin hunisini ve boynunu bu asit çözeltisiyle yıkayın. Şişenin içeriği kuvvetlice karıştırılır. Şişe kaynar su banyosuna yerleştirilir ve içindekiler ara sıra karıştırarak 90 dakika ısıtılır. Daha sonra balon soğutulur, karışım distile su ile işarete getirilir, iyice karıştırılır ve kağıt filtreden süzülür. (Ortaya çıkan hidrolizat, ertesi güne kadar soğukta bırakılabilir).

25 ml süzüntü alın, 50 ml'lik bir ölçülü balona koyun, bir damla fenolftalein ekleyin ve 10 n ekleyin. Soluk pembe bir renk elde edilene kadar (yaklaşık 4 ml) sodyum hidroksit çözeltisi. Fazla alkali 1-2 damla 5 N ile elimine edilir. sülfürik asit (pembe renk kaybolana kadar). Çözelti ısıtılırsa soğutulur ve ardından 2 ml çinko sülfat çözeltisi ve 1-2 damla izoamil alkol eklenir (köpüğü yok etmek için). Ardından, şişenin içindekileri karıştırırken damla damla 4 N'lik bir çözelti ekleyin. kalın bir çinko hidroksit çökeltisi oluşana kadar kostik soda. Çökeltme, 1 N'lik bir çözelti eklenerek tamamlanır. Soluk pembe bir renk görünene kadar kostik soda. Şişeye 1-2 damla 5N ekleyin. sülfürik asit (pembe rengi kaybolana kadar) ve ara sıra karıştırarak 10 dakika bekletin. Şişedeki karışım distile su ile 50 ml'ye tamamlandı, karıştırıldı ve süzgeç kağıdından süzüldü. Elde edilen süzüntü, renk reaksiyonları için kullanılır, bu amaçla yuvarlak bir tripoda yerleştirilen zemin durduruculu özel test tüpleri kullanılır. Aynı zamanda, test çözeltilerinin renk reaksiyonlarını gerçekleştirirken, standart nikotinik asit çözeltileri ile benzer işlemler tekrarlanır. Aynı zamanda standart çözeltilere reaktifler ve deneklere aminler üzerinde kontrol sağlarlar.

Analizde kullanılan çözümlerin listesi tabloda verilmiştir. 5.

Renk reaksiyonlarını gerçekleştirmek için, iki test tüpüne 5 ml standart nikotinik asit çözeltisi dökülür (paralel belirlemeler) ve iki test tüpüne 5 ml damıtılmış su dökülür, ardından 5 ml test çözeltisi diğer dört test tüpüne dökülür. test tüpleri. Tripod içine yerleştirilen tüm test tüpleri 50 °C sıcaklıktaki bir banyoya 5 dakika daldırılır, ardından tabloya göre büret çekme altında 2 ml rhodan bromür solüsyonu eklenir. 5 (aminler için kontrol hariç). Tüplerin içindeki sıvı karıştırılır ve 50 °C sıcaklıkta 10 dakika banyoda bırakılır. Tüpler soğutulur. soğuk su oda sıcaklığına kadar, test tüpleri için yuvaları olan ahşap bir kutuya yerleştirilir, kutuyu bir kapakla kapatın ve 10 dakika karanlık bir yerde bekletin. Tüplere 3 ml metol solüsyonu eklenir, içindekiler karıştırılır ve kapalı bir kutuda karanlık bir yerde 1 saat bekletilir.

Bir saat sonra, elde edilen çözeltiler, 10 mm'lik bir tabaka kalınlığına sahip bir küvet içinde mavi ışık filtreli bir fotoelektrik kolorimetre üzerinde kolorimetriktir. Nikotinik asit içeriği aşağıdaki gibi hesaplanır. Testin (n) ve standart (n1) çözümlerinin optik yoğunluk değerleri, kontrol düzeltmeleri dikkate alınarak belirlenir.

burada A, test çözeltisinin optik yoğunluğudur; A1 - aynı, standart; B, aminler için kontrol çözeltisinin optik yoğunluğudur; B1 - reaktifler için kontrol çözeltisinin optik yoğunluğu.

Gelecekte, nikotinik asit içeriğini mg% (x) cinsinden hesaplamak için aşağıdaki formülü kullanın:

burada G, 1 ml standart çözelti içindeki nikotinik asit içeriğidir, mgc; n, kontrol solüsyonu dikkate alınarak test solüsyonunun optik yoğunluğudur; n1, kontrol çözümü dikkate alınarak standart çözümün optik yoğunluğudur; g - numune, g; V, hidrolizatın toplam hacmidir, ml; V1, çinko sülfatla temizleme için alınan hidrolizatın hacmi, ml; V2, çinko sülfat ilavesinden sonraki çözeltinin son hacmi, ml.

Reaktiflerin hazırlanması

1. Standart nikotinik asit çözeltisi (bazik). 500 mg nikotinik asit, 500 ml'lik bir şişeye, 5 ml 10 N'lik bir şişeye konur. H2SO4 ve kristaller çözündüğünde saf su ile işarete kadar tamamlayın. Bu çözeltinin 1 ml'si 1000 mikrogram nikotinik asit içerir. Solüsyon soğukta saklandığında 1 yıl için uygundur.

2. Standart çözüm - çalışıyor. 5 ml stok standart solüsyonu distile su ile 1 litreye seyreltin. Bu çözeltinin 1 ml'si 5 μg nikotinik asit içerir (çözelti günlük olarak hazırlanır).

3. Rodanbromid solüsyonu (kullanmadan önce hazırlayın). Brom suyu, brom damlalarının çözünmesi durana kadar damıtılmış suya brom eklenerek hazırlanır. Analiz için gerekli miktarda alınan buz üzerinde soğutulmuş brom suyuna, açık sarı bir renk alana kadar damla damla %10'luk bir potasyum veya amonyum tiyosiyanat çözeltisi ve ardından brom suyunun rengi tamamen değişene kadar aynı reaktiflerin %1'lik bir çözeltisi eklenir. Kabarcıkların çıkması ve bulanıklık oluşumu durana kadar yavaş yavaş, küçük porsiyonlarda 20-50 mg kalsiyum karbonat ekleyin. Çözelti, zemin tıpalı koyu renkli bir cam şişeye süzülür ve soğukta saklanır.

4. Metol solüsyonu %8 (kullanmadan önce hazırlayın). 8 g yeniden kristalize edilmiş metol, 0,5 N içinde çözülür. HC1 çözeltisi ve 100 ml kapasiteli bir dereceli silindir veya şişeye aktarılır, çözelti 0,5 N işaretine getirilir. Hcl.

Metolün yeniden kristalleştirilmesi. 500 ml 0.1 N H2S04 kaynama noktasına kadar ısıtılır, daha önce 0,7 g NaHS03 ile karıştırılmış 100 g metol kaynayan çözeltiye eklenir; karışım kaynama noktasına kadar ısıtılır. Çözelti çok renkliyse, 10 g ekleyin. aktif karbon. Karışım hemen önceden ısıtılmış bir Buchner hunisine aktarılır ve süzülür. Süzüntü bir behere aktarılır, 0.3 g sodyum bisülfit ve 700 ml %96 alkol eklenir; her şey karıştırılır, buzlu suya batırılır ve birkaç saat karanlık bir yerde bırakılır. Çöken metol kristalleri bir Buechner hunisinden süzülür, huni üzerinde bir sprey şişesinden %96 alkol ile yıkanır ve karanlıkta havada kurutulur. Yeniden kristalize edilen metol, karanlık bir yerde, zemin tıpalı koyu renkli bir cam şişede saklanır.