Spirocheta sifilisului - microbiologie cu tehnica cercetării microbiologice. Totul despre treponemul palid Proprietăți culturale ale agenților cauzali ai sifilisului

Nr. 23 Agentul cauzal al sifilisului. Taxonomie. Caracteristică. Diagnosticul microbiologic. Tratament.
Treponema paladiu; T. entericum
Morfologie: treponeame tipice cu 8-12 spire, aparatul locomotor - 3 flageli periplasmatici la fiecare pol al celulei. Pata Gram nu este percepută, conform Romanovsky-Giemsa - ușor roz, detectată prin impregnare cu argint.
proprietăți culturale: tulpină virulentă asupra animalului de companie. mediul nu crește, acumularea culturii are loc prin infectarea iepurelui în testicul. Tulpinile virulente sunt cultivate pe medii cu țesut cerebral și renal.
Proprietăți biochimice: microaerofil
Structura antigenică: complex, are proteine ​​specifice și antigene lipoide, acestea din urmă având compoziția identică cu cardiolipina extrasă din inima de taur(difosfadilglicerol)
Factori de patogenitate: adezinele sunt implicate în procesul de atașare, lipoproteinele sunt implicate în dezvoltarea proceselor imunopatologice.
Rezistenta: sensibil la uscare, raze de soare, pe obiecte rămâne până la uscare. În condiții nefavorabile, trece în forme L și formează chisturi.
Patogeneza: Cauza sifilis. De la locul porții de intrare, treponeamele intră în ganglionii limfatici regionali, unde se înmulțesc. În plus, T. pătrunde în fluxul sanguin, unde se atașează de endoteliocite, provocând endarterită, ducând la vasculită și necroză tisulară. Odată cu sângele, T. se răspândește în tot corpul, însămânțând organe: ficatul, rinichii, sistemul osos, cardiovascular și nervos.
Imunitatea: Nu se dezvoltă imunitate protectoare. Ca răspuns la antigenele patogeni, HRT se dezvoltă și procese autoimune. Imunitatea umorală este produsă împotriva antigenului lipoid al T. și este un titru de IgA și IgM.
examinare microscopica. Se efectuează cu sifilis primar în timpul apariției unui șancru dur. Material pentru cercetare: descărcare de șancru, conținuturi regionale noduli limfatici, din care se prepară un preparat de picătură „zdrobit” și se examinează într-un câmp întunecat. Cu un rezultat pozitiv, sunt vizibile fire subțiri răsucite lungi de 6-14 microni, având 10-12 bucle mici uniforme de forma corectă. Treponemul palid se caracterizează prin mișcări de tip pendul și de flexie înainte. Odată cu dezvoltarea leziunilor pe mucoasa bucală cu sifilis secundar, precum și cu localizarea unui șancru dur în cavitatea bucală, este necesar să se diferențieze treponemul palid de treponemul saprofit, care sunt reprezentanți ai microflorei normale. În acest caz, decisiv valoare de diagnostic are depistarea treponemului tipic în punctatul ganglionilor limfatici regionali.
Serodiagnostic. Reacţia Wasserman se setează simultan cu 2 antigene: 1) specific, conţinând antigenul patogen - treponem distrus ecografic; 2) nespecific - cardiolipina. Serul investigat este diluat într-un raport de 1:5 și RSK este plasat conform metodei general acceptate. Cu o reacție pozitivă, se observă o întârziere a hemolizei, cu o reacție negativă, are loc hemoliza eritrocitelor; intensitatea reacției se estimează corespunzător de la (+ + + +) la (-). Prima perioadă de sifilis este seronegativă și se caracterizează printr-o reacție Wasserman negativă. La 50% dintre pacienți, reacția devine pozitivă nu mai devreme de 2-3 săptămâni de la apariția unui șancru dur. În a doua și a treia perioadă de sifilis, frecvența reacțiilor pozitive ajunge la 75-90%. După cursul tratamentului, reacția Wasserman devine negativă. Paralel cu reacția Wasserman, se efectuează o reacție de microprecipitare cu un antigen cardiolipin nespecific și serul sanguin sau plasma inactivat studiat. Pe godeu se aplică 3 picături de ser pe o placă de plexiglas (sau pe sticlă obișnuită) și se adaugă 1 picătură de antigen cardiolipin. Amestecul este bine amestecat și rezultatele sunt luate în considerare. O reacție pozitivă cu serul sanguin al unui pacient cu sifilis se caracterizează prin formarea și pierderea de fulgi de diferite dimensiuni; cu rezultat negativ se observă opalescență uniformă a luminii.
RIF – reactie indirecta de imunofluorescenta – este specifica in diagnosticul sifilisului. O suspensie de treponeme tisulare este utilizată ca antigen. Este utilizată reacția RIF_200. Serul pacientului este inactivat în același mod ca și pentru reacția Wassermann, și diluat în raport de 1:200. Picăturile de antigen se aplică pe lamele de sticlă, se usucă și se fixează timp de 5 minute în acetonă. Apoi, serul pacientului este aplicat pe medicament, după 30 de minute este spălat și uscat. Următorul pas este tratamentul preparatului cu ser fluorescent împotriva globulinelor umane. Examinați preparatul folosind un microscop fluorescent, notând gradul de luminescență a treponemului.
Reacția RIT de imobilizare a treponemului este de asemenea specifică. O cultură vie de treponem se obține prin cultivare într-un testicul de iepure. Testiculul este zdrobit într-un mediu special în care treponeamele rămân mobile. Reacția se realizează după cum urmează: o suspensie de treponeame tisulare (mobile) este combinată într-o eprubetă cu serul de testare și se adaugă complement proaspăt. Serul este adăugat într-un tub de control în loc de serul de testare. persoana sanatoasa, în altul - în locul unui complement proaspăt, se adaugă un complement inactivat - inactiv. După menținerea la 35 °C în condiții anaerobe (anaerobe), se prepară un preparat de picătură „zdrobit” din toate eprubetele și se determină numărul de treponeme mobile și imobile într-un câmp întunecat.
Tratament: peniciline, tetracicline, medicamente care conțin bismut.

Lumea microorganismelor este extrem de diversă și sistematizată de oamenii de știință. Studiul microcosmosului viu a fost realizat în mod activ în ultimul secol. Cu toate acestea, multe boli nu sunt pe deplin înțelese nici în acest secol.

De exemplu, încă nu există un consens cu privire la originea sifilisului. Acest " boala franceza”, ca cea mai veche boală infecțioasă a omenirii, potrivit lui M. V. Milic, a apărut pe Pământ concomitent cu apariția omului.

Apropo, M.V. Milic este cel mai important sifilidolog al țării din perioada anilor 60-80, autorul a numeroase cărți și monografii despre sifilis.

Oficial, descoperirea agentului cauzal al sifilisului datează din 1905. Microbiologii germani F. Shaudin și E. Hoffmann au determinat o serie de proprietăți morfologice, culturale, biochimice ale treponemului palid, precum și unele caracteristici ale acestui microorganism, care au stat la baza taxonomiei.

În acest articol, vom analiza în detaliu caracteristicile structurale, structura antigenică, biochimică și proprietăți fiziologice agent infecțios care provoacă sifilis.

Deci, singurul agent cauzal al sifilisului uman este Treponema pallidum (treponemul palid). Aparține ordinului Spirochaetales din filum Spirochaetes.

Arata tot

1. Morfologia Treponema pallidum

Celulele Treponema pallidum au 6-15 microni lungime, 0,1-0,2 microni lățime, sunt un cilindru protoplasmatic (citoplasmă înconjurată de o membrană citoplasmatică), răsucite în spirală. Uneori, o celulă a unui microorganism seamănă cu un fir subțire în formă de tirbușon.



Figura 1 - Structura treponemului palid. OM, membrană exterioară; Ef (endoflageli sau flageli periplasmatici); LP 1, 2, lipoproteine; Pg - peptidoglican; CM - membrana citoplasmatica. (De la Cox DL, Chang P, McDowall AW și Radolf JD: Membrana exterioară, nu învelișul proteinelor gazdă, limitează antigenicitatea treponemului pallidum virulent. Infect Immun 60: 1076)

Numărul de bucle este de la 8 la 14 bucăți. Buclele, de dimensiuni identice, se păstrează în timpul oricărei mișcări a celulei, chiar și atunci când treponemul se mișcă de-a lungul sau între alte celule, de exemplu, celulele sanguine.



Figura 2 - Micrografie electronică a Treponema pallidum. (De la Fitzgerald TJ, Cleveland P, Johnson RC și colab.: Microscopie electronică cu scanare a Treponema pallidum (tulpina Nichols) atașată la celulele de mamifere cultivate. J Bacteriol 130: 1333, 1977.)

Din polii celulei, între membrană și citoplasmă, sunt localizate fibrile. O parte a fibrilei este fixată, cealaltă parte rămâne liberă. Fibrilele formează aparatul motor al treponemului pallidum, care permite mai multe tipuri de mișcare într-un mediu lichid:

1. 1 Mută.
2. 2 Rotire de-a lungul axei.
3. 3 Flexie.

Treponema pallidum este un microorganism Gram negativ. Cu toate acestea, nu se colorează conform Gram, deoarece conține particule hidrofobe care nu sunt susceptibile la coloranții cu anilină.

Când este colorat conform Romanovsky-Giemsa, capătă o culoare ușor roz. Această caracteristică a servit ca bază pentru numele specific al agentului cauzal al sifilisului.

Treponema pallidum subsp pallidum este exigent în condiții mediu inconjurator un microorganism care are intervale optime înguste de pH (7,2-7,4), Eh (-230-240 mV) și temperatură (30-37°C). Treponemele sunt inactivate rapid de căldură ușoară, frig, uscare și majoritatea dezinfectanților.

În mod tradițional, treponemele pallidum erau considerate anaerobe stricte, dar acum sunt cunoscute ca bacterii microaerofile.

2. Proprietăți culturale și biochimice

În ciuda eforturilor intense din ultimii 75 de ani, T pallidum pallidum nu a fost cultivat cu succes in vitro. Microorganismele viabile pot supraviețui timp de 18-21 de zile în medii complexe, iar replicarea limitată a fost obținută prin co-cultivare cu celule de cultură de țesut. Celelalte trei specii patogene de treponem, de asemenea, nu au fost cultivate cu succes in vitro.

Când este cultivat, treponemul palid își pierde patogenitatea, dar, totuși, păstrează unele proprietăți antigenice (această caracteristică este folosită pentru a stabili reacția Wasserman).

Cultura este cultivată în principal în testiculele iepurilor. În țesutul testicular, treponema pallidum se înmulțește, provocând orhită la animalele îndelung suferinde.

T. pallidum se reproduce prin diviziune transversală binară la o temperatură de aproximativ 37 ° C. Timpul de generare in vivo este relativ lung (30 de ore).

Treponemele sunt instabile în mediul extern.

1. 1 Out corpul uman trăiesc câteva minute, după uscare mor. Deci, la o temperatură de 40˚С, treponemele mor în câteva ore, la temperaturi peste 50˚С - în 15 minute.
2. 2 În condiții nefavorabile, microorganismul formează forme L, precum și chisturi, care, la rândul lor, sunt capabile să formeze din nou forme spiralate.

După tipul de metabolism, T. pallidum este un chemoorganoheterotrop. Aceasta înseamnă că treponemul palid folosește substanțe organice și energia legăturilor chimice ca sursă de energie pentru viață.

Datorită incapacității T. pallidum de a exista in vitro, proprietățile biochimice nu au fost studiate suficient de bine.

3. Structura antigenică

T. pallidum are o structură antigenică prost înțeleasă. Este reprezentat de un antigen proteic termolabil specific, un antigen lipoid nespecific și un antigen de natură polizaharidă.

Mai simplu spus, antigenele treponemului palid sunt în principal proteine, lipide și polizaharide ale membranei exterioare a celulei.

Lipopolizaharida (LPS) joacă un rol important perete celular bacterii. Îndeplinește funcții antigenice și toxice, fiind o endotoxină a treponemului palid.

Antigenul lipoid este similar cu extractul de țesut al inimii de bovine - cardiolipina.

4. Factori de patogenitate

Pe lângă proprietățile biochimice, factorii de patogenitate ai treponemului nu sunt bine studiați.

După intrarea în macroorganism, T. pallidum eliberează proteine ​​specifice, lipopoliproteine ​​și lipopolizaharide, care prezintă proprietăți toxice după moartea sa.

Lipoliproteinele sunt implicate în activare sistem imunitar, iar proteinele sunt similare în unele proprietăți cu hemolizinele bacteriene.

Factorii de patogenitate ai treponemului palid includ capacitatea de a elibera endotoxine și antigene lipidice, aparent din lipidele membranei mitocondriale, care au proprietatea autoantigenelor.

T. pallidum, fiind o bacterie gram-negativă, nu produce exotoxine, dar are activitate toxică împotriva anumitor celule, precum neuroblastele.

5. Tipuri de imunitate

Ca răspuns la introducerea agentului cauzal al sifilisului în corpul uman, apare un răspuns imun celular și umoral.

Imunitatea celulară este asociată cu fixarea treponemului palid la celulele organelor și țesuturilor și cu activarea ulterioară a macrofagelor, limfocitelor T. În același timp, agentul cauzal al sifilisului nu este eliminat din corpul uman.

Imunitatea umorală se caracterizează prin formarea de imunoglobuline specifice. În stadiile incipiente ale infecției, IgM se formează în corpul uman. Pe măsură ce infecția progresează, sinteza IgG este activată. IgA este sintetizată în cantități mici. Participarea și sinteza IgD și IgE nu este bine înțeleasă.

6. Sensibilitatea la medicamentele antibacteriene

Agentul cauzal al sifilisului este sensibil la aproape toate antibioticele, dar penicilinele sunt medicamentele de elecție.

Baza peretelui celular al treponemului palid este peptidoglicanul, care funcționează functie de protectie. Acest peptidoglican este „ținta” pentru principalul medicament antibacterian destinat tratamentului sifilisului - penicilina. Antibioticele din grupul penicilinei rup legăturile tetrapeptidice ale peptidoglicanului.

Când este expus la un antibiotic pe un treponem palid în creștere (posibil cu expunere prelungită), se formează forma L a bacteriei. Această formă este lipsită de perete celular, dar este încă capabilă de reproducere.

Determinarea sensibilității treponemului palid la medicamentele antibacteriene nu este efectuată.

7. Diagnosticul de laborator al sifilisului

Metodele de laborator pentru diagnosticarea sifilisului pot fi împărțite condiționat în 2 grupuri:

1. 1 Identificarea agentului cauzal al bolii din preparate biologice(conținutul șancrului, scurgeri purulente de papule, punctate din ganglionii limfatici).
2. 2 Reacții serologice.

Testele serologice sunt folosite atât pentru a verifica diagnosticul, cât și pentru a evalua eficacitatea terapiei cu sifilis. O caracteristică a serologiei sifilisului este lipsa rezultatelor pozitive ale testelor într-un stadiu incipient al bolii.

Acest lucru este explicat destul de simplu. Deci, perioada de incubație a sifilisului este în medie de 3-5 săptămâni. S-a remarcat că la persoanele asociale care abuzează de alcool, precum și la persoanele cu tuberculoză și infecție HIV, perioada de incubație diferă de media în direcția scăderii (2 săptămâni).

Perioada de incubație crește pe fondul luării diverselor medicamente antibacteriene(până la 6 luni).

În acest timp, concentrația de anticorpi nu are timp să atingă titrul diagnostic. Cu toate acestea, o persoană infectată poate avea simptome clinice. Un astfel de sifilis se numește seronegativ.

Seropozitivul se numește sifilis cu un tablou clinic viu și prezența unui titru de anticorpi de diagnostic în sânge (adică un rezultat pozitiv al testelor serologice). Dacă este lăsat netratat, sifilisul seropozitiv evoluează spre sifilis secundar, care durează câțiva ani.

8. Detectarea T. pallidum în substrat

8.1. Metodologie pentru studiul T. pallidum în „câmp întunecat”

O metodă populară de diagnosticare este detectarea treponemului palid în câmpul întunecat al unui microscop. Această metodă vă permite să observați treponemul, luați în considerare caracteristicile morfologiei și mișcării sale.

Materialul pentru cercetare este luat dintr-un șancru dur sau din granuloame și papule de eroziune. Captați cu grijă materialul precurățat cu o buclă, amestecați cu o picătură de soluție salină și aplicați pe o lamă de sticlă.

Materialul viu este studiat în câmpul întunecat al unui microscop. Pentru a face acest lucru, utilizați un condensator special, care vă permite să studiați treponemul „în toată gloria sa”.

8.2. Microscopia frotiurilor colorate conform Romanovsky-Giemsa

Pentru studiul frotiurilor fixe (uscate) se folosește metoda de colorare Romanovsky-Giemsa. Cu această colorare, alte tipuri de treponem capătă o nuanță violet, iar T. pallidum - o culoare roz pal.

Restul metodelor de cercetare, precum metoda Buri, argintarea Morozov, metoda fuchsinului simplu etc., nu au primit o aplicare practică largă din cauza conținutului lor scăzut de informații.

9. Serodiagnostic

Detectarea anticorpilor la treponemul palid se realizează pentru:

1. 1 Confirmări diagnostic clinic sifilis;
2. 2 Stabilirea diagnosticului de sifilis latent;
3. 3 Monitorizarea eficacității tratamentului;
4. 4 Confirmarea recuperării pacienților cu sifilis;
5. 5 Prevenirea sifilisului și examenul medical al populației (analizele de sânge ale anumitor categorii de persoane, de exemplu, cele cu risc).

Metodele moderne de serodiagnostic se bazează pe detectarea anticorpilor specifici și nespecifici de diferite clase.

9.1. Reacții serologice nespecifice

Se efectuează un test de sânge de laborator pentru a detecta anticorpii anti-lipidici.

• Reacția Wasserman (РВ, RW)

Este o reacție clasică nespecifică. Se bazează pe principiul fixării complementului. Se efectuează o reacție cu doi sau trei antigeni. Efectuat atât cantitativ cât și definiție calitativă anticorpi nespecifici.

RW este plasat cu cardiolipină și antigen treponemic. Acesta din urmă vă permite să creșteți specificitatea reacției și să evaluați starea imunității pacientului.

În sifilisul primar, RW este pozitiv la sfârșit perioadă de incubație, adică la aproximativ 4 săptămâni de la debutul bolii.

În studiul pacienților cu sifilis secundar, RW pozitiv este detectat la 100% dintre pacienți și la 75% dintre pacienții în stadiul de sifilis terțiar.

Adesea, RW dă rezultate fals pozitive. Ele au loc în următoarele condiții fiziologice:

1. 1 Cu alte infecții cauzate de viruși, bacterii, protozoare;
2. 2 În cazul proceselor tumorale maligne;
3. 3 Cu colagenoze;
4. 4 În timpul sarcinii târzii (după 30 de săptămâni) și după naștere;
5. 5 La persoanele sănătoase care consumă alcool, precum și după ce au consumat alimente grase.
• Reacții bazate pe aglutinarea cardiolipină (MP - RPR, VDRL)

Aceste reacții sunt o metodă de diagnosticare rapidă a sifilisului. În esență, acestea sunt microreacții efectuate cu plasmă sanguină (cea mai sensibilă metodă) și ser inactivat (al doilea cel mai sensibil).

Acestea sunt efectuate prin picurare și necesită utilizarea unui antigen special. Această metodă de serodiagnostic este efectuată pentru selectarea probelor pozitive cu examinarea ulterioară a indivizilor folosind reacții specifice.

9.2. Serodiagnostic specific

Diagnosticarea se bazează pe diverse metode detectarea anticorpilor specifici.

9.2.1. Reacția de imunofluorescență (RIF)

Ocupă o poziție de mijloc a tuturor metodelor specifice de serodiagnostic. Reacția se bazează pe principiile identificării prin microscopie fluorescentă a unui complex fluorescent asociat cu imunoglobulina umană pe suprafața unei celule patogene.

Complexul fluorescent constă din globulină umană și tioizocianat de fluoresceină. Există mai multe modificări ale acestei reacții:

1. 1 Reacție de imunofluorescență cu adsorbție;
2. Reacția 2 IgM - RIF cu adsorbție.

9.2.2. Reacția de imobilizare a Treponema pallidum (RIBT)

Reacția RIBT se bazează pe particularitatea serului de sânge infectat al oamenilor pentru a imobiliza treponemul palid.

În termeni generali, tehnica poate fi explicată astfel: în sângele pacientului se adaugă un antigen preparat din sifilom de iepure și un complement.

Anticorpii imobilizatori sunt anticorpi tardivi. Ele ating maximul până la sfârșitul primului an de boală. Această metodă nu este utilizată pentru sifilisul seronegativ primar, este considerată cea mai consumatoare de timp.

9.2.3. Imunotestul enzimatic (ELISA, ELISA)

Această metodă de diagnosticare este automatizată. Este similar ca sensibilitate și specificitate cu reacția de imunofluorescență cu adsorbție.

9.2.4. Reacția de hemaglutinare pasivă (RPHA)

Pe fondul altor studii serologice, RNHA are o sensibilitate și o specificitate mai ridicate, mai ales atunci când se utilizează un antigen de înaltă calitate.

Principiul reacției se bazează pe aglutinarea eritrocitelor purtătoare de antigene de treponema pallidum pe suprafața lor, dacă li se adaugă anticorpi specifici. Rezultatul RPHA va fi pozitiv deja la sfârșitul perioadei de incubație, adică după 3-4 săptămâni.

Având în vedere toate caracteristicile agentului cauzal al sifilisului, este posibil să se evidențieze măsurile menite să protejeze o persoană sănătoasă de infecția cu sifilis.

Deoarece boala se transmite pe cale sexuală și de contact (sifilisul domestic), merită să știți că moduri eficiente protecția sunt contracepția de barieră și conformarea reguli generale igienă.

Pagina 63 din 91

SPIROCHETE PATOGENE
Spirochetele, spre deosebire de bacterii, sunt un grup mai puțin comun de microorganisme.
Toate spirochetele nu formează spori sau capsule. Nu se colorează după Gram (gram-negative). Este dificil de cultivat pe medii nutritive. Spirochetele - saprofitele se găsesc în rezervoare bogate în deșeuri organice, în nămol, în cavitatea bucală și intestinele umane. După caracteristicile lor morfologice, spirochetele patogene sunt împărțite în trei grupuri.

1. Treponema, având forma unei spirale regulate. Aceasta include sifilisul spirochete.
2. Borrelia, având forma unui fir sertizat cu îndoituri și bucle mai largi. Acest grup include spirochetele recidivante și spirochetele lui Vincent.
3. Leptospira, care au numeroase bucle mici și terminații caracteristice în formă de cârlig (icter infecțios cu leptospira).

SYPHILIS SPIROCHETE
Agentul cauzal al sifilisului este spirocheta palida Spirochaeta pallida, descrisă pentru prima dată de F. Shaudin și E. Hoffmann în 1905. Cu 2 ani mai devreme, experimentând pe maimuțe, D.K. Zabolotny a descoperit spirocheta sifilisului.
Morfologie și proprietăți tinctoriale. O spirochetă palida este un fir foarte delicat, subțire, care refractă slab lumina cu îndoituri mici, uniforme, regulate (Fig. 104 și 105 pe insert).

Orez. 104. Treponema pallidum în câmp întunecat.
În medie, are de la 6 la 14 microni în lungime și 0,25 microni în grosime. Ea a primit numele palid în legătură cu colorarea slabă cu coloranți cu anilină și vizibilitatea slabă în starea de viață. Aceste proprietăți se datorează conținutului scăzut de nucleoproteine ​​și bogăției de lipoide din corpul spirochetei. Pentru a-l păta, utilizați metoda Romanovsky (Fig. 105) sau colorați-l, expusându-l anterior la un fel de mordant. Cea mai bună metodă pentru a detecta spirochete pallidum este examinarea în câmp întunecat. În material proaspăt, atunci când este examinat sub un ultramicroscop cu un câmp vizual întunecat, spirochete pallidum prezintă mișcări activeîn jurul axei longitudinale, precum și mișcările de translație și rotație.
Cultivare. Pe mediile nutritive obișnuite, spirocheta de sifilis nu se înmulțește. V. M. Aristovsky și A. A. Geltser au folosit cu succes un mediu nutritiv lichid constând din ser de iepure cu adăugarea unei bucăți de țesut cerebral. Suprafața mediului după însămânțare este umplută cu vaselină. În culturi, spirochetele sunt mai grosiere, mai scurte și diferă prin polimorfism. Culturile rezultate sunt lipsite de proprietăți patogene și sunt numite „culturale”, spre deosebire de „țesut”, care păstrează proprietăți patogene.
proprietăţi şi sunt susţinute în laboratoare prin treceri pe iepuri.
rezistenţă. Spirochetul palid nu este foarte rezistent la uscare și temperatura ridicata. Încălzirea până la 45-48 ° îl ucide într-o oră, până la 55 ° în 15 minute. La temperaturi scăzute mai putin sensibil. La 10°, rămâne viabil până la câteva zile. Dezinfectanții sunt nocivi. Din substanțe chimice cel mai acțiune puternică redă 1-2% soluție de fenol.
Patogenitate pentru animale. I. I. Mechnikov și D. K. Zabolotny au reușit pentru prima dată să obțină sifilis experimental la maimuțe mari. Iepurii pot fi infectați prin introducerea de material patologic în cornee, camera anterioară a ochiului, în piele, mucoasă etc. În acest caz, animalele se dezvoltă leziune primară sub forma unei scleroze tipice (șancru dur) la locul vaccinării.
Patogenia și clinica sifilisului. Singura sursă de infecție este o persoană cu sifilis. Boala se poate transmite atât prin contact direct (cel mai adesea sexual), cât și prin obiecte contaminate cu secreții sifilitice. Mâncatul din ustensile comune, împărțirea unei linguri etc. (contact indirect) poate contribui la răspândirea sifilisului în gospodărie.
Spirocheta palida intră în organism prin mucoasele și pielea deteriorate. După 3-4 săptămâni, la locul porții de intrare apare scleroza primară - un șancru dur (un ulcer cu margini dense și un fund; de unde și numele șancru dur), care caracterizează perioada primară a sifilisului.
În viitor, microbul intră în organism prin căile limfatice și circulatorii și se răspândește în tot corpul - începe a doua perioadă. Această perioadă se caracterizează prin afectarea pielii și a mucoaselor, pe care apar roseole, papule, vezicule și pustule - sifilide. A doua perioadă durează de la 2-3 luni până la câțiva ani. Dacă sifilisul nu a fost tratat suficient, începe a treia perioadă - gummy. Gumele (granuloamele) sunt grupuri celulare formate din limfocite, celule epitelioide și plasmocite. Ele pot fi în grosimea pielii, mucoaselor, interne
organe etc. Gummele ajung uneori dimensiuni mari, vasele mici din apropierea lor scad treptat în lumen și în cele din urmă se închid. În acest sens, nutriția celulelor gumatei este perturbată și distrugerea lor profundă are loc odată cu formarea de ulcere și cicatrici în orice țesut și organ.
În unele cazuri, sifilisul trece în a patra perioadă, care se caracterizează prin leziuni ale centrului sistem nervos sub forma de paralizie progresiva si taburi dorsale. Manifestari clinice sifilisul se disting prin faptul că, în majoritatea cazurilor, leziunile emergente ale pielii și mucoaselor sunt nedureroase, dispar chiar și fără intervenție medicală, recidivează și în cele din urmă dau leziuni severe ale perioadei a treia și a patra.
Imunitate. Nu există imunitate înnăscută la sifilis la oameni. De asemenea, boala transferată nu părăsește tipul de imunitate dobândită care caracterizează majoritatea bolilor infecțioase. În cazul infecției secundare a unui pacient cu sifilis, spirochetele nu mor, ci persistă și se răspândesc în tot organismul, infectând organe și țesuturi împreună cu spirochetele rămase ale infecției primare. Cu toate acestea, cu infecția secundară cu sifilis, nu există o formă primară de reacție - șancru. Aceasta este stare imunologică numită „imunitate shanker”.
Prin „imunitate” în sifilis se înțelege restructurarea imunologică a organismului, în legătură cu care natura modificări patologiceși tabloul clinic în sine. În ceea ce privește mecanismul acestei „imunități”, acesta nu se datorează unor factori umorali, deși în serul pacienților se găsesc anticorpi (lizine, aglutinine).
Diagnosticul de laborator. În prima perioadă de sifilis, diagnosticul se face cu ajutorul unui examen bacterioscopic într-un câmp întunecat sau în frotiuri colorate de material dintr-un șancru dur.
Pentru cercetare, este necesară extragerea lichidului tisular din părțile profunde ale leziunii care conțin un număr mai mare de spirochete. În acest scop, ștergeți mai întâi cu grijă suprafața șancrului cu un tampon steril înmuiat în soluție salină, apoi stoarceți o cantitate mică de fluid tisular. Dacă acest lucru nu reușește, fundul ulcerului este iritat prin răzuire ușoară cu un bisturiu sau o lingură ascuțită. Lichidul rezultat este aspirat cu o pipetă Pasteur.
O picătură de lichid este examinată cel mai bine într-un câmp întunecat, unde morfologia spirochetelor puternic iluminate și mișcările lor caracteristice sunt clar vizibile.
Spirochetele saprofite întâlnite pe organele genitale și în cavitatea bucală (pe organele genitale - Sp. refringens, în cavitatea bucală - Sp. microdentium) diferă de spirocheta palida prin morfologia lor și natura mișcării. sp. refringens are corpul mai gros, cu vertici mari, nu are mișcare înainte, Sp. microdentium diferă de spirochetul palid prin natura mișcării sale.
Se pot prepara și frotiuri de cerneală Burri (vezi pagina 51), unde forma spirochetelor alb-cenușii și vârtejurile lor sunt clar vizibile pe un fundal negru.
Pentru a studia preparatul colorat, se prepară frotiuri subțiri: așezând o picătură de lichid pe o lamă de sticlă, întindeți-o pe suprafață cu marginea celui de-al doilea pahar (la fel ca și pregătirea unui frotiu dintr-o picătură de sânge). Frotiurile se usucă la aer, se fixează în alcool metilic și se colorează timp de 12-15 ore conform Romanovsky (p. 52): spirocheta palida devine roz, ceea ce face posibilă deosebirea de alte spirochete saprofite care devin albastre (vezi Fig. . 105).

Orez. 105. Spirochetă palid în descărcare de șancră. Colorarea după Romanovsky.

O colorare atât de lungă a preparatului se explică prin faptul că spirochetul palid nu percepe bine coloranții cu anilină.
În a doua perioadă a sifilisului, când sifilidele apar pe piele și pe mucoasele, se ia și suc de țesut din zonele afectate și se examinează pentru prezența spirochetelor.
După 4-5 săptămâni de la debutul infecției se poate face un test serologic, care este cea mai comună metodă de diagnosticare a sifilisului.
Serodiagnosticul sifilisului se bazează pe formularea reacției Wasserman și a reacțiilor sedimentare.
Reacția lui Wasserman. Tehnica reacției Wassermann nu diferă de tehnica reacției de fixare a complementului. O diferență semnificativă este metoda de preparare a antigenelor, precum și titrarea acestora.
Extractele lipoide din țesuturi patologice sau normale sunt folosite ca antigene pentru reacția Wasserman. Mai activi sunt așa-numitele antigene specifice preparate din organele sifilitice, datorită cărora titrul lor ajunge de obicei la miimi de mililitru (titru 0,007, 0,05 la 1 ml etc.). Antigenele nespecifice sunt mai puțin active, prin urmare titrul lor este mai mic și se află la o sutimi de mililitru (de exemplu, titru 0,01, 0,02 per 1 ml).
La setarea reacției Wasserman se folosesc 3 antigene (cardilipină nr. 1, 2 și 3). Antigenul nr. 1-specific. Conține lipide ale spirochetei sifilitice obținute prin extracție din țesutul testicular al unui iepure infectat cu sifilis. Antigenele nr. 2 și 3 sunt nespecifice și conțin lipide tisulare normale (extracte alcoolice ale mușchilor inimii bovine cu adaos de 0,25-0,3% colesterol). Antigenul cardiolipin este un preparat purificat, trebuie diluat rapid, iar după diluare trebuie să fie ușor opalescent, dar nu tulbure. Titrul de antigen denota cantitatea care ar trebui sa fie in 1 ml de ser fiziologic si care nu intarzie hemoliza in prezenta sistemului hemolitic si a complementului.
De exemplu, dacă pe fiolă este indicat un titru de antigen de 0,05 ml, aceasta înseamnă că în timpul funcționării, antigenul trebuie diluat cu soluție salină, astfel încât să existe 0,05 ml de antigen într-un ml de lichid.

Datorită faptului că antigenele pot avea diverse proprietăți anticomplementare, înainte de reacția Wasserman, complementul este titrat nu numai în forma sa pură, ci și în prezența antigenelor. Deoarece reacția Wasserman este setată cu 3 antigene, complementul trebuie titrat cu fiecare antigen separat.
Modificarea reacției Wasserman - reacția Grigoriev-Rapoport (Tabelul 25). Această reacție se bazează pe utilizarea activității complementare a serului testat. Reacția utilizează (nu mai târziu de 36 de ore de la primire) serul activ (neîncălzit) al pacientului. Pentru efectuarea reacției sunt necesare antigene, ser hemolitic și sânge de oaie defibrinat, nespălat, filtrat prin două straturi de tifon.

Schema de reacție Grigoriev - Rapoport

În cazurile în care nu există hemoliză în serul de control, reacția se repetă și se adaugă 0,2 ml de ser negativ evident activ la 0,2 ml de ser de testare și, prin urmare, volumul soluției fiziologice adăugate scade în mod corespunzător.
Rezultatele experimentului sunt luate în considerare imediat după terminarea reacției pe baza citirilor primelor două eprubete care conțin antigenul. Rezultat pozitiv caracterizat printr-o întârziere completă a hemolizei, negativ - hemoliză completă. Controlul seric (al treilea tub fără antigen) ar trebui să aibă hemoliză completă.

Pe lângă aceste reacții, reacțiile sedimentare sunt utilizate pe scară largă pentru serodiagnosticul sifilisului, a cărui esență este interacțiunea serului pacientului inactivat cu antigenul, în urma căreia un precipitat precipită în eprubetă. Dintre acestea, reacțiile Kahn și Sachs-Vitebsky au cea mai mare aplicație.
Reacția lui Kahn. Următoarele ingrediente sunt necesare pentru stabilirea reacției Kahn: 1) ser de sânge inactivat al unei persoane bolnave, 2) un antigen Kahn special și 3) ser fiziologic.
Antigenul Kana este un extract lipoid din mușchiul inimii de oaie la care s-a adăugat colesterol. Înainte de experiment, în funcție de titrul indicat pe etichetă, antigenul este diluat după cum urmează. Antigenul este turnat într-o eprubetă curată și uscată, iar soluția fiziologică este turnată în cealaltă în cantitatea indicată pe etichetă (1; 1.1; 1.2). Apoi soluția fiziologică din al doilea tub este turnată rapid în primul tub care conține antigenul (și nu invers). Amestecul rezultat este agitat, turnându-l din eprubetă în eprubetă de 6-8 ori și lăsat timp de 10 minute la temperatura camerei pentru maturare.
Configurarea experienței. Șase tuburi de aglutinare sunt plasate într-un suport. Primele trei tuburi (1, 2 și 3) sunt experimentale, următoarele trei (4, 5 și 6) sunt de control (control antigen). Antigenul diluat după maturare este introdus cu o micropipetă în 3 tuburi experimentale și 3 tuburi de control. Micropipeta cu antigen trebuie coborâtă pe fundul eprubetei uscate fără a-i atinge pereții; astfel se realizează acuratețea măsurării antigenului. Se toarnă 0,5 ml în prima eprubetă, 0,025 ml în a 2-a și 0,0125 ml de antigen în a 3-a; aceeași cantitate de antigen se toarnă în 3 tuburi de control, respectiv. În toate tuburile experimentale se adaugă 0,15 ml de ser de testare, se adaugă aceeași cantitate de ser fiziologic în tuburile de control. Raftul cu eprubete este agitat energic timp de 3 minute pentru a amesteca serul cu antigenul și plasat într-un termostat la 37 ° timp de 10 minute. După scoaterea din termostat, adăugați 1 ml de soluție fiziologică în primul tub experimental și primul de control, 0,5 ml de soluție fiziologică la al doilea și al treilea tub experimental, de control. Se agită din nou conținutul eprubetelor și se ține cont de rezultatele reacțiilor (schema de reacție Cahn este prezentată în Tabelul 26).
Notă. Cu orice număr de seruri testate, este plasat un control al antigenului. În cazurile pozitive ale reacției, se pune un control seric. În acest scop, se toarnă într-o eprubetă într-o cantitate de 0,1 ml, se adaugă 0,3 ml de soluție salină și se agită timp de trei minute.
Reacția se înregistrează cu ochiul liber, folosind o lupă sau un aglutinoscop.
Tabelul 26
Schema de reacție Cahn

Luând în considerare reacția cu ochiul liber, fiecare eprubetă este scoasă din suport și, ușor înclinată, este ținută puțin deasupra nivelului ochilor în fața sursei de lumină. Precipitarea fulgilor (precipitat) în eprubete cu serul de testare este un indiciu al unei reacții Kahn pozitive și este indicată prin plusuri. O reacție puternic pozitivă este indicată de patru plusuri (+ + + +); se caracterizează prin precipitarea fulgilor clar vizibili în toate eprubetele și a unui lichid ușor opalescent. O reacție pozitivă este indicată de trei plusuri (+ + +) și se caracterizează printr-o floculare mai puțin pronunțată în toate eprubetele. O reacție slab pozitivă, notată cu două plusuri (+ +), se caracterizează prin sedimentare mai slabă și prezența unor particule mici într-un lichid tulbure. Formarea de particule foarte mici în suspensie într-un lichid tulbure este indicată de un plus (+). Absența sedimentului și a particulelor suspendate liber în lichid este un indicator al unei reacții negative și este indicată de minus (-). Fulgii nu trebuie observați în tuburile de control.
REACȚIA SEDIMENTARĂ CITOCOLICĂ (Tabelul 27) de Zaks-Vitebsky. Pentru această reacție, este necesar să aveți ser de testare inactivat și antigen citocol Sachs-Vitebsky, care este un extract de lipoizi din mușchii inimii bovinelor, la care se adaugă colesterol.
Tabelul 27
Schema reacției citocolice a lui Sachs - Vitebsky

Agitați 1 minut și lăsați la temperatura camerei timp de 30 de minute
Salină I 0,5 I 0,5 I 0,5
Dacă cristalele de colesterol precipită în antigen, acesta trebuie încălzit într-o baie de apă la o temperatură de 55-56 ° sau într-un termostat. Titrul antigenului este indicat pe fiolă. Antigenul se diluează cu ser fiziologic conform titrului indicat, 1 ml de antigen se adaugă rapid cu o pipetă la 2 ml de soluție salină, se amestecă bine cu aceeași pipetă și se lasă 10 minute la temperatura camerei pentru maturare.
Experiență stabilită în trei eprubete de aglutinare. În primul tub se măsoară 0,1 ml de zer studiat și se adaugă 0,05 ml de antigen diluat, se toarnă 0,05 ml de antigen diluat și 0,1 ml de soluție salină în al doilea tub și 0,1 ml de ser studiat și 0,05 ml de alcool etilic. Toate tuburile sunt agitate timp de un minut și lăsate timp de 30 de minute la temperatura camerei. Apoi se adaugă 0,5 ml la fiecare dintre ele.
soluție salină fiziologică, agitați din nou și luați în considerare rezultatele. Controlul antigenului este plasat într-o eprubetă pentru întregul experiment. Reacția Sachs-Vitebsky este luată în considerare în același mod ca și reacția Kahn.
Reacția de imobilizare a treponemelor palide. În prezent, reacția de imobilizare a treponemului este folosită și pentru a diagnostica sifilisul, a cărui esență! constă în capacitatea serului sanguin al unui pacient cu sifilis de a opri mișcarea spirochetelor. Antigenul pentru această reacție este treponemul viu obținut din țesutul testicular al unui iepure infectat. Un antigen este considerat adecvat dacă la microscopie se găsesc un număr mare de treponeme mobile. Cu trei săptămâni înainte de reacție, pacientul nu trebuie să primească antibiotice sau alte medicamente antisifilitice. Această reacție este mai specifică și mai sensibilă decât reacțiile Wasserman și sedimentare.

Chimioterapia. Pentru tratamentul sifilisului se folosesc cu succes preparate din mercur, bismut, arsen (salvarsan, novarsenol, miarsenol) și penicilină.

Pagina 63 din 91

SPIROCHETE PATOGENE
Spirochetele, spre deosebire de bacterii, sunt un grup mai puțin comun de microorganisme.
Toate spirochetele nu formează spori sau capsule. Nu se colorează după Gram (gram-negative). Este dificil de cultivat pe medii nutritive. Spirochetele - saprofitele se găsesc în rezervoare bogate în deșeuri organice, în nămol, în cavitatea bucală și intestinele umane. După caracteristicile lor morfologice, spirochetele patogene sunt împărțite în trei grupuri.

1. Treponema, având forma unei spirale regulate. Aceasta include sifilisul spirochete.
2. Borrelia, având forma unui fir sertizat cu îndoituri și bucle mai largi. Acest grup include spirochetele recidivante și spirochetele lui Vincent.
3. Leptospira, care au numeroase bucle mici și terminații caracteristice în formă de cârlig (icter infecțios cu leptospira).

SYPHILIS SPIROCHETE
Agentul cauzal al sifilisului este spirocheta palida Spirochaeta pallida, descrisă pentru prima dată de F. Shaudin și E. Hoffmann în 1905. Cu 2 ani mai devreme, experimentând pe maimuțe, D.K. Zabolotny a descoperit spirocheta sifilisului.
Morfologie și proprietăți tinctoriale. O spirochetă palida este un fir foarte delicat, subțire, care refractă slab lumina cu îndoituri mici, uniforme, regulate (Fig. 104 și 105 pe insert).

Orez. 104. Treponema pallidum în câmp întunecat.
În medie, are de la 6 la 14 microni în lungime și 0,25 microni în grosime. Ea a primit numele palid în legătură cu colorarea slabă cu coloranți cu anilină și vizibilitatea slabă în starea de viață. Aceste proprietăți se datorează conținutului scăzut de nucleoproteine ​​și bogăției de lipoide din corpul spirochetei. Pentru a-l păta, utilizați metoda Romanovsky (Fig. 105) sau colorați-l, expusându-l anterior la un fel de mordant. Cea mai bună metodă pentru a detecta spirochete pallidum este examinarea în câmp întunecat. În material proaspăt, atunci când este examinat într-un ultramicroscop cu un câmp vizual întunecat, spirocheta palid prezintă mișcări active în jurul axei longitudinale, precum și mișcări de translație și rotație.
Cultivare. Pe mediile nutritive obișnuite, spirocheta de sifilis nu se înmulțește. V. M. Aristovsky și A. A. Geltser au folosit cu succes un mediu nutritiv lichid constând din ser de iepure cu adăugarea unei bucăți de țesut cerebral. Suprafața mediului după însămânțare este umplută cu vaselină. În culturi, spirochetele sunt mai grosiere, mai scurte și diferă prin polimorfism. Culturile rezultate sunt lipsite de proprietăți patogene și sunt numite „culturale”, spre deosebire de „țesut”, care păstrează proprietăți patogene.
proprietăţi şi sunt susţinute în laboratoare prin treceri pe iepuri.
rezistenţă. Spirochetul palid nu este foarte rezistent la uscare și la temperaturi ridicate. Încălzirea până la 45-48 ° îl ucide într-o oră, până la 55 ° în 15 minute. Mai puțin sensibil la temperaturi scăzute. La 10°, rămâne viabil până la câteva zile. Dezinfectanții sunt nocivi. Dintre substanțele chimice, o soluție de 1-2% de fenol are cel mai puternic efect.
Patogenitate pentru animale. I. I. Mechnikov și D. K. Zabolotny au reușit pentru prima dată să obțină sifilis experimental la maimuțe mari. Iepurii pot fi infectați prin introducerea de material patologic în cornee, camera anterioară a ochiului, în piele, membrana mucoasă etc. În acest caz, animalele dezvoltă o leziune primară sub forma unei scleroze (chancre) tipice la nivelul locul de vaccinare.
Patogenia și clinica sifilisului. Singura sursă de infecție este o persoană cu sifilis. Boala se poate transmite atât prin contact direct (cel mai adesea sexual), cât și prin obiecte contaminate cu secreții sifilitice. Mâncatul din ustensile comune, împărțirea unei linguri etc. (contact indirect) poate contribui la răspândirea sifilisului în gospodărie.
Spirocheta palida intră în organism prin mucoasele și pielea deteriorate. După 3-4 săptămâni, la locul porții de intrare apare scleroza primară - un șancru dur (un ulcer cu margini dense și un fund - de unde și numele șancru dur), care caracterizează perioada primară a sifilisului.
În viitor, microbul intră în organism prin căile limfatice și circulatorii și se răspândește în tot corpul - începe a doua perioadă. Această perioadă se caracterizează prin afectarea pielii și a mucoaselor, pe care apar roseole, papule, vezicule și pustule - sifilide. A doua perioadă durează de la 2-3 luni până la câțiva ani. Dacă sifilisul nu a fost tratat suficient, începe a treia perioadă - gummy. Gumele (granuloamele) sunt grupuri celulare formate din limfocite, celule epitelioide și plasmocite. Ele pot fi în grosimea pielii, mucoaselor, interne
organe etc. Gummele ajung uneori la dimensiuni mari, vasele mici din jurul lor scad treptat în lumen și în cele din urmă se închid. În acest sens, nutriția celulelor gumatei este perturbată și distrugerea lor profundă are loc odată cu formarea de ulcere și cicatrici în orice țesut și organ.
În unele cazuri, sifilisul trece în a patra perioadă, care se caracterizează prin leziuni ale sistemului nervos central sub formă de paralizie progresivă și tabele dorsale. Manifestările clinice ale sifilisului se disting prin faptul că, în majoritatea cazurilor, leziunile pielii și mucoaselor care apar sunt nedureroase, dispar chiar și fără intervenție medicală, recidivează și în cele din urmă dau leziuni severe ale perioadei a treia și a patra.
Imunitate. Nu există imunitate înnăscută la sifilis la oameni. De asemenea, boala transferată nu părăsește tipul de imunitate dobândită care caracterizează majoritatea bolilor infecțioase. În cazul infecției secundare a unui pacient cu sifilis, spirochetele nu mor, ci persistă și se răspândesc în tot organismul, infectând organe și țesuturi împreună cu spirochetele rămase ale infecției primare. Cu toate acestea, cu infecția secundară cu sifilis, nu există o formă primară de reacție - șancru. Această condiție imunologică se numește „imunitate chanker”.
Prin „imunitate” în sifilis se înțelege restructurarea imunologică a organismului, în legătură cu care se modifică natura modificărilor patologice și tabloul clinic în sine. În ceea ce privește mecanismul acestei „imunități”, acesta nu se datorează unor factori umorali, deși în serul pacienților se găsesc anticorpi (lizine, aglutinine).
Diagnosticul de laborator. În prima perioadă de sifilis, diagnosticul se face cu ajutorul unui examen bacterioscopic într-un câmp întunecat sau în frotiuri colorate de material dintr-un șancru dur.
Pentru cercetare, este necesară extragerea lichidului tisular din părțile profunde ale leziunii care conțin un număr mai mare de spirochete. În acest scop, suprafața șancrului este mai întâi ștearsă temeinic cu un tampon steril înmuiat în soluție salină, apoi o cantitate mică de lichid tisular este stoarsă din acesta prin stoarcerea ușoară a fundului ulcerului. Dacă acest lucru nu reușește, fundul ulcerului este iritat prin răzuire ușoară cu un bisturiu sau o lingură ascuțită. Lichidul rezultat este aspirat cu o pipetă Pasteur.
O picătură de lichid este examinată cel mai bine într-un câmp întunecat, unde morfologia spirochetelor puternic iluminate și mișcările lor caracteristice sunt clar vizibile.
Spirochetele saprofite întâlnite pe organele genitale și în cavitatea bucală (pe organele genitale - Sp. refringens, în cavitatea bucală - Sp. microdentium) diferă de spirocheta palida prin morfologia lor și natura mișcării. sp. refringens are corpul mai gros, cu vertici mari, nu are mișcare înainte, Sp. microdentium diferă de spirochetul palid prin natura mișcării sale.
Se pot prepara și frotiuri de cerneală Burri (vezi pagina 51), unde forma spirochetelor alb-cenușii și vârtejurile lor sunt clar vizibile pe un fundal negru.
Pentru a studia preparatul colorat, se prepară frotiuri subțiri: așezând o picătură de lichid pe o lamă de sticlă, întindeți-o pe suprafață cu marginea celui de-al doilea pahar (la fel ca și pregătirea unui frotiu dintr-o picătură de sânge). Frotiurile se usucă la aer, se fixează în alcool metilic și se colorează timp de 12-15 ore conform Romanovsky (p. 52): spirocheta palida devine roz, ceea ce face posibilă deosebirea de alte spirochete saprofite care devin albastre (vezi Fig. . 105).

Orez. 105. Spirochetă palid în descărcare de șancră. Colorarea după Romanovsky.

O colorare atât de lungă a preparatului se explică prin faptul că spirochetul palid nu percepe bine coloranții cu anilină.
În a doua perioadă a sifilisului, când sifilidele apar pe piele și pe mucoasele, se ia și suc de țesut din zonele afectate și se examinează pentru prezența spirochetelor.
După 4-5 săptămâni de la debutul infecției se poate face un test serologic, care este cea mai comună metodă de diagnosticare a sifilisului.
Serodiagnosticul sifilisului se bazează pe formularea reacției Wasserman și a reacțiilor sedimentare.
Reacția lui Wasserman. Tehnica reacției Wassermann nu diferă de tehnica reacției de fixare a complementului. O diferență semnificativă este metoda de preparare a antigenelor, precum și titrarea acestora.
Extractele lipoide din țesuturi patologice sau normale sunt folosite ca antigene pentru reacția Wasserman. Mai activi sunt așa-numitele antigene specifice preparate din organele sifilitice, datorită cărora titrul lor ajunge de obicei la miimi de mililitru (titru 0,007, 0,05 la 1 ml etc.). Antigenele nespecifice sunt mai puțin active, prin urmare titrul lor este mai mic și se află la o sutimi de mililitru (de exemplu, titru 0,01, 0,02 per 1 ml).
La setarea reacției Wasserman se folosesc 3 antigene (cardilipină nr. 1, 2 și 3). Antigenul nr. 1-specific. Conține lipide ale spirochetei sifilitice obținute prin extracție din țesutul testicular al unui iepure infectat cu sifilis. Antigenele nr. 2 și 3 sunt nespecifice și conțin lipide ale țesutului normal (extracte alcoolice ale mușchilor inimii bovine cu adaos de 0,25-0,3% colesterol). Antigenul cardiolipin este un preparat purificat, trebuie diluat rapid, iar după diluare trebuie să fie ușor opalescent, dar nu tulbure. Titrul de antigen denota cantitatea care ar trebui sa fie in 1 ml de ser fiziologic si care nu intarzie hemoliza in prezenta sistemului hemolitic si a complementului.
De exemplu, dacă pe fiolă este indicat un titru de antigen de 0,05 ml, aceasta înseamnă că în timpul funcționării, antigenul trebuie diluat cu soluție salină, astfel încât să existe 0,05 ml de antigen într-un ml de lichid.

Datorită faptului că antigenele pot avea diverse proprietăți anticomplementare, înainte de reacția Wasserman, complementul este titrat nu numai în forma sa pură, ci și în prezența antigenelor. Deoarece reacția Wasserman este setată cu 3 antigene, complementul trebuie titrat cu fiecare antigen separat.
Modificarea reacției Wasserman - reacția Grigoriev-Rapoport (Tabelul 25). Această reacție se bazează pe utilizarea activității complementare a serului testat. Reacția utilizează (nu mai târziu de 36 de ore de la primire) serul activ (neîncălzit) al pacientului. Pentru efectuarea reacției sunt necesare antigene, ser hemolitic și sânge de oaie defibrinat, nespălat, filtrat prin două straturi de tifon.

Schema de reacție Grigoriev - Rapoport

În cazurile în care nu există hemoliză în serul de control, reacția se repetă și se adaugă 0,2 ml de ser negativ evident activ la 0,2 ml de ser de testare și, prin urmare, volumul soluției fiziologice adăugate scade în mod corespunzător.
Rezultatele experimentului sunt luate în considerare imediat după terminarea reacției pe baza citirilor primelor două eprubete care conțin antigenul. Un rezultat pozitiv se caracterizează printr-o întârziere completă a hemolizei, un rezultat negativ este caracterizat printr-o hemoliză completă. Controlul seric (al treilea tub fără antigen) ar trebui să aibă hemoliză completă.

Pe lângă aceste reacții, reacțiile sedimentare sunt utilizate pe scară largă pentru serodiagnosticul sifilisului, a cărui esență este interacțiunea serului pacientului inactivat cu antigenul, în urma căreia un precipitat precipită în eprubetă. Dintre acestea, reacțiile Kahn și Sachs-Vitebsky au cea mai mare aplicație.
Reacția lui Kahn. Următoarele ingrediente sunt necesare pentru stabilirea reacției Kahn: 1) ser de sânge inactivat al unei persoane bolnave, 2) un antigen Kahn special și 3) ser fiziologic.
Antigenul Kana este un extract lipoid din mușchiul inimii de oaie la care s-a adăugat colesterol. Înainte de experiment, în funcție de titrul indicat pe etichetă, antigenul este diluat după cum urmează. Antigenul este turnat într-o eprubetă curată și uscată, iar soluția fiziologică este turnată în cealaltă în cantitatea indicată pe etichetă (1-1.1-1.2). Apoi soluția fiziologică din al doilea tub este turnată rapid în primul tub care conține antigenul (și nu invers). Amestecul rezultat este agitat, turnându-l din eprubetă în eprubetă de 6-8 ori și lăsat timp de 10 minute la temperatura camerei pentru maturare.
Configurarea experienței. Șase tuburi de aglutinare sunt plasate într-un suport. Primele trei tuburi (1, 2 și 3) sunt experimentale, următoarele trei (4, 5 și 6) sunt de control (control antigen). Antigenul diluat după maturare este introdus cu o micropipetă în 3 tuburi experimentale și 3 tuburi de control. Micropipeta cu antigen trebuie coborâtă în partea de jos a eprubetei uscate fără a atinge pereții acesteia - acest lucru asigură precizia măsurării antigenului. Se toarnă 0,5 ml în primul tub, 0,025 și al treilea - 0,0125 ml de antigen - aceeași cantitate de antigen se toarnă în 3 tuburi de control, respectiv. În toate tuburile experimentale se adaugă 0,15 ml de ser de testare, se adaugă aceeași cantitate de ser fiziologic în tuburile de control. Raftul cu eprubete este agitat energic timp de 3 minute pentru a amesteca serul cu antigenul și plasat într-un termostat la 37 ° timp de 10 minute. După scoaterea din termostat, adăugați 1 ml de soluție fiziologică în primul tub experimental și primul de control, 0,5 ml de soluție fiziologică la al doilea și al treilea tub experimental, de control. Se agită din nou conținutul eprubetelor și se ține cont de rezultatele reacțiilor (schema de reacție Cahn este prezentată în Tabelul 26).
Notă. Cu orice număr de seruri testate, este plasat un control al antigenului. În cazurile pozitive ale reacției, se pune un control seric. În acest scop, se toarnă într-o eprubetă într-o cantitate de 0,1 ml, se adaugă 0,3 ml de soluție salină și se agită timp de trei minute.
Reacția se înregistrează cu ochiul liber, folosind o lupă sau un aglutinoscop.
Tabelul 26
Schema de reacție Cahn

Luând în considerare reacția cu ochiul liber, fiecare eprubetă este scoasă din suport și, ușor înclinată, este ținută puțin deasupra nivelului ochilor în fața sursei de lumină. Precipitarea fulgilor (precipitat) în eprubete cu serul de testare este un indiciu al unei reacții Kahn pozitive și este indicată prin plusuri. O reacție puternic pozitivă este indicată de patru plusuri (+ + + +) - se caracterizează prin precipitarea de fulgi vizibili în toate eprubetele și un lichid ușor opalescent. O reacție pozitivă este indicată de trei plusuri (+ + +) și se caracterizează printr-o floculare mai puțin pronunțată în toate eprubetele. O reacție slab pozitivă, notată cu două plusuri (+ +), se caracterizează prin sedimentare mai slabă și prezența unor particule mici într-un lichid tulbure. Formarea de particule foarte mici în suspensie într-un lichid tulbure este indicată de un plus (+). Absența sedimentului și a particulelor suspendate liber în lichid este un indicator al unei reacții negative și este indicată de minus (-). Fulgii nu trebuie observați în tuburile de control.
REACȚIA SEDIMENTARĂ CITOCOLICĂ (Tabelul 27) de Zaks-Vitebsky. Pentru această reacție, este necesar să aveți ser de testare inactivat și antigen citocol Sachs-Vitebsky, care este un extract de lipoizi din mușchii inimii bovinelor, la care se adaugă colesterol.
Tabelul 27
Schema reacției citocolice a lui Sachs - Vitebsky

Agitați 1 minut și lăsați la temperatura camerei timp de 30 de minute
Salină I 0,5 I 0,5 I 0,5
Dacă cristalele de colesterol precipită în antigen, acesta trebuie încălzit într-o baie de apă la o temperatură de 55-56 ° sau într-un termostat. Titrul antigenului este indicat pe fiolă. Antigenul se diluează cu ser fiziologic conform titrului indicat, 1 ml de antigen se adaugă rapid cu o pipetă la 2 ml de soluție salină, se amestecă bine cu aceeași pipetă și se lasă 10 minute la temperatura camerei pentru maturare.
Experiență stabilită în trei eprubete de aglutinare. În primul tub se măsoară 0,1 ml de zer studiat și se adaugă 0,05 ml de antigen diluat, se toarnă 0,05 ml de antigen diluat și 0,1 ml de soluție salină în al doilea tub și 0,1 ml de ser studiat și 0,05 ml de alcool etilic. Toate tuburile sunt agitate timp de un minut și lăsate timp de 30 de minute la temperatura camerei. Apoi se adaugă 0,5 ml la fiecare dintre ele.
soluție salină fiziologică, agitați din nou și luați în considerare rezultatele. Controlul antigenului este plasat într-o eprubetă pentru întregul experiment. Reacția Sachs-Vitebsky este luată în considerare în același mod ca și reacția Kahn.
Reacția de imobilizare a treponemelor palide. În prezent, reacția de imobilizare a treponemului este folosită și pentru a diagnostica sifilisul, a cărui esență! constă în capacitatea serului sanguin al unui pacient cu sifilis de a opri mișcarea spirochetelor. Antigenul pentru această reacție este treponemul viu obținut din țesutul testicular al unui iepure infectat. Un antigen este considerat adecvat dacă la microscopie se găsesc un număr mare de treponeme mobile. Cu trei săptămâni înainte de reacție, pacientul nu trebuie să primească antibiotice sau alte medicamente antisifilitice. Această reacție este mai specifică și mai sensibilă decât reacțiile Wasserman și sedimentare.

Chimioterapia. Pentru tratamentul sifilisului se folosesc cu succes preparate din mercur, bismut, arsen (salvarsan, novarsenol, miarsenol) și penicilină.

Treponema pallidum - agentul cauzal al sifilisului este inclus în genul Treponema (din latină trepo - turn, nemo - fir).

T. pallidum a fost descoperit de F. Shaudin în 1905. I. I. Mechnikov, P. Erlich, D. K. Zabolotny și alții au adus o mare contribuție la studiul sifilisului.

Morfologie. T. pallidum este un fir spiralat de 8-18 × 0,08-0,2 microni cu bucle mici, uniforme. Număr de bucle 12-14. Capetele treponemului sunt ascuțite sau rotunjite. Treponemele sunt mobile. Au patru tipuri de mișcare. Potrivit Romanovsky - Giemsa sunt vopsite într-o culoare roz pal, așa că sunt numite T. pallidum - treponemă pal. Colorarea slabă se datorează conținutului scăzut de nucleoproteine. Spirochetele pot fi detectate în preparatele colorate cu Burri cu placare cu argint. În plus, ele sunt studiate în stare de viață - într-un câmp întunecat.

Agenții cauzali ai sifilisului nu au spori și capsule (vezi Fig. 4).

cultivare. Treponemele palide sunt foarte solicitante cu mediile nutritive. Pe medii nutritive artificiale, cresc numai în prezența unor bucăți de creier sau rinichi de iepure și a lichidului ascitic. Crește lent, 5-12 zile la o temperatură de 35-36 ° C în condiții anaerobe. Treponemele palide se reproduc bine în embrionul de pui (prin fisiune transversală). Când sunt cultivate pe medii nutritive artificiale, treponemele își pierd virulența. Astfel de culturi sunt numite culturale. Culturile crescute în embrioni de pui se numesc culturi de țesuturi. De obicei, ele păstrează virulența.

proprietăți enzimatice treponema nu au. Cu toate acestea, tulpinile de cultură diferă prin capacitatea lor de a forma indol și hidrogen sulfurat.

formarea de toxine. Nu este instalat.

Structura antigenică. Treponemul palid conține mai multe complexe antigenice: polizaharide, lipide și proteine. Nu au fost stabilite serogrupuri și serovare.

Rezistenta mediului. Treponemele palide sunt instabile. O temperatură de 45-55 ° C le distruge după 15 minute. Sunt rezistente la temperaturi scăzute. Când sunt congelate, se păstrează până la un an. Spirochetele sunt sensibile la sărurile metalelor grele (mercur, bismut, arsen etc.). Concentrațiile obișnuite de dezinfectanți îi distrug în câteva minute. Sunt sensibili la benzilpenicilină, bicilină etc. Sub influența anumitor factori de mediu și a medicamentelor antibacteriene, treponeamele pot forma chisturi. În această formă, ele sunt în organism pentru o lungă perioadă de timp într-o stare latentă.

Susceptibilitatea animalelor. În condiții naturale, animalele nu se îmbolnăvesc de sifilis. Cu toate acestea, la maimuțe, așa cum au arătat I. I. Mechnikov și E. Roux, este posibil să se reproducă tabloul clinic al sifilisului: se formează un șancru dur la locul injectării. S-a demonstrat acum că atunci când iepurii, cobaii sunt infectați, se formează ulcere pe piele la locul injectării sau în altă parte. Pe iepuri, prin pasaje, poți perioadă lungă de timp salvați tulpina izolată de treponem.

Surse de infecție. Un om bolnav.

Căile de transmisie. Contact în gospodărie (contact direct), predominant contact sexual. Uneori sifilisul se poate transmite prin obiecte (vase, lenjerii). De la o mamă cu sifilis, boala se transmite prin placentă la copil (sifilis congenital).

Patogeneza. Porțile de intrare sunt membranele mucoase ale tractului genital și cavității bucale.

Perioada primară - spirochetele intră în membrana mucoasă, iar după o perioadă de incubație (în medie 3 săptămâni), la locul introducerii se formează un ulcer, care se caracterizează prin margini dense și un fund - un șancru dur. Formarea unui șancru dur este însoțită de o creștere a ganglionilor limfatici. Perioada primară durează 6-7 săptămâni.

Perioada secundară - agenții cauzali ai sifilisului se răspândesc în tot corpul prin căile limfatice și circulatorii. În același timp, pe piele și mucoase se formează rozeola, papule și vezicule. Durata acestei perioade este de 3-4 ani.

A treia perioadă - se dezvoltă cu sifilis netratat. În această perioadă, în organe, țesuturi, oase și vase se formează creșteri de granulație - gume sau infiltrate gingioase, predispuse la carii. Această perioadă poate dura câțiva ani (într-o formă latentă). Pacientul în această perioadă nu este contagios. Cu sifilisul netratat (în unele cazuri), după mulți ani, pot apărea leziuni ale sistemului nervos central: cu leziuni cerebrale - paralizie progresivă, cu leziuni măduva spinării- uscăciune dorsală. Aceste boli apar atunci când treponemul este localizat în țesutul cerebral, ceea ce duce la modificări organice și funcționale severe în organism.

Imunitate. Nu există imunitate naturală. Cu sifilis, se dezvoltă imunitatea infecțioasă „nesterilă”. Se numește șancru, deoarece un șancru dur nu se formează în timpul reinfectării, dar se dezvoltă toate perioadele ulterioare. În sifilis sunt detectate IgC și IgM, precum și reagine IgE, care, în prezența unui antigen cardiolipidic, leagă complementul.

Prevenirea. Muncă sanitară și educațională, depistarea precoce a pacienților cu sifilis. profilaxie specifică. Nedezvoltat.

Tratament. Penicilină, bicilină, biochinol etc.

întrebări de testare

1. Descrieți morfologia și metodele de colorare a spirochetelor.

2. Ce este un șancru dur?

3. Ce material pentru cercetare vei lua perioade diferite boala sifilisului?

4. Care este imunitatea pentru sifilis?

Cercetare microbiologică

Scopul studiului: depistarea treponemului palid și serodiagnostic.

Material de cercetare

1. Conținutul șancrului dur (perioada primară).

2. Conținut de roseola, papule, vezicule (perioada secundară).

3. Sânge (perioade secundare, a treia și a patra).

Metode de cercetare de bază

1. Microscopic.

2. Reacția de imunofluorescență (RIF).

3. Serologic: 1) Reacția Wasserman (RSK);

2) reacții sedimentare.

4. Reacția de imobilizare a treponemului (RIT).

Diagnosticul serologic

Reacția lui Wasserman. Reacția este stabilită conform principiului reacției de fixare a complementului (Tabelul 52). Diferă prin faptul că un antigen nespecific poate fi utilizat în reacția Wasserman. De exemplu, un extract de lipoid dintr-o inimă de bovină este un cardioantigen. Datorită nespecificității anticorpilor care reacționează cu acest antigen, aceștia se numesc reagine. Reacția cu un antigen nespecific se explică prin faptul că crește conținutul de globuline din serul sanguin al pacientului și se modifică gradul de dispersie a acestora. Globulinele, intrând în combinație cu extractele lipidice, formează un complex care leagă complementul și, prin urmare, nu are loc hemoliza (în sistemul hemolitic). Absența hemolizei - o reacție pozitivă - confirmă serologic diagnosticul de sifilis. La stabilirea reacțiilor serologice este necesară și utilizarea antigenelor specifice din treponeamele tisulare și cele culturale.

Notă. 1) ++++ întârziere completă a hemolizei; - hemoliza; 2) antigenul nespecific nr. 1 (fracțiunea lipoidă a unei inimi de bovină); 3) antigene specifice nr. 2 si 3 preparate din culturi de treponem.

Reacții sedimentare. 1. Reacția Kahn. Serul pacientului este inactivat la 56°C timp de 30 de minute. La antigen (extract lipidic de inimă bovină) se adaugă 0,6% colesterol pentru a crește sensibilitatea reacției (Tabelul 53).

Luarea în considerare a rezultatului: apariția precipitațiilor se notează ca o reacție pozitivă.

2. Reacția Sachs-Vitebsky (reacție sedimentară citocolică) este o modificare a reacției Kahn. Autorii au folosit un antigen mai concentrat, la care se adaugă colesterol, care contribuie la formarea mai rapidă a precipitatului.

Testul de imobilizare a treponemului (RIT). Aceasta este cea mai specifică reacție în diagnosticul de sifilis.

În prezent, a fost dezvoltată o metodă pentru această reacție: se obține o suspensie de treponeme dintr-un testicul zdrobit al unui iepure infectat cu T. pallidum și depozitată într-un mediu special care nu inhibă mobilitatea treponeamelor. În eprubetă se adaugă 1,7 ml dintr-o suspensie de treponeme tisulare, se adaugă 0,2 ml ser de testare, 0,1 ml complement proaspăt.

Controale: în eprubeta 1, în locul serului testat se adaugă serul unei persoane sănătoase; în al 2-lea - se toarnă ser inactivat porcușor de Guineea. Toate eprubetele sunt plasate într-un desicator sau anaerostat, umplute cu un amestec de gaze (1 volum de dioxid de carbon și 19 volume de azot) și plasate într-un termostat la 35 ° C. Apoi materialul de testat este aplicat pe sticlă și mobilitatea. a treponemelor este studiată într-un câmp întunecat. Principiul reacției este că serul unui pacient cu sifilis în prezența complementului inhibă mișcarea treponemului palid. Determinați procentul de treponem imobilizat.

Rezultatul este considerat pozitiv dacă treponemele imobilizate sunt peste 50%; slab pozitiv - de la 30-50%; negativ - sub 20%.

întrebări de testare

1. Pentru ce material este folosit diagnostic de laborator sifilis în diferite perioade ale bolii?

2. Care sunt metodele cercetare de laboratorîn diagnosticul de sifilis?

3. Ce antigene ar trebui utilizate în reacția Wasserman?

4. Ce ingrediente sunt necesare pentru a efectua testul de imobilizare a treponemului (RIT)? Ce material este luat din subiect, ce este determinat în el?